摘要:应用分子克隆技术,分别将增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)、内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)和编码H-ras基因C端20个氨基酸的DNA(rasc20)片段插入真核表达载体pcDNA3,构建真核重组表达载体并将其命名为pZX.通过脂质体介导将该载体转染人宫颈癌细胞系HeLa,培养过夜后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞内的分布,并与pEGFP-C3质粒DNA转染该细胞系进行比较.结果表明,转染pZX载体的实验组细胞膜发出绿色荧光,而对照组绿色荧光则均匀弥散于整个细胞中,工具性载体pZX已构建成功.
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