首页 期刊 解放军医学 应用噬菌体展示技术筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A结合蛋白 【正文】

应用噬菌体展示技术筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A结合蛋白

作者:钟彦伟; 成军; 张忠东; 杨艳杰; 李强; 董菁; 黄燕萍; 刘敏; 王建军 100039; 北京; 解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心
噬菌体展示技术   c型肝炎样病毒属   病毒非结构蛋白质类   基因文库  

摘要:目的筛选丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS4A结合蛋白,为HCV致病机制的研究探索新的途径.方法应用噬菌体展示技术,以HCV非结构蛋白NS4A作为固相筛选分子,对T7噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"的筛选过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,最后对所筛选克隆进行DNA序列测定和同源性分析.结果噬菌体经富集后,从随机挑选的12个克隆中得到2个阳性克隆,成功构建了克隆载体.序列测定后经过序列同源性分析,确定了与HCV非结构蛋白NS4A结合的是肝细胞蛋白-丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)激活蛋白激酶5(MAPKAPK5).结论用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到了HCV非结构蛋白NS4A的结合蛋白,为进一步研究HCV的致病机制奠定了良好的基础.

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