客车侧围蒙皮是客车车身外表面展示客车品质和外观美化及造型重要平台,其表面平整度决定了客车品质和车身外型造型的效果,高质量的侧围蒙皮可有效提高车身密封、降噪、车身强度等车身性能,客车侧围蒙皮生产在客车整车制造中均属于重点生产工序。
作者:李明亚; 林陈水 期刊:《生物资源》 2016年第02期
冰晶核蛋白(ice nucleation protein,INP)是一种分泌型外膜蛋白,广泛分布于丁香假单胞菌,荧光假单胞菌和其他革兰氏阴性菌中。由于其在相对高温下(-2--4℃)形成冰核的特性,INP最早应用于生物制冷领域。在细菌表面展示技术中,冰晶核蛋白作为运载蛋白得到广泛的应用。与其他的表面技术载体蛋白相比较,冰晶核蛋白具有稳定表达外源蛋白及展示分子量较大的外源蛋白的优点。INP细胞表面展示技术已被应用于全细胞生物催化剂、全细胞吸...
作者:李勇; 梁莉 期刊:《畜牧与兽医》 2018年第12期
选择猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP5和GP3蛋白作为免疫原,将杆状病毒的表面展示系统作为载体,成功构建了重组转座载体pBacSC-GP5与pBacSC-GP3,通过转化DH10Bac,筛选蓝白斑,转染昆虫Sf-9细胞,获得重组杆状病毒BacSC-GP5、BacSC-GP3。重组病毒感染Sf-9细胞后,经Western blot和激光共聚焦显微镜观察,目的蛋白在感染细胞中获得表达,并且成功展示在了感染细胞的质膜上。将重组病毒经蔗糖梯度超速离心纯化后,经Western blot和免疫透...
作者:罗砚曦; 蒋依俐; 阎辉 期刊:《中国细胞生物学学报》 2017年第12期
存活蛋白(survivin)是高度特异的广谱肿瘤相关抗原,利用冰核蛋白(ice nucleation protein,INP)表面展示系统研究在大肠杆菌细胞表面展示人存活蛋白的可行性。将人存活蛋白基因片段和报告基因Cherry融合到冰核蛋白N-端,构建表面展示载体p ET-INP-CHY-SUV并转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌经IPTG诱导后可检测到红荧光,荧光强度在胰蛋白酶的作用下降低,完整细胞ELISA实验及免疫荧光实验可检测和观察到绿荧光,表明人存活蛋白在重...
作者:田淑芳; 王雨; 李春华 期刊:《湖北大学学报·哲学社会科学版》 2018年第01期
在生物转化处理工业中利用细胞表面展示技术表达脂肪酶作为一种全细胞催化形式具有很大优势,因为脂肪酶展示在细胞表面作为一种固定化酶.以超折叠绿色荧光蛋白的羧基端结构域作为锚定区,构建变形杆菌来源的脂肪酶与羧基端结构域的融合基因.将融合基因插入到pETsfGFP表达载体中,得到表面展示载体pETsfGFPLipA.将重组质粒转入大肠杆菌RosettaBlue宿主菌中经自诱导后,利用免疫荧光显微技术和流式细胞仪分析确定脂肪酶成功展示于大肠杆...
作者:张旭; 詹金彪 期刊:《福建医药》 2004年第05期
1985年,Smith GP利用基因工程手段将一段外源肽序列展示在丝状噬菌体的表面[1].1988年[2]他们又将合成的随机序列的寡核苷酸片段克隆到丝状噬菌体,表达后每个噬菌体粒子的表面展示一种肽段,所有这些展示不同肽段的噬菌体构成了噬菌体展示肽库.1990年,他们通过亲合筛选,得到了与特定蛋白结合的结合肽,并由于噬菌体表达的肽与编码基因直接相关,扩增和分离目的克隆后,很容易得到其DNA序列[3].这样就建立了噬菌体表面展示的随机肽库技...
作者:杨华; 樊游; 沈微; 石贵阳; SurenSingh; 王正祥 期刊:《食品工业科技》 2012年第13期
通过PCR技术扩增来源于大麦的β-淀粉酶基因,将其与酿酒酵母细胞壁蛋白d凝集素基因在读框内融合,构建得到表面展示载体pBA-AG,进一步将该重组质粒通过遗传转化,整合到酿酒酵母W303-1A的染色体中,获得了β-淀粉酶经过仅凝集素锚定信号结合到细胞壁上的重组酵母。重组酵母表面展示的β-淀粉酶活力为131U/g干细胞。对展示的β-淀粉酶酶学性质研究表明,其最适反应温度为50℃,最适作用pH为5.0,与游离酶相比,其温度稳定性和pH稳定...
