首页 期刊 解放军医学 应用噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒表面抗原基因启动子Ⅱ结合蛋白 【正文】

应用噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒表面抗原基因启动子Ⅱ结合蛋白

作者:杨艳杰; 成军; 陈东风; 钟彦伟; 张忠东; 王建军; 刘妍 400042; 重庆; 第三军医大学大坪医院; 解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心
噬菌体展示技术   肝炎病毒   乙型   抗原   表面  

摘要:目的通过筛选乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原基因启动子Ⅱ(SPⅡ)结合蛋白,为HBV复制机制的研究探索新的途径.方法应用噬菌体展示技术,以HBV的表面抗原基因启动子Ⅱ的聚合酶链反应(PCR)产物DNA作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮"吸附-洗脱-扩增"筛选过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,最后对所筛选克隆进行DNA序列测定和同源性分析.结果噬菌体经富集后,从随机筛选的20个克隆中得到4个阳性克隆,成功构建了克隆载体.序列测定后经过同源性分析,确定了和HBV SPⅡ结合的肝细胞蛋白--尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶4(NADHDH4).结论用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到了HBV SPⅡ的结合蛋白,分析了该蛋白的编码基因,为进一步研究HBV的复制、转录、调节机制开辟了新的途径.

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