生物技术通讯杂志 省级期刊

乙肝病毒前S1抗原突变体在大肠杆菌中的可溶性表达及鉴定

作者：王海平; 周勇; 王全立 刊期：2004年第02期

乙肝病毒前S1抗原含多个免疫优势表位及乙肝病毒肝细胞受体结合位点,具有重要的生物学功能.为使其高效、可溶性表达,在DnaStar软件辅助分析下,将前S1基因5′端复杂二级结构突变后,克隆入原核表达载体pQE-30a,转化大肠杆菌M15感受态细胞,经IPTG诱导后,获得了高水平、可溶性表达;并对其进行了纯化和鉴定,为进一步研究乙肝病毒前S1抗原的结构功能特...

合成人干细胞cDNA在大肠杆菌中的高效表达与纯化

作者：赵志虎; 马清钧 刊期：2004年第02期

以pBV220为载体,进行了合成可溶型人干细胞因子(SCF)cDNA在大肠杆菌中的温控型的高效表达.SDS-PAGE检测表明,在实验室摇瓶培养中,目的蛋白可占菌体可溶蛋白的40%左右.表达产物复性后,经过凝胶过滤、离子交换层析,得到了电泳纯的重组rhSCF,经测定,纯化的小SCF相对分子质量为19 000,氨基端15个氨基酸的序列与天然可溶形式的hSCF成熟分子的序列完全...

拟南芥MnSOD的原核表达、纯化及抗体制备

作者：王义华; 徐梅珍; 党云琨; 陈珈 刊期：2004年第02期

PCR扩增拟南芥MnSOD cDNA的保守区段,构建pET-SOD重组质粒,转化大肠杆菌JM109(DE3),IPTG诱导融合蛋白高效表达;经检测表达产物占菌体总蛋白的69%,且以不溶的包涵体形式存在;表达产物变性后经Ni-NTA Superflow亲和柱分离纯化,得到相对分子质量约为29 000的PAGE纯蛋白.融合蛋白经还原复性处理后,比活达到200U/mg;免疫家兔制备MnSOD融合蛋白抗体,抗...

人源抗狂犬病毒单链抗体基因原核表达质粒的构建及高效表达

作者：赵小玲; 荫俊 刊期：2004年第02期

在原核系统中高效表达抗狂犬病毒单链抗体scFv41,以便进一步研究其生物学功能,预测临床应用前景.以重组质粒pCANTABscFv41为模板,PCR扩增带NcoI和NotI位点的scFv41基因,克隆入原核表达载体pET-22b(+),酶切鉴定重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.竞争ELISA检测表达蛋白的特异结合活性.酶切鉴定证实scFv41基因已插入原核表达载体pE...

全国医药生物工程2004年学术研讨会及征文通知

刊期：2004年第02期

我国西部1a型丙肝病毒结构区的cDNA克隆和序列分析

作者：祁欣; 贾文祥; 杨春; 杨远; 曾蔚; 陈恬 刊期：2004年第02期

克隆我国西部丙型肝炎病毒全部结构区基因,为探讨HCV的变异和致癌作用,研制丙肝疫苗作准备.从1名西安市丙肝感染者血液中,用Trizol试剂裂解HCV病毒颗粒,用糖原与RNA共沉淀提取HCV RNA,用AMV逆转录酶和随机引物逆转录为cDNA,用RT-PCR方法扩增目的片段并转化到pGEM-T质粒,得到pGEM-T-HCVc、pGEM-T-HCVe1和pGEM-T-HCVe2克隆.将以上3个克隆用特定的...

人源μ型阿片受体与激动剂慢性作用介导的cAMP上调作用研究

作者：刘威; 段海清; 李淑琴; 刘秀丽; 张兆山 刊期：2004年第02期

μ型阿片受体是阿片类药物镇痛与成瘾的分子基础.从人脑组织总RNA通过RT-PCR法扩增获得μ型阿片受体的cDNA,将其克隆至pcDNA3.1(+)中,转染CHO细胞后筛选单克隆细胞株,检测重组细胞株表达的μ型阿片受体与激动剂慢性作用介导的胞内信号转导能力.通过激动剂慢性作用信号转导分析证实,DAMGO能够明显抑制吗啡慢性给药引起的重组细胞株胞内cAMP水平的上...

