作者:刘小青; 严琼英; 陈国培; 王远洋; 肖承荣; 张永鑫; 陈晶 期刊:《食品工业科技》 2020年第01期
目的:建立副溶血性弧菌的RPA-exo荧光探针快速检测方法。方法:采用重组酶聚合酶扩增技术,以irgB为靶基因设计副溶血性弧菌的RPA-exo引物探针,对引物探针进行组合筛选,建立RPA-exo荧光探针快速检测方法,并对其特异性、灵敏度、模拟污染实验及实际应用效果进行测试。结果:建立的方法15 min可获得结果,具有高特异性,无交叉反应;灵敏度为1.0×10^3 CFU/m L,DNA检测限为0.35 pg/μL,质粒检测限为1×10^3 copies/μL;模拟污染实验中加入终浓...
作者:王潇; 曹琛福; 黄超华; 林彦星; 花群义; 贾伟新 期刊:《动物医学进展》 2018年第11期
为了建立一种简便、快速的禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)H7亚型的检测方法,根据GenBank中禽流感病毒H7亚型的HA保守序列,并按照RPA引物探针的要求,设计多对引物及探针,通过条件的优化,建立禽流感病毒H7亚型RT-exoRPA检测方法,并与实时荧光定量PCR方法进行比较。特异性试验结果显示,该方法特异性强,只有禽流感病毒H7亚型出现特异性曲线;灵敏性试验结果显示,该方法能检测到禽流感病毒H7亚型最低浓度为0.24×10-3μg/mL,与实时...
作者:刘立兵; 南汇珠; 孙晓霞; 姜彦芬; 王金凤; 王建昌 期刊:《食品科学技术学报》 2018年第01期
为实现简便快速地检测蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus),根据Gen Bank中蜡样芽胞杆菌16 S RNA序列设计特异性引物和exo探针,建立了一种实时荧光重组酶聚合酶扩增方法,在39℃恒温下仅需20 min即可完成检测。该方法特异性扩增蜡样芽胞杆菌16 S RNA基因片段,对其他芽胞杆菌和非芽胞杆菌无扩增;以蜡样芽胞杆菌基因组DNA作为模板,该方法的检测灵敏度为1.0×10^-3ng/μL,同已发表的real-time PCR方法一致。人工污染实验表明,当大米饭中蜡样...
作者:梅晓宏; 田晶晶; 张洋子; 杜再慧; 张媛; 许文涛 期刊:《分析化学》 2018年第12期
铜是生命的必需元素,是某些活性蛋白的辅基,而过量的铜具有一定毒性,可导致肝炎、胃肠炎、肺炎等病症。因此对Cu2+的灵敏定量检测十分必要。本研究建立了一种基于双重脱氧核酶的比色生物传感器,用于灵敏、特异性定量检测Cu2+。此生物传感器包含两种具有不同功能的脱氧核酶:Cu2+依赖性的切割型脱氧核酶与G-四链体脱氧核酶。当待测物中存在Cu2+时,Cu2+依赖性的切割型脱氧核酶被切割,用于特异性信号识别;经末端转移酶诱导形成G-四链体...
作者:梁玉林; 刘秀; 周振森; 周鹏飞; 尹建军 期刊:《微生物学通报》 2018年第10期
【背景】沙门氏菌是世界上最常见的食源性致病菌之一,全球每年沙门氏菌中毒事件居细菌性中毒事件首位。【目的】建立反转录-环介导等温扩增(Reversetranscriptaseloop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术特异性检测沙门氏菌。【方法】针对沙门氏菌特异保守invA基因设计多组引物,通过对引物筛选和反应条件优化,建立了检测沙门氏菌的实时荧光RT-LAMP方法。利用沙门氏菌及其人工污染脱脂乳样品,研究了方法的特异性和灵...
作者:葛航; 吴朦晨; 张明洲; 俞晓平 期刊:《分析测试学报》 2019年第07期
快速可靠的食源性致病菌检测方法是保障食品安全的关键。然而,传统培养法的检测周期过于冗长,无法适应对时间敏感度较高的现场或在线检测。为此,研究人员开发了多种以快速和高灵敏度为主要特征的等温扩增技术及相应的检测产品,为食源性致病菌的现场或在线检测提供了强有力的技术支撑。该文对环介导等温扩增、滚环扩增、链置换扩增、切口酶信号扩增、核酸外切酶Ⅲ辅助扩增5种等温扩增方法的原理及其优缺点进行了梳理和比较。在此基...