作者:郭波; 郑萍; 谢佩蓉; 吴玉章; 邹强 期刊:《细胞与分子免疫学》 2004年第03期
目的: 研究酿酒酵母细胞表面展示的人衰变加速因子(hDAF), 是否具有天然衰变加速因子的补体抑制活性.方法: 先用正常人血清处理酵母细胞EBY100, 然后用流式细胞仪检测酵母细胞表面C5b-9复合物的沉积和hDAF在酵母细胞表面的表达.结果: 酵母细胞EBY100可直接活化人血清中的补体成分, 导致酵母细胞表面C5b-9的沉积;而表达DAF的酵母细胞表面C5b-9的沉积明显减少.结论: 酵母细胞表面展示的DAF可正确折叠, 并表现出DAF分子的补体抑制活性...
作者:胡亚楠; 刘睿; 吴梧桐; 叶波平 期刊:《中国药科大学学报》 2004年第06期
酵母中约有31%的编码基因与哺乳动物的一些重要功能基因具有很高的同源性,这为人类对生命现象的认识带来了新的思考,并将推动药物作用靶点、药物的毒副作用的研究.文章围绕酵母这种"模式"生物建立的几种技术平台的发展和特点,简要综述了它们在药物研究领域中的应用.
作者:赵敏洁; 蔡海莺; 李杨; 来佳; 张辉; 冯凤琴 期刊:《中国食品学报》 2017年第05期
脂肪酶是一类在工业上应用广泛的酶制剂。传统的脂肪酶生产过程操作复杂,投资较大,使得脂肪酶的价格一直居高不下。脂肪酶的表面展示技术直接将脂肪酶固定在宿主细胞表面,其优点是:1)省去复杂的分离纯化和固定化过程,降低生产成本;2)表面展示技术为脂肪酶的蛋白工程研究提供新的高通量筛选途径;3)部分研究表明展示的脂肪酶作为全细胞催化剂比传统的自由酶以及固定化的脂肪酶具有更高的酶学活性和更好的温度稳定性、有机溶剂耐受性...
作者:苏润雨; 聂伯尧; 袁盛凌; 陶好霞; 刘纯杰; 杨百亮; 王艳春 期刊:《生物工程学报》 2017年第01期
为了比较不同锚钩蛋白基序结合活性,构建新型的鼠李糖乳杆菌颗粒表面展示系统。首先,用热酸处理法制备鼠李糖乳杆菌GEM(Gram-positive enhancer matrix,GEM)颗粒,并通过电镜观察、RT-PCR检测和SDS-PAGE检测鉴定其处理效果;同时,利用大肠杆菌表达了锚定蛋白PA3-EGFP和P60-EGFP并将其与GEM颗粒共同孵育结合;最后,使用免疫印迹、电镜观察、荧光显微镜观察和荧光分光光度法评价鼠李糖乳杆菌GEM颗粒与锚定蛋白的结合效率。结果表明,使...
作者:张柯; 宁德刚; 徐卫东 期刊:《微生物学通报》 2006年第05期
枯草芽孢杆菌芽孢所具有的独特的理化特性及生理特征,使之成为新型的蛋白或酶类药物载体而倍受关注。简介了枯草芽孢杆菌芽孢结构特征,以及诱导机体产生的免疫反应,重点阐述了利用芽孢表面展示技术研制重组外源抗原疫苗,最后对芽孢表面展示外源抗原疫苗的应用前景进行了展望。
作者:潘渠; 胡福泉 期刊:《生命的化学》 2006年第04期
400多种古细菌和细菌有S-层蛋白质,该蛋白质能在菌体表面自装配为规则晶格的单分子表面层(S-层),与菌体以非共价方式连接。S-层作为菌体面对环境的最外层屏障,具有保护、分子筛、维持菌体形状、细胞识别和黏附、毒力因子等功能,是菌体适应周围环境的重要结构。随着遗传、结构、装配和功能等方面研究的逐渐深入,人们意识到了S-层蛋白质潜在的应用价值。其基因的可操作性,独特的自装配特性及其单分子晶体层的结构都很有应用...
作者:田纯见; 毕英佐; 曹永长; 谢青梅 期刊:《中国兽医科学》 2006年第07期
对FMDV3C基因克隆质粒p3C-T进行PCR扩增,获得了口蹄疫病毒3C蛋白酶基因片段,将此片段与T4噬菌体整合质粒pR的EcoR I酶切片段连接,转化E.coli DH5a工程菌,经EcoR I酶切、质粒PCR扩增、插入方向筛选及测序鉴定,成功获得了T4噬菌体重组整合质粒pR-3C。将其转化E.coliE2后,与SOC基因缺失的噬茵体9T4-Z1同源重组,经溶菌酶依赖性筛选,获得了快速溶菌型噬菌体9T4—3C。经噬菌体PCR扩增、SDS-PAGE分析和Western-blot分析,重组噬...
