作者:于平; 徐超超; 朱鹏志 期刊:《应用与环境生物学报》 2018年第02期
原生质体融合技术是一种重要的微生物育种方法. 以能产碱性果胶酶的枯草芽孢杆菌ZGL14为出发菌株,探讨影响其原生质体制备和再生的主要因素. 通过研究菌龄、溶菌酶浓度、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂的pH值、再生培养基类型和培养方式等对枯草芽孢杆菌ZGL14原生质体制备与再生的影响,确定其最优化条件. 结果显示:枯草芽孢杆菌ZGL14原生质体制备的最优条件为菌龄9 h,溶菌酶浓度0.2 mg/mL,酶解时间10 min,酶解温度32 ℃,...
作者:张延新; 刘开启; 夏振远; 李天飞 期刊:《植物保护》 2005年第05期
研究了菌龄、渗透压稳定剂、酶的种类及浓度、酶解时间和再生培养基等因素对淡紫拟青霉菌IPC菌株原生质体形成和再生的影响,结果表明,IPC菌株原生质体形成的最适宜条件为:菌龄20h,用5 mg/mL蜗牛酶,0.8 mol/L NaCl的渗透压稳定剂,酶解2~3 h;原生质体涂布于含0.6 mol/L NaCl、0.5%琼脂的再生培养基上,再生率最高.
作者:刘璐; 高原; 杜双田; 田梦媛; 耿缘 期刊:《食用菌》 2017年第05期
以香菇菌株YJ-01为试材,以原生质体产量与再生率为指标,探究酶种类、酶解时间、酶解温度、pH、稳渗剂种类、稳渗剂浓度及菌丝菌龄等7个因素对原生质体产量与再生率的影响。通过单因素试验,选出了4个因素(酶解温度、酶解时间、菌龄和稳渗剂浓度)利用四因素二次通用旋转设计进行优化。结果表明:(1)YJ-01原生质体最佳制备条件:pH 5.0,0.5 mol/L MgSO_4溶液作稳渗剂,对5日龄菌丝体于28℃条件下酶解3 h。各因素对原生质体产量的影...
作者:宁萌; 向凌云; 冯菲; 刁文涛; 陈晓飞 期刊:《河南科学》 2017年第07期
为进一步改善绣球菌栽培特性、提高栽培产量,对绣球菌原生质体制备与再生条件进行了初步探索.以绣球菌原生质体再生量为指标,对等渗剂、酶反应温度、pH和反应时间等影响因素进行了优化.结果表明,采用2%的溶壁酶溶解绣球菌菌丝细胞壁,制备原生质体的最佳条件是,以0.6 mol/L蔗糖为等渗剂,在30℃、pH值6.0环境下反应3 h.在此条件下,原生质体的再生量为11 850个/mL.
作者:张伟; 杨晓野; 王瑞; 祝晓蕊; 王新芳; 梁萌 期刊:《菌物学报》 2017年第03期
为了更准确快捷地评价利用酶解法酶解捕食性真菌Duddingtonia flagrans菌丝产生的原生质体数量及菌丝细胞壁降解情况,采用活体荧光染料羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE),对该捕食性真菌菌丝酶解后产生的原生质体进行荧光标记,分别考察了标记浓度、标记时间、孵育温度对原生质体标记效果的影响,并观察CFSE标记后的原生质体再生情况。结果表明CFSE终浓度为10μmol/L,标记时间为15min,孵育...
作者:康宁; 蓝秀万; 陈保善 期刊:《植物病理学报》 2007年第01期
病毒与宿主相互作用中,存在宿主主动或被动摆脱病毒的机制。本研究用光照诱导-单孢分离、原生质体再生和菌丝尖端分离3种方法对携带低毒病毒的板栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)的EP721、EP713和Euro7三个菌株的脱毒效率进行了比较。结果表明:经光照诱导-单孢分离后所有菌株均可获得脱毒菌株,而原生质体再生对EP721的脱毒效率最高,是继光照诱导-单孢分离脱毒法之后另一种新的有效的脱毒方法,特别适用于不产孢的真菌脱毒...
作者:王杰; 林俊芳; 云慧芬; 张凯; 郭丽琼 期刊:《华南农业大学学报》 2007年第03期
用酶解法对草菇原生质体制备及再生条件进行了研究.结果表明: 液体静置培养4 d的菌丝,以0.6 mol/L的甘露醇作渗透压稳定剂,溶壁酶质量浓度15 mg/mL,34 ℃下酶解3 h,原生质体制备率最高;草菇原生质体预培养16 h后涂布在再生培养基上,再生率最高.同时,采用PEG法将潮霉素抗性基因转入草菇的原生质体中,经过抗性筛选,得到了具有潮霉素抗性的草菇转化子.
