作者:施江; 辛莉; 郭永新; 陈春艳; 郁飞燕 期刊:《生物学通报》 2009年第04期
3基因的反向生物学阶段 近20年来,由于重组DNA技术的完善和应用,人们已经改变了从表型到基因型的传统研究基因的途径,而是直接从克隆目的基因出发,研究基因的功能及其与表型之间的关系,使基因的研究进入了反向生物学阶段。
作者:程林梅; 曹秋芬; 黄静; 孙毅; 高洪文; 王红宝 期刊:《草业学报》 2004年第06期
研究了影响农杆菌GV1301菌株介导的菊苣遗传转化的几种因素,建立了菊苣高效遗传转化体系,获得了转基因抗性苗.结果表明,采用菊苣叶片,经预培养和共培养2 d,农杆菌浸泡时间为5~7 min,卡那霉素20 mg/L,头孢霉素600 mg/L,最高转化频率达7.1%,经PCR检测,目的基因已整合到菊苣基因组中.
现代分子生物学技术及实验技巧 本书系统介绍了现代分子生物实验技术。第1~6章包括质粒的提取和目的基因的获得、基因的克隆和重要分子的筛选以及目的基因的表达和检测;第7~14章涉及近年来发展起来的一些新技术,
本书系统介绍了现代分子生物实验技术。第1~6章包括质粒的提取和目的基因的获得、基因的克隆和重要分子的筛选以及目的基因的表达和检测;第7~14章涉及近年来发展起来的一些新技术,包括报告基因分析、差异基因表达谱分析、蛋白质一核酸相互作用技术、蛋白质一蛋白质相互作用技术、细菌体内同源重组技术、转基因动物、
作者:李振宇; 徐开林; 潘秀英; 鹿群先; 何徐彭; 孙海英; 主鸿鹄 期刊:《中华血液学》 2004年第09期
目前很多基因治疗实验中选择造血干细胞(HSC)等非分裂期细胞作为靶细胞.常用病毒性载体为逆转录病毒和腺病毒载体系统[1,2].逆转录病毒只能转导分裂期细胞,腺病毒载体在体内不能实现目的基因稳定的长期表达,且反复应用容易引起免疫反应.来源于人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)的慢病毒载体由于可以感染非分裂期细胞、容纳外源性目的基因片段大、免疫反应小等特点越来越受到人们的重视[3,4].我们成功构建了慢病毒载体的三质粒包装系统并重...
作者:潘云; 李甘地; 刘卫平; 周桥; 张文燕 期刊:《中华血液学》 2005年第10期
目的探讨在石蜡包埋T淋巴母细胞淋巴瘤(T-lymphoblastic lymphoma,T-LBL)组织中检测目的基因HOX11L2表达的可行性及其意义.方法采用RT-PCR及实时荧光定量PCR(RQPCR)方法,对54例T-LBL石蜡包埋标本进行HOX11L2mRNA检测.结果54例中有7例(13.0%)检测到HOX11L2mRNA表达.被检出的7例均为儿童青少年,中位年龄9(5~15)岁,均有前纵隔占位病变,其中5例Ki67增值指数(PI)≥80%,2例病变累及中枢神经系统.HOX11L2表达组与未表达组在发病年龄、Ki6...
作者:刘钰; 南芳芳 期刊:《中国妇幼保健》 2014年第27期
MicroRNA(miRNA)即微小核糖核酸,是一类在进化中保守的单链非编码RNA,能够通过对靶基因蛋白表达水平的调节,从而调控生物体的生长、发育以及凋亡。目前人类30%蛋白质的表达调控与人类基因组中已经发现的650多个miRNA有着密切关系,靶基因表达下调与miRNA与目的基因结合关系密切。
该发明公开了一种快捷的观赏海棠组培苗瞬时基因沉默的方法,将沉默目的基因片段通过酶切连接的方式连接到TRV-GFP载体,转化农杆菌后,通过调整真空抽吸压强和抽吸方式,将携带沉默目的基因的TRV-GFP载体侵染入观赏海棠组培苗中;进一步通过抗生素培养和手提紫外灯荧光筛选,得到观赏海棠沉默阳性株系;沉默目的基因的观赏海棠组培苗阳性植株在侵染7天后,进行表型观察和半定量PCR筛选,从而构建完整的观赏海棠瞬时基因沉默体系。能够快速...
作者:张芳芳; 陈化兰; 陈怀涛 期刊:《动物医学进展》 2004年第05期
随着DNA重组技术的发展和应用,DNA疫苗、病毒和细菌活载体疫苗等基因工程疫苗的研制日益成为医学领域的一大研究热点.DNA疫苗在许多方面优于传统的灭活苗和减毒苗,但其免疫效果的稳定性和确实性方面尚存不足.影响DNA疫苗免疫效果的因素很多,国内外的许多研究者在这方面作了大量有意义的工作.目前,多数研究者主要通过目的基因的选择、促进外源基因在体内表达、改善疫苗导入方式以及辅以免疫刺激序列和免疫佐剂等方面来提高DNA疫苗的...
