作者:葛逸盟; 张玉莹; 林怡婷; 姚义凡; 王雪珩; 王月丹 期刊:《生物学通报》 2018年第12期
2018年,美国科学家乔治·史密斯及英国科学家格雷戈里·温特尔爵士分别因对噬菌体展示技术的研究工作,与酶定向进化的实现者美国科学家弗朗西斯·阿诺德分享了诺贝尔化学奖。其中,噬菌体展示技术是利用基因工程方法,将外源性基因片段插入到噬菌体的基因组中,使其编码的蛋白或多肽与噬菌体衣壳蛋白形成融合蛋白,并展示于噬菌体表面的技术。噬菌体展示系统目前已被广泛应用于抗体工程、疫苗研发和多种疾病的诊断与治疗,是现代生物医学研...
在生命数十亿年的发展历程中,进化起到了至关重要的作用。进化是一种伟大的自然力量,因此科学家希望在实验室里模仿生命的进化方法,实现生物大分子(主要是蛋白质)的快速进化。
作者:王乐丹; 李文桔; 胡越 期刊:《中国妇幼保健》 2015年第16期
目的:利用噬菌体7肽库进行体外快速差减筛选(biopanning and rapid analysis of selective interactive ligands,BRASIL),从而获得卵巢癌细胞株SKOV3细胞表面特异性结合短肽。方法:以中国仓鼠卵巢细胞株CHO为吸附细胞,卵巢癌细胞株SKOV3为靶细胞,利用噬菌体展示技术联合差减筛选策略,经过连续5轮生物淘洗,随机挑选100个噬菌体单克隆进行ELISA检测,选取读数〉0.6的单克隆进行DNA测序并序列分析,选择并合成相应短肽,经细胞免疫荧...
作者:袁改玲; 郭媛华; 张俊英; 才学鹏 期刊:《动物医学进展》 2005年第03期
随着噬菌体展示技术自身建库、筛选方法等方面的进一步改进和完善,目前已被广泛应用于生命科学的许多领域,特别是噬菌体表面展示技术在蛋白质相互作用方面的成功应用,为筛选新的结合蛋白提供了一种简单、有效的手段,还为功能基因组学的研究提供了一个新的方法.该技术还在药物研制和疾病机理方面显示出很大的应用潜力,目前已成为筛选对人类疾病有诊断和治疗价值的生物活性分子的重要手段,并已广泛用于癌症、艾滋病、心血管病、组织...
作者:方媛; 徐广贤; 王羡; 王红霞; 潘俊斐 期刊:《中国生物工程》 2018年第12期
目的构建噬菌体天然纳米抗体展示库,以期用于筛选不同抗原分子的纳米抗体筛选平台,并用艰难梭菌谷氨酸脱氢酶(GDH)抗原筛选靶向GDH的纳米抗体,对所构建的噬菌体天然纳米抗体展示库进行验证。方法采用OligoDT提取双峰骆驼脾脏总RNA进行反转录,通过巢氏PCR获取全套重链可变区基因,将其构建到噬菌粒pCANTAB5E载体,经多次电转化至E.coilTG1构建初级噬菌体抗体库,经辅助噬菌体拯救后构成噬菌体展示库,并对噬菌体展示库的库容及多样性进...
作者:蒋芝君; 钱旻 期刊:《生物技术通讯》 2004年第02期
介绍噬菌体展示技术的原理和发展,尤其是噬菌体展示技术在筛选细胞特异分子的策略方面的进展.该技术通过20年的发展已成为一种研究抗原-抗体作用、蛋白质相互作用、蛋白-药物相互作用甚至蛋白质-核酸作用的分析手段,但涉及到以完整细胞、器官或组织等复杂的生物活性分子表面为靶标则筛选效果尚不理想.关键是要减少噬菌体展示分子与靶标的非特异性结合,利用更为严格的经过改进的筛选策略.该技术的优势预示着它将广泛被应用于基础理...
作者:雷黎; 沈际佳 期刊:《国际医学寄生虫病》 2005年第05期
血吸虫是严重危害人类健康的寄生虫之一,近几年噬菌体展示技术为血吸虫病防治研究提供了新的思路和方法,在血吸虫病的诊断、治疗、预防中起到一定的作用,现综述如下.