作者: 期刊:《中国建筑装饰装修》 2012年第03期
梅赛德斯奔驰F125!概念车需要展示的是一系列未来技术。但是这些技术都被极具现代感的汽车外部设计所掩盖。在2011德国法兰克福汽车展上,展示遇到的最大挑战就是寻找一种可以将这种技术提到表面展示.让参观者可以看到这些未来技术.可以体验它们的特性。另外一个难点是.整个样车是无法进入的.所以所有的展示必须是远程的。
作者:郭恒; 刘娟; 李慧萍; 王学林; 孙树民; 张茂林; 高丽芳; 徐德启; 刘明远 期刊:《动物医学进展》 2010年第S1期
为验证冰核蛋白表面展示系统的可行性与优越性,将编码狂犬病毒(Rabies virus,RV)主要免疫保护性抗原糖蛋白G基因片段融合到丁香假单胞菌冰核蛋白截断的N端,构建表面展示载体pET28a-INP-RVG。转化大肠埃希菌BL21(DE3)后16℃低温诱导表达,SDS-PAGE检测表明在约78 ku和56 ku处有明细的蛋白带出现,大小与理论值相符。完整细胞ELISA实验结果表明,重组蛋白在大肠埃希菌表面成功展示。为进一步研制基于沙门菌的多抗原表位展示性重组疫苗、...
作者:苏国栋; 张少平; 尹钰; 林影 期刊:《生物技术通报》 2012年第08期
将南极假丝脂肪酶B(CALB)基因N端和C端,分别与酿酒酵母絮凝蛋白(Flo1p)絮凝结构域序列的N端(FS)和C端(FL)融合,构建成脂肪酶毕赤酵母表面展示载体KFS和KFL,并转化毕赤酵母GS115后获得重组子KFS-CALB和KFL-CALB。免疫荧光检测证实脂肪酶已展示于毕赤酵母细胞表面。甲醇诱导120 h后展示酶活性分别达到286 U/g干细胞和182 U/g干细胞。酶的热稳定性较游离酶有较大提高,50℃孵育4 h后KFS-CALB菌株的残留酶活力仍保持初始酶活力7...
作者:李小冬; 杨娜; 万永虎; 吴嘉; 贾东晨; 乔敏 期刊:《中国生物工程》 2012年第08期
目前,表面展示工程作为一种新型的极具应用潜力的技术手段,在组合文库的筛选、蛋白质工程、燃料乙醇的生产和生物修复等技术中已经扮演了极其重要的角色。介绍了表面展示工程在酒精发酵方面的应用,重点阐述酒精发酵过程中酶类展示原理和全细胞催化的应用前景。
作者:谢志丹; 范稳; 贾东晨; 杨娜; 夏振远; 乔敏 期刊:《中国生物工程》 2014年第08期
枯草芽胞杆菌芽胞表面展示技术是把枯草芽胞杆菌作为芽胞表面展示的宿主来展示目的蛋白的一种技术。该技术不仅具备芽胞表面展示技术可展示分子量较大的目的蛋白、目的蛋白无需跨膜及芽胞的极强抗逆性等特点外,同时由于该技术的宿主菌——枯草芽胞杆菌的分子生物学信息研究得比较清楚、安全性高而被广泛应用。介绍了枯草芽胞杆菌表面展示近10年在生产疫苗和固定化酶方面的进展,并对如何提高表面展示目的蛋白的产量做了简要概述。
作者:李慧娟; 邵先祥; 孙云鹏; 高军; 丁瑞; 张碧凝; 张治山; 池振明 期刊:《微生物学通报》 2014年第11期
【目的】蔗糖:蔗糖-1.果糖基转移酶催化1分子蔗糖上的果糖基转移到另一个蔗糖分子上,形成1-蔗果三糖和葡萄糖。在低聚果糖中,1-蔗果三糖益生素活性最高。本研究将该酶展示在酵母菌细胞表面上,并用于1-蔗果三糖的制备。【方法】将来自莴苣的蔗糖:蔗糖-1-果糖基转移酶基因克隆到用于酵母细胞表面展示的表达载体上,并在解脂亚罗酵母菌中进行异源表达,表达的酶展示在该细胞表面上,然后以蔗糖为底物,研究表面展示的蔗糖:蔗糖...