作者:杜艳; 陈复生; 陈晨; 刘营 期刊:《食品科学》 2020年第04期
采用紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法和实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)等检测DNA浓度、纯度、完整性和反应灵敏度,综合评价Nucleo试剂盒、Wizard试剂盒、Dneasy试剂盒、Ezup试剂盒、Dzup试剂盒和十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)法对大豆蛋白及大豆籽粒中DNA的提取效果,旨在筛选出适用于大豆分离蛋白(soybean protein isolate,SPI)、大豆浓缩蛋白(soybean protein concentrate,SPC)及大豆籽...
作者:苏宗义; 王绘翔; 隋青; 李彩虹; 刘新勇 期刊:《中国性科学》 2019年第09期
目的了解大连地区皮肤性病科门诊患者单纯疱疹病毒(HSV)的感染现状及特点,并探讨各种方法学对单纯疱疹病毒(HSV)的诊断价值。方法选取2015年至2017年大连市皮肤病医院诊治的1 600例(男性、女性各800例)初诊疑似生殖器疱疹患者作为研究对象。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中HSV1和HSV2的IgG、IgM抗体,其中200例有典型症状的生殖器疱疹患者同时采用实时荧光聚合酶链式反应技术(FQ-PCR)对其进行核酸检测。结果 1 600例疑似可能感...
作者:李云; 史玲莉; 刘荐男; 闫冀焕; 聂维忠; 刘淑萍 期刊:《中国媒介生物学及控制》 2017年第05期
目的了解河北省秦皇岛口岸褐家鼠携带汉坦病毒情况及其基因型。方法褐家鼠标本于2016年7月28日采自河北省秦皇岛港渤海船务有限公司货堆区和生活区,运用实时荧光PCR检测标本汉坦病毒核酸并进行核苷酸同源性和进化树分析。结果从1只褐家鼠中检测到汉坦病毒核酸阳性,经汉坦病毒S基因序列测定和同源性分析,与国内外汉城型(SEO型)汉坦病毒相似性较高(87.3%~97.9%),与汉滩型(HTN型)汉坦病毒及其他类型汉坦病毒相似性较低(〈55%...
作者:钱俊平; 郭梁; 海小; 郭元晟; 雅梅 期刊:《肉类研究》 2018年第12期
通过检测肉制品中DNA的来源进行动物源性检测是打击鲜肉及加工肉制品制假掺假的重要技术手段。依据GB/T 25165-2010《明胶中牛、羊、猪源性成分定性检测方法实时荧光PCR法》合成用于Taq Man实时荧光聚合酶链式反应的引物和探针,利用鲜肉及加工肉制品进行羊源性成分定性和定量检测方法研究。首先利用12种不同动物鲜肉组织的DNA检测方法的特异性,然后以羊源DNA梯度稀释液为模板进行灵敏度实验,最后在加工肉制品中检测方法的适用性和...
作者:向国锋; 于德山; 李国强; 李玉凤; 甘志强; 赵桂良; 聂振元 期刊:《疾病监测》 2018年第06期
目的分析2014-2017年甘肃省酒泉市外环境中禽流感病毒监测结果,为人感染H7N9禽流感预警和防控提供依据。方法采集酒泉市各县(区)集贸市场活禽销售点的不同类型标本,应用实时荧光聚合酶链式反应方法进行检测,并进行统计学分析。结果共检测外环境标本1 091份,流感病毒核酸阳性率为21.17%(231/1 091);H9N2、H7N9及两者混合阳性分别为162、51、18份,未检出H5亚型病毒。2014-2016年流感病毒核酸阳性率分别为3.23%、22.05%和31.32%,...
作者:刘二龙; 卢丽; 吕英姿; 蒋湘; 李立霞; 李嘉琪; 杜雅萍; 郑高彬 期刊:《中国食品卫生》 2017年第05期
目的实现转基因鲑鱼AquAdvantage的标识管理,建立其品系特异性实时荧光聚合酶链式反应(PCR)检测方法。方法针对转基因鲑鱼的品系特异性序列设计引物和TaqMan探针,建立转基因鲑鱼实时荧光PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行检测。结果建立的转基因鲑鱼实时荧光PCR方法特异性强,在600 000-60拷贝范围内呈良好的线性关系,其线性回归方程为y=-3.2194x+40.805,R2=0.997,检测限为60拷贝,检测重复性良好。结论建立的...
