生物技术通讯杂志 省级期刊

与福氏2a志贺氏菌2457T株ArgT相互作用蛋白的筛选及鉴定

作者：曹晓玉; 赵格; 朱力; 刘先凯; 李娜; 何建勇; 王恒樑 刊期：2008年第05期

目的：筛选、鉴定与福氏2a志贺氏菌2457T株ArgT相互作用的蛋白，以进一步研究ArgT在福氏2a志贺氏菌致病过程中发挥的作用。方法：将ArgT与GST融合表达，通过体外GST沉降实验和MALDI-TOF MS技术，筛选并鉴定与福氏2a志贺氏菌2457T株ArgT相互作用的蛋白。结果：筛选并鉴定到与福氏2a志贺氏菌2457TArgT相互作用的蛋白OmpR。结论：OmpR与ArgT存在体...

端粒、端粒酶结合因子hPinx1基因启动子的克隆及活性分析

作者：马航航; 黄君健 刊期：2008年第05期

目的：克隆端粒、端粒酶结合因子hPinx1基因的启动子，分析并鉴定其活性调控元件。方法：采用PCR技术从人肝癌细胞系HepG2基因组中扩增出hPinx1启动子，构建到萤光素酶报告基因载体pGL3-basic中，确定所扩增的DNA序列，在HepG2细胞中检测其活性。结果：克隆了hPinx1基因转录起始位点上游4661bp且序列正确；活性分析表明hPinx1启动子含有多个调控...

一个新的前列腺癌细胞系分泌蛋白磷酸甘油酸酯激酶的鉴定与分析

作者：庞博; 钱晓龙; 武瑞琴; 李山虎; 施庆国; 陈文政; 邵政坤; 周建光 刊期：2008年第05期

目的：建立前列腺癌细胞系C4-2B分泌蛋白双向电泳图谱，并对感兴趣的蛋白进行质谱鉴定，对其表达调控进行初步分析。方法：收集前列腺癌细胞系C4-2B的分泌蛋白，利用双向电泳结合质谱的方法对感兴趣的蛋白进行鉴定，而后利用Western blot等方法对结果进行验证和分析。结果：得到较为稳定的前列腺癌细胞系分泌蛋白C4-2B双向电泳图谱，鉴定了一个...

用基因芯片筛选前列腺癌LNCaP和C4-2细胞系中差异表达的基因

作者：谢棒祥; 涂智杰; 李山虎; 施庆国; 庞博; 武瑞琴; 周建光 刊期：2008年第05期

目的：筛选与前列腺癌进展相关的功能基因。方法：利用Affymetrix公司的人类金基因组U133A芯片，筛选在前列腺癌细胞系LNCaP和C4-2中差异表达的基因，并用RT-PCR方法验证部分差异基因的表达。结果：芯片筛选结果表明，与LNCaP细胞系相比，C4-2细胞系中217个基因转录本表达上调，101个基因转录本表达下调；对其中45个基因进行了RT-PCR验证，证明3...

利用RNA干扰抑制细丝蛋白A基因的表达

作者：杨志伟; 王健; 谢棒祥; 钱晓龙; 潘大仁; 周建光 刊期：2008年第05期

目的：构建细丝蛋白A（FLNa）基因的小干扰RNA（siRNA）表达载体，并观察其对FLNa基因表达的抑制作用。方法：利用RNA干扰（RNAi）技术设计并合成1条针对FLNa的siRNA，将其克隆到siRNA表达载体pSilencer4．1-CMV-hygro中；将重组质粒pSilencer-FLNa、pSilencer-negative（阴性对照）转染293T人胚肾细胞，通过Western印迹检测FLNa的表达；通过潮...

细菌黏附素序列模体分析

作者：岳俊杰; 谭明峰; 周围; 王夏; 李北平; 王月兰; 梁龙 刊期：2008年第05期

目的：认识细菌黏附素序列保守的特征，更好地理解细菌黏附的机理。方法：利用InterProScan、MEME等分析工具对实验确认的155条细菌黏附素序列进行模体搜索。结果：用InterProScan在155个黏附素序列中搜索到119个模体，通过MEME分析发现了50个模体。结论：发现了一些与黏附功能相关的模体，为在细菌基因组内搜索黏附素序列奠定了基础。

鼠疫耶尔森氏菌rV270抗原的克隆、表达及其免疫保护作用评价

作者：王棠; 祁芝珍; 吴本传; 朱紫雯; 杨永海; 崔百忠; 戴瑞霞; 张青雯; 邱业峰; 王祖郧; 王虎; 郭兆彪; 杨瑞馥; 王效义 刊期：2008年第05期

目的：为研制鼠疫亚单位疫苗，克隆、表达并纯化去除产生免疫抑制作用序列后的鼠疫耶尔森氏菌LcrV抗原（rV270）。方法：依据已知的LcrV的核苷酸序列，避开其产生免疫抑制作用的区段设计引物，扩增rV270基因并克隆到pET24a载体中，在大肠杆菌BL21中表达His-rV270融合蛋白：表达产物先后经Co^2＋亲和层析和Sephacryl S-200HR凝胶柱纯化，并在纯化...