作者:朱宏莉; 宋纪蓉; 张嘉; 杨彬彬; 徐抗震; 黄洁; 杨明琰 期刊:《食品科学》 2006年第08期
本文通过研究酶浓度、酶的作用时间、菌龄、菌体预处理等不同凶素对原生质体形成与再生的影响,得出了果胶酶产生菌ZH-g原生质体制备和再生的最佳条件:加入0.6μg/ml的氨苄青霉素进行菌体预处理,选用对数生长期的菌株,以1.2mg/ml溶菌酶37℃保温处理2h,原生质体形成率为92%,再生率达50.7%。
本文研究了不同菌龄、预处理时间、酶解时间、酶浓度等对产黄青霉菌原生质体制备率与再生率的影响,确定了有利制备率与再生率提高的最佳条件。
作者:韩文霞; 刘迪; 陈二方; 曹海燕; 詹花; 朱宏莉 期刊:《微生物学通报》 2009年第12期
本文通过研究酶组合、酶浓度、酶作用时间和菌龄等因素对天麻素产生菌华根霉(Rhizopus chinensis)LN—A原生质体制备和再生的影响,总结出了原生质体制备和再生的最佳条件:选用对数生长期的菌株,以蜗牛酶5mg/mL+纤维素酶5mg/mL+溶菌酶2mg/mL30℃保温处理2h,原生质体形成率达5.8×10^7,原生质体再生率为5.7%。在此基础上首次利用He—Ne激光、紫外线复合诱变天麻素合成菌的原生质体,当选用15mw的He-Ne激光辐射原生质体...
作者:匡逢春; 郑重谊; 谭周进; 谢达平; 肖冰梅; 谢丙炎 期刊:《生物技术通讯》 2008年第05期
目的:为了提高再生率,对影响革兰阳性菌枯草芽胞杆菌KR株和革兰阴性菌荧光假单胞菌B13株原生质体再生的因素进行研究。方法:研究了酶解时间,再生方式,再生培养基中稳定剂的种类,Ca^2+、Mg^2+、琥珀酸钠、L-色氨酸的浓度及培养基的放置时间对KR和B13株原生质体再生的影响。结果:对KR株酶解20min,采用夹层培养,再生培养基中加入0.6mol/L蔗糖、0.03mol/L Ca^2+、0.02mol/L Mg^2+、0.3mol/L琥珀酸钠、0.2mol/L L-色氨酸,培养基...
作者:李淼 曾柏全 冯金儒 期刊:《中南林业科技大学学报》 2013年第12期
研究青霉菌Penicillium Q5和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis K3原生质体制备与再生的最佳条件。采用酶解法制备了青霉菌和枯草芽孢杆菌的高质量的原生质体。试验对亲本菌株的菌丝生长,酶浓度,酶解时间和灭活时间进行了优化。亲本菌株Q5,培养液中加入浓度0.5%甘氨酸和含量10%的蔗糖处理后,在质量浓度均为10 mg/mL的溶菌酶和蜗牛酶(1︰1)酶解作用下,35℃处理3 h,原生质体生成量达到最大值,为7.35×106cfu/mL;亲本菌株K3,用4 U/mL的...
作者:何祥凤 李薇 Abebe Jenberie Wubie 薛菲 国占宝 周婷 徐书法 期刊:《基因组学与应用生物学》 2013年第06期
为建立高效稳定的蜜蜂球囊菌似scosphaeraapis)遗传转化体系,构建具有不同表型特征的球囊菌转化子,本实验对影响蜜蜂球囊菌菌株原生质体制备及再生的因子进行了系统的研究,同时对蜜蜂球囊菌原生质体的释放及再生过程进行了显微观察。结果表明,采用液体培养基进行24h培养的蜜蜂球囊菌菌体,在28℃条件下,应用50mg/mL的崩溃酶,经4h酶解所制备的原生质体释放量最大,达到34.00×10^5/mL。在上述条件下,采用0.8mol/L柠檬酸...