作者:王紫薇; 汪琦; 赵晓娟; 韩笑; 刘莉; 魏咏新; 陈鑫; 杨丽莉; 曹嘉悦; 徐蕾蕊; 吕敬章; 曾静 期刊:《中国食品卫生》 2018年第02期
目的对北京市市售海产品的创伤弧菌污染情况进行调查,并比较实时荧光聚合酶链式反应(RT-PCR)法与VITEK鉴定方法检测结果的一致性。方法采用传统检验方法结合分子生物学方法对在北京市市场随机采集的105份海产品进行创伤弧菌检验,并比较了RT-PCR法和VITEK鉴定方法的准确性。结果 105份海产品中,有40份样品检出创伤弧菌,检出率为38.10%;其中,虾类产品检出率高达52.38%(11/21),其次为贝类产品(37.88%,25/66)和鱼类产品(22.22%,...
作者:章晶晶; 杜利强; 李永艳; 李顺才; 齐艳玲; 李永波; 张岩; 周巍 期刊:《现代食品科技》 2017年第08期
根据狐狸线粒体基因组中的保守序列和貉子线粒体D-loop基因保守序列设计狐狸、貉子特异性引物和Taq Man探针,建立一种基于实时荧光聚合酶链式反应的肉及肉制品狐狸、貉子源性成分测定方法,通过特异性、灵敏性、线性检测对该方法体系进行检验和评价。本研究建立的狐狸、貉子源性成分实时荧光聚合酶链式测定方法体系具有良好的特异性及灵敏性,最低可检测0.5 pg/μL纯狐狸DNA和5 pg/μL纯貉子DNA。本研究建立的狐狸貉子源性成分荧光PCR...
作者:肖其胜; 杨捷琳; 杨惠琴; 丁卓平; 何宇平 期刊:《食品科学》 2016年第20期
根据双歧杆菌属16S rRNA基因的保守区序设计特异性引物和探针,建立一种鉴定食品中双歧杆菌属的实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法.对方法的特异性、灵敏度、重复性和体系抗干扰能力进行验证,最后采用该方法对市售25 份标示含双歧杆菌样品进行检测.结果表明:该检测方法可特异性检测双歧杆菌属细菌,对近缘的乳杆菌属、链球菌属及食品中常见菌群包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等均无扩增.双...
作者:张欠欠; 仵恒立; 胡军婷; 成俊珍; 任勇; 杨晗; 马莹 期刊:《中国微生态学》 2016年第09期
目的了解延安市非淋菌性尿道炎(NGU)患者解脲支原体(Uu)和沙眼衣原体(CT)感染状况及其特点。方法采用实时荧光聚合酶链式反应技术(FQ-PCR)对388例临床确诊的NGU患者的泌尿生殖道分泌物同时作Uu DNA和CT DNA检测。结果 388例NGU患者阳性检出率为62.11%,其中Uu、CT和混合感染的阳性检出率分别为23.20%、21.13%和17.78%。不同性别在不同病原体感染中有所差异,总体上女性感染率高于男性,但差异无显著性(P〉0.05);Uu单一感染...
作者:蒋丹; 郑秋月; 赵昕; 王刚; 曹际娟 期刊:《分子科学学报》 2009年第05期
针对芝麻Sesamum indicum2S albumin mRNA基因设计引物、探针,在实时荧光PCR仪上进行扩增、检测和分析.结果显示:该组探针和引物对芝麻有很强的特异性,除黑芝麻和白芝麻外,其余6种对照材料均未检测到荧光信号,黑白芝麻成分检测灵敏度达到0.1%.该方法具有灵敏度高、快速、简便的特点,可用于芝麻致敏原成分的定量检测.
作者:周彤 李家鹏 田寒友 杨君娜 邹昊 乔晓玲 期刊:《肉类研究》 2013年第12期
为了建立一种基于实时荧光聚合酶链式反应的肉及肉制品猪源性成分含量测定方法,分别以猪线粒体DNA的NADH4基因和16S rRNA基因为靶位点设计猪特异性引物、探针和通用引物、探针,建立猪源性成分含量测定方法,通过特异性、灵敏性、线性、准确度及市售肉制品检测,对该方法体系进行检验和评价.结果表明:建立的猪源性成分含量实时荧光聚合酶链式反应测定方法体系具有良好的特异性及灵敏性,最低可检测到0.4pg/μL纯猪肉DNA;无论是猪特异性...
将荧光染料——叠氮溴乙锭(ethidium bromide monoazide,EMA)与实时荧光-聚合酶链式反应(real-time poly-merase chain reaction,RT-PCR)技术相结合,对其在RT-PCR定量检测海产品中致病性副溶血弧菌活细胞中的应用进行研究。纯培养条件下,在2.2×102~2.2×107CFU范围内细胞数的常用对数值与Ct值之间呈严格的负相关性,并且不添加EMA时的检测灵敏度(22CFU)略大于添加EMA(2.2×102CFU)时的检测灵敏度;人工污染牡蛎样品,利用RT-PC...