作者:袁玉峰; 刘志苏; 钱群; 王建军; 何跃明; 吴云华; 郑科炎; 江从庆; 艾中立 期刊:《中华实验外科》 2005年第11期
目的构建人源抗肝癌单链抗体.方法从肝癌患者外周血中分离淋巴细胞,利用噬菌体展示技术,构建人源抗肝癌噬菌体抗体库并筛选人源抗肝癌单链抗体,用ELISA方法检验该抗体与抗原结合活性.结果成功构建了库容为4.0×106的人源抗肝癌单链抗体库,初步筛选到与肝癌细胞特异性结合的单链抗体.结论成功构建人源抗肝癌单链抗体,为进一步临床应用奠定基础.
作者:董利军; 梁忠喆; 刘通; 王大军; 王琦; 杨延辉 期刊:《宁夏医科大学学报》 2019年第06期
目的制备结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)分泌蛋白Rv0674,筛选与Rv0674蛋白特异性结合的肽分子。方法用PCR从MTB(H37Rv)基因组中扩增出Rv0674基因。克隆到pEASY-E1表达载体上,将测序验证正确的重组表达质粒转化入E.coli BL21中,用IPTG诱导蛋白表达,Ni2+亲和层析法纯化目的蛋白。通过SDS-PAGE和Western blot鉴定后,将纯化后的Rv0674蛋白包被到96孔板上,再利用噬菌体展示技术,经过连续4轮特异性亲和筛选,对第4轮产物随...
作者:贾丽艳; 张映 期刊:《猪业科学》 2004年第06期
噬菌体展示技术是近年来在生物工程研究领域中发展起来的一项新技术,该技术将基因型和表现型有效地联系起来,是后基因组工程的有力工具.本文针对噬菌体展示技术中关键的两个环节--噬菌体载体的选择和噬菌体筛选技术的进展作了综述性的介绍.
瑞典皇家科学院10月3日宣布,将2018年诺贝尔化学奖授予美国科学家弗朗西丝·阿诺德和乔治·史密斯以及英国科学家格雷戈里·温特,以表彰他们在酶的定向演化以及用于多肽和抗体的噬菌体展示技术方面取得的成果.
作者:杨艳杰; 成军; 陈东风; 钟彦伟; 张忠东; 王建军; 刘妍 期刊:《解放军医学》 2004年第01期
目的通过筛选乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原基因启动子Ⅱ(SPⅡ)结合蛋白,为HBV复制机制的研究探索新的途径.方法应用噬菌体展示技术,以HBV的表面抗原基因启动子Ⅱ的聚合酶链反应(PCR)产物DNA作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"筛选过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,最后对所筛选克隆进行DNA序列测定和同源性分析.结果噬菌体经富集后,从随机筛选的20个克隆中得到4个阳性克隆,成功构建了克隆载体.序...
作者:钟彦伟; 成军; 张忠东; 杨艳杰; 李强; 董菁; 黄燕萍; 刘敏; 王建军 期刊:《解放军医学》 2004年第01期
目的筛选丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS4A结合蛋白,为HCV致病机制的研究探索新的途径.方法应用噬菌体展示技术,以HCV非结构蛋白NS4A作为固相筛选分子,对T7噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"的筛选过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,最后对所筛选克隆进行DNA序列测定和同源性分析.结果噬菌体经富集后,从随机挑选的12个克隆中得到2个阳性克隆,成功构建了克隆载体.序列测定后经过序列同源性分析,确定了与HCV非结构蛋...
作者:董菁; 王业东; 成军; 皇甫竞坤; 钟彦伟; 杨倩 期刊:《解放军医学》 2004年第01期
目的以乙型肝炎病毒(HBV)前S1蛋白为靶蛋白,寻找其相应的结合蛋白.方法应用T7 cDNA文库噬菌体展示技术克隆与前S1蛋白具有结合作用的蛋白序列,命名为前S1结合蛋白(PreS1BP).将推断的氨基酸序列在蛋白质库中进行搜索,自Gen-Bank中获得结合蛋白的cDNA和基因组的全长序列.结果初步确定PreS1BP即为神经胶质瘤抑制基因区候选基因2(GLTSCR2),cD-NA长为1 436核苷酸,基因位于第19号染色体长臂13.3区(19q13.3),长度11445碱基对(bp),位于19号...