作者:张建萍 朱凯 杨爽 周勇军 余柳青 期刊:《浙江农业学报》 2010年第01期
禾长蠕孢菌(Helminthosporium gramineum f. sp. echinochloae,HGE)是稗草生防潜力菌,为建立HGE的遗传转化体系,研究了菌龄、胞壁降解酶、稳渗剂等对其原生质体制备和再生的影响。结果表明,HGE菌原生质体制备的适宜条件为:26℃下采用1.0%崩溃酶处理菌龄为6h的HGE菌丝体2h,0.7mol/LNaCl为稳渗剂。原生质体再生的适宜条件为:32℃下采用0.5%崩溃酶处理菌龄为16h的HGE菌丝体4h,0.7mol/LNaCl为稳渗剂,R1为高渗再生培养基。
作者:蒲顺昌 李春如 汪小艳 黄勃 樊美珍 李增智 期刊:《安徽农业大学学报》 2008年第03期
对细脚拟青霉RCEF3456菌株原生质体的形成和制备有影响的多个因素,如菌丝生长时间、酶种类、酶浓度以及酶解时间等进行研究。结果表明,得到制备原生质体的最佳产量(8.0×10^7个·mL^-1)的方法是培养18 h的菌丝、1%溶壁酶+1%Cellulase“Onozuka”R-10+1%蜗牛酶、酶解2.5 h,而且,酶解过程都是在30℃条件下进行的;同时,对原生质体的形成以及再生过程进行显微观察,再生率为1.2%。
通过单因素和正交试验,研究了菌龄、酶浓度、酶解温度及渗透压稳定剂等因素对酒酒球菌原生质体制备及再生的影响。确定其制备与再生的最佳条件为:菌龄34h,酶浓度1mg/mL,酶解温度37℃,0.8mol/LKCI为渗透压稳定剂,再生培养基也添加0.8m01/LKCI,在此条件下,其原牛质体形成率与再生率之积为10.65%。
作者:郑斐 马妮 田威 陈光 何建勇 期刊:《沈阳药科大学学报》 2008年第12期
目的研究阿卡波糖产生菌原生质体制备与再生的条件。方法通过溶菌酶破壁的方法制备原生质体,考察影响原生质体制备与再生的因素。结果和结论确认原生质体的制备条件为:一级培养采用SM2液体培养基,培养时间为33h,转二级培养的转种体积分数为15%;二级培养采用R2YE培养基,培养时间为20h,甘氨酸质量分数为0.7%;溶菌酶作用质量浓度为3g·L^-1,作用时间100min,最大原生质体制备量达到8×10^10个·L^-1。考察了原生质体再生培养...
作者:詹萍 苏龙 周乃东 期刊:《安徽农业科学》 2010年第03期
[目的]初步探讨红酵母原生质体制备和再生的条件。[方法]以红酵母为试材,研究渗透压稳定剂pH值、酶浓度、酶解时间、预处理时间4个因素对红酵母原生质体制备率和再生率的影响。[结果]pH值在6.5~7.0,原生质体的制备率和再生率随着渗透压稳定剂pH值的升高而上升。当酶浓度从0.2%上升到1.0%时,原生质体制备率上升较快,而原生质体再生率下降较慢。随着酶解时间的增加,原生质体的制备率逐渐增加,而原生质体的再生率逐渐下...
通过研究菌龄、菌体预处理、渗透压稳定剂及含有不同渗稳剂的再生平板等不同因素对酿酒酵母1450原生质体制备的影响,确定了其原生质体制备的条件:菌龄为6h,预处理剂为PB+0.1%EDTANa2+3%β-巯基乙醇,采用1mol/L山梨醇为渗透压稳定剂,再生培养基添加0.5mol/L蔗糖为稳定剂,在此条件下,其原生质体形成率达99.85%,再生率达14.31%。
作者:祁咏春 徐军庆 高艳华 李峰 袁建国 期刊:《食品与药品》 2013年第01期
目的研究高产谷氨酰胺的黄色短杆菌原生质体制备和再生的最佳条件。方法用青霉素和甘氨酸预处理黄色短杆菌后,用溶菌酶酶解,研究菌龄、青霉素和甘氨酸预处理浓度及时间、酶浓度、酶解时间、酶解温度等条件对原生质体制备和再生的影响。结果原生质体制备和再生的最佳条件为:预处理处于对数生长早期的黄色短杆菌,青霉素最适浓度0.4u/mL,甘氨酸浓度2%,预处理时间2h,酶浓度1mg/mL,酶解时间12h,酶解温度37℃。结论在最佳条...