作者:索标 滕要辉 史贤明 艾志录 期刊:《食品科学》 2012年第10期
为了能够高效检测食品中的亚致死损伤沙门氏菌,首先采用热激胁迫的方法得到亚致死损伤沙门氏菌细胞,进而基于选择性增菌培养液SEL建立一种实时荧光聚合酶链式反应检测技术。结果表明:在SEL中经过20h增菌培养后,无论是否经过修复培养,1~2CFU/5mL SEL的亚致死损伤细胞都能得到完全修复并增菌至109CFU/mL水平;依此建立的实时荧光聚合酶链式反应检测技术的纯菌扩增效率为95.41%,检测限为4CFU/反应体系,在人工污染碎食品样品中的检测...
作者:李富威 张舒亚 叶军 于翠 包建强 印丽萍 期刊:《食品科学》 2013年第12期
根据香蕉叶绿体rbcL基因序列,选择高度保守区域设计特异性引物和探针,建立食品中香蕉成分检测的实时荧光聚合酶链式反应检测方法。结果显示,该组引物探针对香蕉有很强的特异性,除香蕉外,其余55种对照样品均未检测到荧光信号:该检测方法对食品中香蕉成分的检测灵敏度为0.0001ng/μL香蕉DNA和0.001%(m/m)香蕉粉。该方法能对食品中香蕉成分进行准确、快速的检测,具有特异性好,灵敏度高的优点。
作者:王丹 赵琳娜 胡凤月 吴鹏 韩月贝 杨红莲 期刊:《食品科学》 2013年第14期
为了从植物油中检出动物成分,在前人对引物研究结果基础上,自行设计2条动物线粒体16S rRNA基因特异性探针,采用实时荧光聚合酶链式反应检测技术对5份分别掺有猪油、牛油、羊油、鸡油和鱼油的大豆油样本进行检测。结果表明:5份模拟掺假大豆油中的动物线粒体16S rRNA基因片段均可被特异性检出,说明鉴别方法可靠;该法能检测出大豆油中0.05%的动物油脂成分,是一种很敏感的检测方法。
作者:李进波 李想 谌鸿超 潘良文 李正 宋青 期刊:《食品科学》 2013年第20期
根据鲑亚科鱼类生长激素基因保守序列设计特异性引物和探针,建立了一种鉴定食品中鲑亚科鱼类成分的实时荧光聚合酶链式反应(PCR)方法。结果表明:建立的检测方法高度特异于鲑亚科鱼类检测,鲑科的另两个亚科——白鲑亚科和茴鱼亚科样品均无扩增曲线。采用5种常见鲑亚科鱼品种可稳定检测到的最低DNA量为100pg;分别将大西洋鲑鱼和北极红点鲑鱼肉混入玉米、鸡肉和鲫鱼样品中测定的相对灵敏度为0.01%(m/m)。检测方法的重复性测试...
作者:张蕾 曾静 魏海燕 马丹 程晋霞 张西萌 张海予 期刊:《食品科学》 2014年第04期
采用副溶血性弧菌单克隆抗体、纳米免疫磁分离技术,结合实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,建立海产品中副溶血性弧菌纳米免疫磁分离-实时荧光PCR检测方法。副溶血性弧菌纳米免疫磁珠在菌体浓度为10^3CFU/mL水平时,对副溶血性弧菌的捕获率达到74%。在纯培养、无需增菌情况下,该方法检测灵敏度达到140CFU/mL;通过134株副溶血性弧菌和74株非目标菌的测试,实时荧光PCR技术具有良好的特异性...
作者:曹际娟 徐君怡 曹冬梅 张丕桥 栾凤侠 刘洋 期刊:《食品科学》 2014年第08期
目的:建立实时荧光聚合酶链式反应检测转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2品系的鉴定方法.方法:以转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2为研究对象,在转基因小麦外源片段与小麦染色体重组的边界序列分别设计引物和探针,以其他多种转基因产品和非转基因小麦为对照进行特异性实验,以B73-6-1样品模拟制备10个含量梯度的添加样品进行灵敏度实验.结果:本研究设计的引物和探针具有很好的品系鉴定特异性,检测灵敏度可达到0.01...
作者:潘克女 张永乐 徐爱芳 王琴 刘苑 刘寿荣 期刊:《中国卫生检验》 2016年第05期
目的建立快速、准确、特异的检测细菌16S rRNA基因的实时荧光PCR法。方法根据Taq Man探针技术实时荧光PCR反应原理结合细菌16S rRNA基因序列,在高保守区域设计通用引物和特异性探针,对10种标准菌株及15种临床培养分离菌株进行PCR检测,优化反应体系,评价该方法的特异性、灵敏度、重复性,并对187份标本采用培养法和实时荧光PCR法进行检测比较。结果 10种标准株和15种临床培养株采用通用引物检测全阳性,9株革兰阳性菌株通过革兰阳性探...