胞壁表达HSP65-IL-2融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌的构建和鉴定

作者：栗文彬; 师长宏; 张海; 张廷芬; 王丽梅; 赵勇; 白冰 刊期：2008年第05期

目的：获得胞壁表达结核分枝杆菌热激蛋白65（HSP65）和人白细胞介素2（IL-2）融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌。方法：将HSP65和IL-2融合基因克隆入大肠杆菌-卡介苗（E．coli-BCG）穿梭质粒pCW，构建成重组质粒HSP65-IL-2-pCW，电穿入耻垢分枝杆菌，经潮霉素抗性筛选和PCR方法选取阳性克隆；用间接免疫荧光法对重组耻垢分枝杆菌进行表型鉴定；用重...

雌激素受体β潜在磷酸化位点突变体的构建及其活性测定

作者：周岩; 丁丽华; 程龙; 游松; 叶棋浓 刊期：2008年第05期

目的：构建雌激素受体（ER）β潜在磷酸化位点突变体,并在人胚肾细胞293T中检测其对ERβ下游基因转录的影响。方法：通过ERα和ERβ序列同源性比对,寻找ERβ的潜在磷酸化位点;以pcDNA3-ERβ-FLAG为模板,通过重组PCR,将ERβ264位、469位Ser编码基因突变为Ala编码基因,将突变片段连接到同样双酶切的pcDNA3-FLAG载体中,Western blot检测其表达;将重组质粒...

雌激素受体β真核表达载体的构建及其转录活性

作者：李勤操; 何宝祥; 杨智洪; 丁丽华; 李杰萍; 张浩; 袁斌; 叶棋浓 刊期：2008年第05期

目的：构建雌激素受体（ER）β的哺乳动物细胞表达载体,并检测其转录活性。方法：利用PCR扩增带有Flag标签的人类ERβ全长编码序列,将扩增片段克隆到哺乳动物细胞表达载体pIRESpuro2中,得到重组质粒pIRESpuro2-Flag-ERβ;用Western blot鉴定Flag-ERβ重组蛋白在人胚肾293T细胞中的表达;用含雌激素应答元件（ERE）的报告基因系统检测Flag-ERβ的转录活...

蛋白质微阵列（蛋白质科学与技术丛书）

刊期：2008年第05期

一种基于EGFP的、安全的抗HIV药物评价系统

作者：安小平; 张昕; 陈锦辉; 刘大斌; 张宝中; 程远国; 童贻刚 刊期：2008年第05期

目的：建立基于EGFP的、安全的抗人免疫缺陷病毒（HIV）药物评价系统。方法：用增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因替代HIV感染性克隆质粒pUC18-HIV-NL4-3中的部分包膜基因（env）,构建重组假病毒质粒pUC18-NL4-3-EGFP,将其与水疱性口炎病毒糖蛋白（VSV-G）真核表达载体共转染人胚肾293FT细胞,观察绿色荧光蛋白的表达,同时用该细胞培养上清进一步感...

基因枪介导真核表达质粒转染体外培养的COS-7细胞系的实验研究

作者：张亮; 阎瑾琦; 马继尧; 王浩; 刘宁; 贾锐; 韩刚; 董金凯; 田仁礼; 于继云 刊期：2008年第05期

目的：建立基因枪子弹制备及转染体外培养COS-7细胞系的方法。方法：以亚精氨、氯化钙沉淀法制备子弹（DNA＋金颗粒）,利用原子力显微镜观察子弹制备情况;采用基因枪方法分别将真核表达质粒pVax-Dsred-IRES-EGFP转染对照组和实验组COS-7细胞,转染后24h,利用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞中红、绿荧光蛋白的表达。结果：制备了基因枪子弹,DNA紧密...

2型猪链球菌假想转运蛋白89k/pTP与毒力的相关分析

作者：袁媛; 路玲玲; 李文君; 郑玉玲; 姜永强 刊期：2008年第05期

目的：构建2型猪链球菌假想转运蛋白89k/pTP的基因插入失活突变体并进行毒力相关分析。方法：首先将同源臂片段克隆到pSET4s质粒上,构建插入失活载体pSET4s-pTP,并通过对单交换的筛选获得89k/pTP的基因插入失活突变体,再用小鼠腹腔感染模型对突变株和野生株的毒力进行比较。结果：获得了89k/pTP的基因插入失活突变体,并发现其毒力与野生型相比明...

可产酸快生小菌的分离鉴定

作者：常翠云; 张惟材; 熊向华; 何建勇; 赵岩; 汪建华 刊期：2008年第05期

目的：鉴定在实验过程中分离到的一株生长快速,并且可以将L-山梨糖转化为2-酮基-L-古龙酸的菌株。方法：将快生小菌传代,并进行产酸、抗菌谱、山梨糖脱氢酶活性等分析,通过PCR方法扩增并分析16S rDNA。结果：在传代过程中还分离得到了不产酸菌株;从快生小菌中扩增得到了普通酮古龙酸菌16S rDNA;从产酸菌中能够扩增得到包含酮古龙酸菌和乙酸钙不...