首页 期刊 解放军医学 五种出血热病毒重组酶聚合酶等温扩增方法的建立 【正文】

五种出血热病毒重组酶聚合酶等温扩增方法的建立

作者:曹雪锋; 康晓平; 李裕昌; 张森; 户义; 李靖; 吴晓燕; 杨银辉 安徽医科大学研究生学院; 合肥230032; 军事医学科学院微生物流行病研究所; 病原微生物生物安全国家重点实验室; 北京100071
重组酶聚合酶检测   等温扩增   出血热病毒  

摘要:目的建立五种出血热相关病毒,即扎伊尔型埃博拉病毒、苏丹型埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙病毒和黄热病毒的一步法重组酶聚合酶等温扩增(RPA)技术,为病原体的确定提供现场快速检测方法。方法通过基因组序列分析,选择每种病毒的特异核酸片段作为检测靶基因,针对靶基因序列设计RPA检测的引物和探针;取系列稀释的模板基因进行RPA检测,确定其灵敏性;取出血热相关病毒核酸为模板进行RPA检测,确定其特异性;验证不同温度反应条件(37~42℃)对检测结果的影响。结果五种出血热病毒的RPA反应体系均可有效扩增靶基因,灵敏性为1.5×10^2~1.5×10^3copies/反应,与其他出血热相关病毒的核酸无交叉反应;RPA实验在37~42℃均可实现靶基因的有效扩增。结论建立了五种出血热病毒的RPA等温扩增体系,该体系反应快速,温度范围宽,适用于现场快速检测。

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