作者:Michael; L.Edelstein; 李涛; 朱旭东; 黄培堂 期刊:《生物技术通报》 2005年第01期
1导言 1963年,Joshua Lederberg写道:"我们期待着进行体外生殖细胞培养,和染色体及片段的交换.分子生物学最终的应用将是直接控制人类染色体上与目的基因的识别、选择以及整合有关的某些核苷酸序列"[2].仅仅26年后的1989年,Rosenberg等就在位于贝塞斯达市的美国国立癌症研究院癌症治疗部开展了人类第一个基因治疗临床试验[3].
作者:钱垂文; 黄立; 王一飞; 熊盛; 张美英; 李雪玲 期刊:《中国生物工程》 2005年第02期
目的:研究重组工程菌的遗传稳定性.方法:利用重组表达质粒pBVNM-H1转化宿主菌E.coli DH5α,筛选重组工程菌DH5α-pBVNM-H1.将新构建好的重组工程菌在无选择压力的条件下进行连续传代培养,比较菌落在LB(-)和LB(+)培养基上的生长状况,并对传代菌株目标蛋白的表达情况以及质粒数量和目的基因DNA进行电泳鉴定.结果:重组工程菌连续传代50次中,在LB(-)和LB(+)培养基上的生长状况相同,目标蛋白表达量无显著差异,质粒数量及目的基因DNA结构稳...
作者:谢书阳; 张敬之; 任兆瑞 期刊:《中国生物工程》 2004年第10期
慢病毒载体不仅能感染造血干细胞(HSCs),使携带的目的基因整合至HSCs基因组内,且能利用病毒携带的调控元件,使目的基因随HSCs细胞特异性表达,因此是一种有效的感染HSCs和进行基因治疗的工具.主要对慢病毒载体基因组特点、改建过程、慢病毒对干细胞的感染能力、慢病毒携带的目的基因在HSCs内的表达及调控等方面做了简要的综述.
作者:刘琦; 罗阳; 姜莉; 张学 期刊:《中国生物工程》 2004年第09期
应用分子克隆技术,分别将增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)、内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)和编码H-ras基因C端20个氨基酸的DNA(rasc20)片段插入真核表达载体pcDNA3,构建真核重组表达载体并将其命名为pZX.通过脂质体介导将该载体转染人宫颈癌细胞系HeLa,培养过夜后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞内的分布,并与pEGFP-C3质粒DNA转染该细胞系进行比较.结果表明,转染pZX...
作者:韩慧明; 毛建平 期刊:《中国生物工程》 2004年第12期
小分子双链RNA(siRNA)可以高效、特异地沉默目的基因表达,为基因功能研究及基因治疗提供了新工具.近年来研究表明针对基因mRNA不同位点随机设计的siRNA在作用效果上存在差异,siRNA作用效果有序列依赖性,而且与其在基因mRNA上的结合部位的高级结构有关,与反义核酸发挥作用的靶点依赖性类似.这一性质对设计高效siRNA为基因功能和基因治疗研究提供指导作用.
作者:彭远义; 马丽苹; 李春明; 刘生峰; 周泽扬 期刊:《农业生物技术学报》 2005年第01期
从土壤中筛选到产植酸酶活性较高的黑曲霉(Aspergillus niger)菌株03214,其植酸酶最适pH值为1.5和2.5,最适温度为50℃,植酸酶表达量为345 U/mL发酵液.通过对黑曲霉03214植酸酶phyA基因进行PCR扩增,获得了1条长约1.5kb的特异性产物.以pMD18-T为载体,构建了含有目的基因片段的重组质粒.DNA序列测定表明,目的基因片段含有植酸酶phyA基因的完整序列,基因全长1 506bp,其中包含一段长102bp的内含子,编码467个氨基酸,有10个潜在的糖基化位...
作者:庄晓英; 卢钢; 曹家树; 侯大强 期刊:《中国细胞生物学学报》 2005年第04期
化学诱导启动子可以在特定时间和部位激活或抑制目的基因的表达.目前,已经建立了多种化学诱导表达系统,用于基因功能分析、无标记植物转化、特定位点DNA切除、育性恢复和RNA沉默等方面的研究.化学诱导表达系统为基础分子生物学研究和生物技术应用提供了强有力的工具,将大大加快植物转基因技术的应用.
作者:杜国利; 宋长征; 张更林; 孙晓光 期刊:《生物技术通讯》 2005年第03期
转基因植物成本低廉,表达的外源蛋白安全性高,易于大规模生产.建立HIV疫苗的植物表达系统,开辟了HIV疫苗研制的新领域.本文综述了转基因植物表达HIV疫苗过程中目的基因的选择与修饰、载体的构建、受体植物的选定、目的基因的表达、优势与安全性等研究进展.
作者:王传玺; 韩金祥; 鲁艳芹; 高雪芹; 张翠 期刊:《生物技术通讯》 2004年第05期
在肝脏疾病的基因治疗过程中,为把目的基因定向导入靶细胞,构建了具有靶向性的逆转录病毒的包装细胞,即应用RT-PCR方法分别反转录并扩增env、pres2基因,将它们分别克隆至pGEM-T载体上,经测序正确后,将一目的基因亚克隆在pcDNA3.1(-)表达载体上,然后将另一目的片段从T载体上切下,克隆至经同样酶切的重组表达载体中.从而成功地构建了肝细胞靶向性系统的表达载体pcDNA3.1(-)-env-pres2和pcDNA3.1(-)-pres2-env.