作者:李文桔; 王乐丹; 赵宇 期刊: 2018年第17期
目的利用噬菌体展示技术筛选卵巢癌细胞HO-8910表面特异性结合肽.方法利用噬菌体展示技术筛选卵巢癌细胞株HO-8910,经过3轮生物淘洗,随机挑选21个噬菌体单克隆进行ELISA试验,挑选亲和力高的17个噬菌体进行DNA序列测定,随后利用噬菌体结合实验、免疫细胞染色、免疫荧光染色、竞争抑制等实验鉴定阳性噬菌体的特异性.结果展示短肽MRMTIIN的噬菌体克隆对HO-8910细胞株有较高的亲和力和特异性.结论噬菌体展示技术筛选的短肽MRMTIIN可为...
作者:丁淑燕; 苗向阳; 朱瑞良; 邵建军 期刊: 2005年第09期
通过免疫方法降低猪脂肪含量、提高胴体品质成为人们研究的一个新课题,噬菌体展示技术的完善与发展为实现这一研究目的提供了条件,成为制备高亲和性抗体的有力工具.用猪脂肪细胞免疫小鼠,提取mRNA,反转录成cDNA.通过PCR扩增出重链可变区基因VH和轻链可变区基因VL,再用编码(Gly4Ser)3的Linker将VH 、VL连接在一起,克隆入pCANTAB5E中,转化大肠杆菌,经辅助噬菌体M13K07超感染,构建噬菌体抗体库并进行筛选.
噬菌体展示突变蛋白库是以噬菌粒为载体,对蛋白质序列中的位点(特异或随机)在DNA水平上进行突变而构建的次级文库.突变蛋白库构建策略包括:寡核苷酸介导的直接位点突变、盒式突变、DNA shuffling以及错倾PCR.蛋白突变库主要应用于提高蛋白亲和力、延长半衰期、确定蛋白关键残基.
作者:黄燕萍; 成军; 张树林; 杨艳杰; 高学松; 钟彦伟; 杨瑗; 白桂芹; 蔺淑梅 期刊:《世界华人消化》 2004年第12期
目的:筛选乙型肝炎病毒(HBV)前-前-S抗原基因启动子的结合蛋白。方法:应用噬菌体表面展示技术,以HBV前-前-S抗原基因启动子的聚合酶链反应产物作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮“黏附-洗脱-扩增”的筛选过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,并对所筛选克隆进行DNA测序和生物信息学分析.结果:噬菌体经富集后,从随机筛选的43个克隆中得到20个与HBV前-前-S抗原基因启动子特异结合的阳性克隆,包括人类SMG...
作者:赵岩岩; 赵圣明; 梁颖; 刘贤金; 张浩; 李红波; 屠康 期刊:《食品工业科技》 2017年第14期
随着噬菌体展示技术的发展,其在食品安全领域的应用也越来越多,该技术可以作为一种高效的抗体制备技术应用于食品中常见的抗生素、生物毒素、有害小分子的检测及食源性致病菌控制,同时可以开发有毒待检物的替代品建立绿色检测技术。此外,噬菌体展示技术在新型食品防腐剂开发等方面也具有广阔的应用前景。本文在介绍噬菌体展示技术的基础上,对其在食品安全领域的应用进行了综述。
作者:袁水林; 李欣; 陈红兵; 高金燕; 熊鼎 期刊:《食品工业科技》 2015年第03期
噬菌体展示技术是一项可以在噬菌体颗粒的表面展示外源多肽的体外筛选技术。由于该技术实现了基因和蛋白质的体外统一,现已被广泛应用于生命科学和医学等领域。目前噬菌体展示系统主要有丝状噬菌体展示系统、入噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统和T7噬菌体展示系统。本文主要介绍了噬菌体展示技术以及该技术在八类食物抗原表位分析的应用。