本文分析了引物序列撰写的特点和各个数据库的标引差异,在此基础上,结合实际案例阐述了如何基于专利数据库和非专利数据库检索引物序列的新颖性文件,为引物序列的新颖性文件检索提供了全面高效的检索思路。
作者:曹承和; 汪润生 期刊:《生物学通报》 2009年第10期
体外PCR扩增和体内DNA复制是获得复制DNA的2种途径,它们都依据半保留复制的原理,但因其操作的环境不同,所要求的条件和具体的过程又有所不同。针对高中学生的特点对这2个过程所需要的条件、PCR扩增引物的设计、体内DNA复制冈崎片段的连接方式等进行了分析总结。
作者:胡佳磊; 邵雪玲; 刘思阳 期刊:《生物资源》 2005年第01期
应用RAPD技术对神农架施式巴鲵居群内24个个体进行了遗传多样性分析,探讨引物数量对遗传多样性分析结果的影响,结果表明:遗传多样性分析准确度与引物数量有关,引物数增加到30左右时,PPB(Percentage of polymorphic bands)、Shannon信息指数(Shannon′s information index)、Nei′s遗传多样性指数(Nei′s gene diversity)变化趋于稳定.标准误分析表明,引物数增加到25左右时, 再增加引物, 标准误变化很小.若要客观反映出个体之间的遗...
作者:李艳; 晏鹏 期刊:《滁州学院学报》 2019年第05期
建立一种简便、实用的豹猫物种分子鉴定方法。根据豹猫与中国其它猫科动物的Cyt b基因序列,对位排列分析,设计出1对特异性鉴别豹猫的位点特异性引物组合PB-idF/PB-idR。利用多重PCR扩增方法,结合猫科动物通用鉴定引物组合Fel-uF/Fel-uR,最后根据琼脂糖凝胶电泳的检测结果即可准确鉴别豹猫物种。研究结果显示,引物PB-idF/PB-idR具有高度的豹猫专属性,在野生动物保护及执法工作中具有较大的应用前景。
作者:杨杰; 李兰; 戴莉; 张江国; 莫善明; 徐新龙 期刊:《安徽农业科学》 2019年第23期
[目的]通过将特定转基因检测方法引物和探针序列重组拼接,并将重组序列连接至质粒中,验证其作为转基因检测阳性对照的可行性。[方法]通过搭桥PCR和全基因合成的方法制备阳性重组序列,验证阳性重组序列作为阳性对照品的可行性与阳性重组质粒的均一性、稳定性。[结果]通过将引物探针序列顺序拼接构建得到的阳性重组质粒的性状均一,在4和-20℃条件下均能稳定产生阳性结果。[结论]该种阳性重组质粒的构建方法能够满足转基因成分检测方...
作者:王志勇; 袁学军; 刘建秀; 郭海林 期刊:《草业学报》 2008年第03期
利用正交设计,从Mg^2+、dNTP、引物浓度和DNA聚合酶4种因素3个水平以及不同的模板DNA浓度来优化狗牙根SRAP-PCR反应体系,并对引物进行了全面筛选。狗牙根SRAP—PCR优化反应体系结果为:2μL 10×buffer、40ng模板DNA、Mg^2+ 1.25mmol/L、dNTP260μmol/L、引物0.2μmol/L、TaqDNA聚合酶1.0U,总体积20μL。运用该结果从90对引物中共筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SRAP引物34对。优化体系的建立及其引物的筛选为今后利用SRAP...
本试剂盒根据PCR反应原理,精确提供PCR反应所需的全部试剂(包括TaqDNA聚合酶、PCR反应缓冲液、MgCl2、dNTPs、引物Ⅰ、引物Ⅱ、模板质粒),整个反应过程只需要31rain。具有快速、高效、操作简单方便等优点。
作者:兰金芝; 刘扬; 徐澍; 张金娟; 王欢; 肖俊; 江银辉; 陈腾祥 期刊:《贵州医科大学学报》 2018年第10期
目的:设计人乳头状瘤病毒(HPV)基因芯片的质量控制点,优化质量控制探针和人β珠蛋白基因引物浓度以及HPV引物浓度比例,以提高基因芯片的检测质量。方法:收集临床HPV患者宫颈刮片样本,提取样本HPV58的DNA,用HPV通用引物扩增病毒DNA;利用人β珠蛋白引物扩增样本中的β珠蛋白DNA,将扩增的PCR产物与线性化的pMD18-T载体连接,构建人β珠蛋白和HPV58L1区DNA质粒,转化大肠杆菌后,进行单克隆培养,获得HPV58样本和人β珠蛋白的DNA模板;以HPV5...