猪心脏脂肪酸结合蛋白基因PCR-RFLP分子标记研究

作者：庞卫军; 杨公社; 龙火生; 向钊; 张保军 刊期：2004年第02期

利用PCR-RFLP分子标记技术,检测了杜洛克、长白、大白、内江、荣昌、汉江黑、汉白、八眉和野猪共计265头猪心脏脂肪酸结合蛋白基因5′上游区和第二内含子区的遗传变异.结果表明,在Hinfl-RFLP位点上,上述猪种和野猪均存在多态性,等位基因H的频率分别为0.750 0,0.718 8,0.916 7,0.333 3,0.125 0,0.690 9,0.116 7,0.850 0和0.937 5;除汉江黑猪(P＜0...

根癌农杆菌介导的转新城疫病毒融合蛋白基因水稻植株的获得

作者：杨振泉; 刘巧泉; 潘志明; 焦新安 刊期：2004年第02期

利用转基因植物作为生物反应器可以表达重组蛋白、生产外源蛋白质,也可以成为动物疫苗的廉价生产系统.以编码新城疫病毒融合蛋白(NDV-F)的基因为外源基因,以玉米泛素蛋白(Ubi)启动子为启动子,以潮霉素磷酸转移酶(HPT)基因作为选择标记基因,β-半乳糖苷酸酶(GUS)基因作为报告基因构建了适宜于农杆菌介导转化水稻的表达质粒pUNDV,并通过农杆菌介导...

离子交换色谱法对大肠杆菌表达的人重组骨形态发生蛋白-7的纯化

作者：王雪; 宋长征 刊期：2004年第02期

重组大肠杆菌高量表达重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7),每升培养液约得到湿菌体3 g,其中目的蛋白约占菌体总蛋白量的40%.裂解离心,用低浓度变性剂洗涤初步纯化包涵体,上清中无目的蛋白损失;将包涵体溶解于高浓度变性剂溶液中,目的蛋白纯度提高到60%;然后在不同条件下用离子交换色谱法对变性状态下的蛋白质进行纯化,绝大部分杂蛋白被除去,目的蛋...

鸡IL-18成熟蛋白基因的克隆及分子进化分析

作者：王振国; 金宁一; 张洪勇; 尹革芬; 葛淑敏 刊期：2004年第02期

根据已发表的鸡白介素18(IL-18)基因序列设计合成引物,以植物凝集素(PHA)和脂多糖(LPS)激活的AA肉鸡脾细胞mRNA为模板,通过RT-pCR扩增出编码鸡IL-18成熟蛋白的cDNA.将该cDNA克隆于pUCm-T载体,并对其进行测序,结果表明所克隆的核苷酸片段包含了全部成熟蛋白编码基因,成熟蛋白编码区507个核苷酸,编码169个氨基酸.把该基因编码的鸡成熟IL-18蛋白氨...

人成骨肉瘤细胞CD147基因编码区的克隆和序列测定

作者：李存孝; 杨彤涛; 廖博; 范清宇 刊期：2004年第02期

克隆人成骨肉瘤细胞CD147基因编码区并进行序列测定.以人成骨肉瘤细胞系MG63的mRNA为模板,采用RT-PCR方法得到人CD147的编码区cDNA,克隆至载体pcDNA3.1(+)中,酶切鉴定后进行序列分析.结果获得人CD147编码区基因和重组质粒pcDNA3.1(+)/asCD147,并经DNA序列分析证实其序列和文献报道一致.以上结果证明了CD147在成骨肉瘤细胞中也有表达,为进一步进...

一株芦荟抗菌内生细菌的分离鉴定及生物学性质研究

作者：李能章; 彭远义 刊期：2004年第02期

从药用植物中华芦荟组织中分离出一株抗菌内生细菌A11#,该菌产生广谱抗菌活性物质,对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性细菌和植物病原真菌均有较强的抑制作用;通过形态学观察及生理生化特征测定,初步鉴定归属于芽孢杆菌属(Bacillus).该菌在初始pH值为5.O～10.0的PDA培养基上生长旺盛,生长最适pH为5～7,培养液初始pH为6～10时发酵产生大...

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刊期：2004年第02期

重组人骨形态发生蛋白-7与脱钙骨基质复合物双重骨诱导作用的生物学评价

作者：王敏; 韩金祥 刊期：2004年第02期

将不同剂量的重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7)与脱钙骨基质(DBM)分别复合后,植入小鼠股部内侧肌间隙,三周后取材,通过组织学检查、碱性磷酸酶(ALP)及钙含量的测定比较各组的骨诱导活性.结果显示,三组复合物均有骨组织生成,中、高剂量组可见骨小梁、板层骨和原始骨髓腔,血管和骨髓丰富;低剂量组的成骨量明显少于中、高剂量组,且新骨的成熟度低于...