作者:袁伟; 廖凌; 童淑梅; 康晓平 期刊:《中国国境卫生检疫》 2019年第04期
作为一项快速、高效、便捷的等温核酸扩增技术,重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术运用在病原体检测研究中,表现出灵敏度高、特异度好、用时短、应用广泛、操作简单等优势,有望应用于口岸病原体现场快速检测。本文在对比几种等温核酸扩增技术的基础上,重点介绍RPA技术原理和方法,以几种国境口岸重点关注病原体为例,探讨RPA在病原体检测、生物反恐、移动实验室方面的研究进展,为口岸卫生检疫工作提供...
作者:赵云虎; 覃晓琳; 杨结仪; 陈文韬; 廖仪文(综述); 郑和平(审校) 期刊:《国际检验医学》 2019年第07期
DNA在生命活动中具有重要意义,针对DNA检测技术日益增多,近些年一种无酶等温高效的超灵敏扩增技术,杂交链反应(HCR)逐渐引起广泛的关注。HCR,仅在特定的核苷酸引发物(NI)和两个特殊设计的发夹DNA(H1,H2)同时存在的情况下进行自组装,实现了原位扩增反应。由于NI,H1,H2的可编辑性及可修饰性,使得HCR适用于分子生物学的各个领域,具有广泛的应用前景。该文通过HCR在核酸检测、蛋白检测、细胞检测及生物成像等方面的应用进展来探究其优...
作者:刘立兵; 王建昌; 经美; 王金凤; 袁万哲 期刊:《中国畜牧兽医》 2017年第11期
试验旨在建立一种简单、快速检测猪细小病毒(porcineparvovirus,PPV)的重组酶聚合酶(recombinasepolymeraseamplification,RPA)检测方法,为中国PPV的防控和诊断提供一种新的、可靠的技术支持。本研究基于PPVVP2基因的保守序列,设计合成1对RPA引物探针,通过对反应时间的优化,建立38℃恒温水浴锅检测PPV的RPA方法。结果表明,所建立的RPA方法在38℃水浴锅中恒温反应30min,能够特异性的检测PPV;以重组质粒pPPVVP2作为模板,RPA的检测限...
作者:王金凤; 张若曦; 刘立兵; 李睿文; 孟令宅; 顾文源; 韩庆安; 王建昌; 袁万哲 期刊:《中国兽医科学》 2019年第06期
本研究基于猪瘟病毒(CSFV)5’UTR保守序列,设计特异性引物,建立了可快速检测CSFV的反转录重组酶聚合酶扩增检测方法(reverse-transcription recombinase polymerase amplification,RT-RPA)。该方法在40℃下恒温20 min即可完成反应;且特异性强,与其他瘟病毒和猪的重要病原无任何交叉反应。以体外转录的CSFV RNA为模板,该方法的检出下限为10~2copies。采用RT-RPA方法和实时荧光RT-PCR(real-time RT-PCR)方法同时对57份临床样品进行CS...
作者:刘立兵; 王建昌; 耿云云; 王金凤; 袁万哲 期刊:《中国预防兽医学报》 2018年第04期
为建立伪狂犬病病毒(PRV)野毒和疫苗毒的快速鉴别检测方法,本研究基于PRV gB和gE基因保守区域设计引物,建立了一种双重重组酶聚合酶扩增方法(RPA)。本研究所建立的双重RPA方法在38℃水浴锅中恒温反应20min,能够在同一个反应体系中实现对PRV野毒和疫苗毒的特异性鉴别检测,而与其它常见的猪病毒没有交叉反应。所建立的双重RPA方法对PRV gB和gE基因的检测限均为10^2拷贝,并且与荧光定量PCR方法检测限一致。通过对4株不同PRV株和37...
作者:贾玄; 李凯; 董美; 金芜军; 李亮; 苗朝华; 刘卫晓; 宛煜嵩 期刊:《分子植物育种》 2017年第12期
水稻作为最重要的粮食作物之一,其转基因安全性一直受到各国政府和人民的广泛关注。为了保障和引导公众对转基因水稻的正确而全面的认识,转基因生物安全检测工作必不可少。在目前的转基因检测工作中,核酸扩增技术是最为常用的检测方法。PCR技术是最成熟、应用最广泛的一种核酸扩增技术。然而,PCR技术对温控条件的极度依赖性制约它在田间的现场快速检测。本研究以转基因水稻PA110-15为对象,建立了重组酶聚合酶等温扩增及DNA试纸条联...