作者:张晓飞; 周韧; 杨幼萍; 毛峥嵘; 杨水友; 章锁江 期刊:《中华血液学》 2004年第10期
目的检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)抗原受体基因双重重排的发生率及初步探讨其病理意义和可能机制.方法采用PCR方法,联合使用IgH FR3A及FR2A、TCRγ、TCRβ引物,检测125例NHL患者IgH基因及TCR基因克隆性重排;检测B-NHL和T-NHL中抗原受体基因双重重排的发生率,并对其中的117例NHL患者采用免疫组织化学EnVision两步法检测Ki67蛋白表达并计算增殖指数,分析NHL不同重排类型与增殖指数间的关系.结果联合使用IgH FR3A及FR2A、TCRγ、TCRβ引物,96...
作者:刘小莉; 张爱丽; 赵燕; 孙海林 期刊:《时珍国医国药》 2017年第09期
目的初步从滇丹参转录组文库中筛选出EST序列简单重复序列(SSR)位点,为进一步筛选出多态性丰富的SSR引物奠定基础。方法使用Micro SAtellite(MISA)软件分析滇丹参高通量转录组SSR的分布频率和重复基元的类型特征,利用软件Primer3设计引物,实现SSR引物初次筛选,再使用PCR扩增技术对滇丹参SSR引物进行二次筛选。结果40对引物共有25对出现特异性扩增片段,其中20对扩增产物与预期产物相符度较高。结论利用初步筛选出可用的SSR分子...
本篇文章重点针对PCR的概念,原理和方法的理解,简单介绍了常用的PCR及其相关技术的原理,方法以及应用。
作者:顾佳瑛; 薛超波; 宋蓉; 林昕; 管峰 期刊:《安徽农学通报》 2015年第17期
为了评测物种鉴定PCR体系的特异性及其影响因素,实验对猪源性成分鉴定相关的7对引物就退火温度、镁离子浓度和不同Taq酶的影响进行了研究。结果表明,退火温度和镁离子浓度对PCR特异性有着重要影响,而其中2对引物优化后仍与鼠、兔、牛、羊、鸡和鸭有非特异性扩增。不同的Taq酶对引物特异性也有重要影响,本实验中r Taq酶在7对引物PCR体系中特异性最佳。通过对引物体系的优化和选择不同的Taq酶,可以有效提高特异性,减少非特异性扩增,...
作者:周平兰; 梁满中; 高健; 陈良碧 期刊:《湖南师范大学自然科学学报》 2004年第04期
提取'异9-3'柱头外露棉总基因组DNA,通过花粉管通道法经微量注射导入抗虫棉707-1的胚囊内, D1代田间筛选到柱头外露的转化植株.遗传分析结果表明转化株柱头外露性状由一对隐性基因控制.50个随机引物进行PCR扩增,33个引物扩增出的DNA在供体、受体和转化体之间呈现出多态性,其中引物S462(TCG GCA CGC A)在供体和转化体之间出现相同产物而受体没有出现扩增产物,该引物有可能作为柱头外露系的分子标记.RAPD分析结果表明转化体与受体有...
作者:陈芳; 刘惠莉; 孙红立; 曹祥荣; 李震; 赵立平 期刊:《中国兽医学报》 2005年第01期
为了检测、区分猪传染性胃肠炎(TGE)和猪流行性腹泻(PED),建立了同时检测这2种疾病病原体的多重PCR方法.参考GenBank登录的TGEV和PEDV纤突蛋白S基因序列,经DNAsis 2.0比较分析,分别筛选出TGEV、PEDV S基因相对保守区.以TGEV TH-98株(GenBank登陆号为AF494337)和PEDV CV777株(GenBank登陆号为NC003436)为参考模板,利用软件Primer 3设计合成了2对寡核苷酸引物,以ST细胞培养的TGEV和PEDV毒株核酸为模板,利用所设计的2对引物进行多重RT...
作者:孙一敏; 边艳青; 柏佳宁; 孙继国; 赵宝华 期刊:《中国兽医学报》 2005年第01期
根据国外已发表的新城疫病毒F基因序列,设计了1对引物,并以RT-PCR特异性扩增出新城疫病毒HeB02分离株的F基因,基因产物大小为1.63kb,与设计相符.对其进行序列测定后,与其他标准毒株F48E9、LaSota和Clone30的F基因进行了同源性比较,结果表明,HeB02株与国内标准强毒株F48E9及目前广泛应用的弱毒疫苗株LaSota和Clone30的F基因核苷酸序列的同源性分别为88.1%、84.9%和83.8%.由此可以看出,HeB02分离株与标准毒株和疫苗株相比,在F基因上...
作者:谢芝勋; 庞耀珊; 何竞铭; 邓显文; 唐小飞; 刘加波; 谢志勤; 廖敏; 文雪 期刊:《中国兽医学报》 2005年第01期
研究建立了一种可同时检测对虾白斑综合征病毒(WSSV)和桃拉病毒(TSV)的多重聚合酶链式反应(多重PCR)技术.根据WSSV和TSV基因序列,设计合成了2对分别与WSSV和TSV某段基因序列互补的引物,用这2对引物对同一样品中的WSSV DNA和TSV RNA模板进行多重PCR扩增,结果均同时得到了2条特异的与实验设计相符的306 bp(WSSV)和231 bp(TSV)多重PCR扩增带,而对其他对虾病病原的PCR扩增结果均为阴性;敏感性测定结果表明,该多重PCR技术能检出10 pg的W...
作者:宋艳斌; 马文丽; 郑文岭 期刊:《生物技术通报》 2005年第01期
对测序中的模板、引物、测序反应条件及测序反应纯化方法和仪器操作等进行研究.结果显示测序模板的纯度影响测序的质量,浓度对测序的长度有影响.引物设计时除符合一般设计原则外,Tm值最好在50℃~60℃之间,且无成串的G、C.改变变性、退火、延伸的时间和温度对特殊DNA模板的序列测定有较好的效果.测序反应产物的纯化有几种方法,以70%乙醇沉淀法最经济、方便.因此模板的纯度和浓度对测序成功与否起决定作用.最佳反应条件可降低成本,...
作者:卜莹; 张晓丹; 马涛; 周国华 期刊:《分析化学》 2005年第02期
以人CYP2D6*10等位基因位点为研究对象,建立了一种由5条引物同时PCR扩增在单管中进行等位基因快速检测的新方法.该方法在等位基因特异性扩增法的基础上,在内引物3′端引入了一个人工错配碱基并在5′端附加一段'尾巴'作为引物的锚定部分,使扩增反应的特异性得到了提高.本实验所建立的方法可在单管中同时完成SNP 3种可能等位基因类型的快速检测.实测了47份样品的CYP2D6*10等位基因的类型,并随机对其中20份样品的测定结果用RFLP法进行...
作者:郭兆奎; 颜培强; 万秀清; 李丽杰; 杨谦 期刊:《中国生物工程》 2005年第01期
依据实时定量PCR原理,参照35S启动子、NOS终止子、GUS基因和NPTⅡ基因序列设计TaqMan引物和荧光标记探针.采用美国MJ公司OpticonTM 2荧光定量PCR检测系统对烤后烟叶进行转基因定量检测技术研究,从中筛选出扩增效率高,灵敏度好的PCR引物和探针序列,同时通过对扩增体系,扩增条件的梯度实验,优化出荧光定量检测的最佳反应体系和反应条件,从而建立了转基因烟草定量检测方法.该方法经验证其检测灵敏度达到0.05%.在2003年6月参加CORESTA(...
作者:陈小云; 杨汉春; 郭鑫 期刊:《农业生物技术学报》 2005年第01期
依据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)BJ-4株全基因组序列,分6段设计引物A1F/A1R、A2F/A2R、B1F/B1R、B2F/B2R、C1F/C1R和D1F/D1R,应用RT-PCR技术扩增出其全基因组cDN段.将各cDNA重叠片段A1、A2、B1、B2、C和D分别克隆入pGEM-T Easy载体后,依次连接并克隆到低拷贝质粒载体pWSK29,获得该毒株全长cDNA克隆pWSK DCBA.为进一步研究该毒株的感染性cDNA克隆和深入研究PRRSV的分子致病机理以及发展安全有效的活病毒疫苗奠定了基础.