作者:李宏宇; 王爽; 周剑惠; 陈超; 季尚玮 期刊:《中国实验诊断学》 2015年第04期
流行性腮腺炎(简称腮腺炎)是由腮腺炎病毒(Mumps Virus,MuV)感染引起的急性呼吸道传染病,经空气飞沫传播,全年均可发病,以冬春季高发,人类是该病毒的惟一宿主,好发于儿童和青少年,传染性仅次于麻疹和水痘,是一种在全球流行的急性传染病,临床以腮腺非化脓性肿胀、疼痛伴发热为主要症状。2004-2006年我国的腮腺炎爆发占公共卫生事件的20%左右[1,2]。
作者:吴昊; 谢文佳; 王艳丽; 郭良起 期刊:《食品科技》 2017年第10期
根据家猪线粒体细胞色素b的核苷酸序列设计和筛选实时荧光定量重组酶聚合酶扩增(Real time recombinase polymerase amplification,real-time RPA)反应所需的引物和探针,优化反应参数(Mg~(2+)和引物浓度),建立了一套利用real-time RPA技术进行肉及肉制品中猪源性成分的鉴定方法。应用此方法可以检测出肉及肉制品中低至0.2%的猪源性成分,且能够在恒温的条件下(40℃)15min中内完成反应,克服了传统聚合酶链式反应(Polymeras...
作者:郭燕华; 王德莲; 刘冬虹; 聂炎炎 期刊:《粮食与油脂》 2017年第07期
应用重组聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA),根据玛卡特异性基因defensin序列设计筛选了1对可用于扩增的引物,建立了玛卡及其加工产品特异性源性成分的RPA检测方法。该方法具有较高的灵敏性,检测灵敏度达到0.1 ng/L以上,操作方便,可以在室温条件下完成反应,检测可在0.5 h内完成,极大缩短了检测时间,适用于市场上玛卡及其制品的快速鉴别。
作者:曹雪锋; 康晓平; 李裕昌; 张森; 户义; 李靖; 吴晓燕; 杨银辉 期刊:《解放军医学》 2017年第06期
目的建立五种出血热相关病毒,即扎伊尔型埃博拉病毒、苏丹型埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙病毒和黄热病毒的一步法重组酶聚合酶等温扩增(RPA)技术,为病原体的确定提供现场快速检测方法。方法通过基因组序列分析,选择每种病毒的特异核酸片段作为检测靶基因,针对靶基因序列设计RPA检测的引物和探针;取系列稀释的模板基因进行RPA检测,确定其灵敏性;取出血热相关病毒核酸为模板进行RPA检测,确定其特异性;验证不同温度反应条件(37~4...
作者:王耕; 张薇; 陈安东; 王振超 期刊:《食品安全导刊》 2016年第9X期
作者:杨柳; 张一; 边忠博; 陈宇飞 期刊:《食品安全导刊》 2016年第4X期
作者:杨劲; 蔡挺; 徐岱; 娄国强; 孟忠华 期刊:《中华检验医学》 2006年第11期
当前乙型肝炎病毒(HBV)的全球感染形势依然严峻,流行病学评估目前世界上有4亿多慢性感染者,高流行区域如我国人群感染率〉15%,基因型分布以B、C型为主。HBV的病毒载量与感染状态密切相关,寻求快速、简便、灵敏、特异的定量手段是对HBV早期诊断、病程监控及流行病学调查的需求。本研究在Notomi T的环介导等温扩增(LAMP)技术基础上,建立起HBV DNA等温扩增的定量检测体系。
作者: 期刊:《中国医疗器械信息》 2014年第06期
日前蓝谱公司推出两款食品安全检测试剂盒——沙门氏菌核酸检测试剂盒和军团菌核酸检测试剂盒。 沙门氏菌核酸检测试剂盒将预培养后的菌进行核酸提取,以沙门氏菌属保守的侵入性相关基因invA为靶基因设计引物进行环介导等温扩增,包括核酸提取和扩增步骤,能在1小时内特异性检测出食品中的沙门氏菌。