作者:饶桂波; 邵洪泽; 胡桂学; 吴健敏 期刊:《家畜生态学报》 2014年第05期
为建立一种敏感、自动化,高通量的检测病料中鹅细小病毒(GPV)的PCR-DHPLC检测方法,本研究首先根据GenBank上GPV标准毒株VP3基因序列设计一对引物,建立检测GPV的PCR方法,然后将PCR检测方法与DHPLC法进行有机结合,建立了GPV PCR-DHPLC检测方法。以GPV、鹅副粘病毒、鸭瘟病毒及正常番鸭胚尿囊液进行特异性试验,结果无交叉反应,表明该检测方法具有较高的特异性。对GPV阳性样品检测结果表明该方法的敏感性较高,是常规PCR电泳法的100倍...
作者:王绿娅; 蔺洁; 陈立伟; 潘晓冬; 杜兰平; 秦彦文; 刘舒; 陈保生 期刊:《中华检验医学》 2005年第04期
目的 以变性高效液相色谱(DHPLC),分析检测家族性高胆固醇血症(FH)一汉族家系成员的低密度脂蛋白受体(LDLR)基因突变,以明确诊断。方法 收集临床诊断为家族性高胆固醇血症的汉族一个家系共37名成员,其中30人为一级和二级亲属,7名为亲属配偶作为对照,提取基因组DNA,聚合酶链反应(PCR)方法扩增LDLR基因包含启动子和全部基因编码区(1-18外显子)及临近的内含子序列共21个片段,琼脂糖凝胶电泳鉴定产物。采用DHPLC技术检测了LDLR...
作者:梁建涛; 贾冰冰; 邹俊华; 霍丽蓉 期刊:《北京医学》 2017年第10期
目的探讨脑血管狭窄患者Nf1基因的突变热点及突变方式。方法从全血中提取DNA,采用变性高效液相色谱分析(DHPLC)对5例脑血管狭窄病例进行Nf1全基因突变筛查;对DHPLC检测有差异洗脱峰型的区域进行测序分析。结果 5例无危险因素的脑血管狭窄患者Nf1全基因筛查发现:(1)1例出现5号外显子无义突变位点,c.541C-T;(2)5例均有14号和15号外显子之间内含子的基因突变;(3)4例有7号外显子c.702G-A的同义突变位点;(4)1例出现32号(c.4...
作者:吕炳建; 来茂德; 程蕾; 张宇伟 期刊:《遗传》 2004年第05期
作者:赵芳芳; 张鸣明; 罗玉柱; 李少斌 期刊:《中国草食动物科学》 2019年第04期
SNP(Single nucleotide polymorphism)被认为是揭示遗传变异最理想的遗传标记,广泛应用于疾病相关的基因筛查、动植物经济性状遗传标记、群体遗传进化等。目前,筛查SNP的方法很多,文章旨在比较DHPLC(Denaturing high performance liquid chromatography)和PCR-SSCP(Polymerase chain reaction-single stranded conformational polymorphism)两种方法在筛查同一基因片段变异的效果,为筛查基因突变的方法提供选择依据。以绵羊孕酮受...
作者:杨春华; 廖芸; 罗秋红; 孙思扬; 夏彪; 祝建新 期刊:《中国人兽共患病学报》 2017年第11期
目的 应用聚合酶链式反应(PCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测输血传播病毒。方法 根据输血传播病毒的核酸序列特点设计特异性引物进行PCR,将扩增产物进行DHPLC检测分析,以验证方法的灵敏度、特异性、重复性,同时进行临床检测的初步应用。结果 以乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒进行特异性试验,无交叉反应,具有较好的特异性;重复性良好;灵敏度可达1.0×101拷贝/反应。分别应用实时荧光PCR法、普通PCR法及本文所...
作者:凌代俊; 冯雁; 张岩; 黄爱群; 徐希平 期刊:《中国科学技术大学学报》 2004年第05期
通过变性高效液相色谱(DHPLC)和DNA测序在41个中国汉族人DNA样本中检测DRD2基因编码区和拼接区的单核苷酸多态性(SNP),结果发现3个SNP:Intron5的+277G/A、Exon7的+42C/T和Exon7的+129T/C.Intron5 +277G/A是在中国汉族人群中发现的新SNP,Exon7 +42C/T 和+129T/C在NCBI dbSNP中已有相应记录(分别为rs4986921和rs6275),它们均导致DRD2基因的同义突变,其中Exon7 +129C等位基因频率在研究样本中高达43.9%.这些结果为在中国汉族人群中开...
作者:郭秀海; 吴卫平; 丁素菊; 张雁华; 朱克 期刊:《中华神经科》 2005年第04期
目的筛查1个高钾型周期性麻痹(hyperkalemic periodic paralysis, hyperKPP)家系的SCN4A基因,明确该病与SCN4A基因的关系.方法总结1个hyperKPP家系中7例患者的临床特点,应用变性液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)技术筛查SCN4A基因全部24个外显子,对发现异常洗脱峰者进行连锁分析并测序.结果该家系具有典型hyperKPP临床特征,但无肌强直.先证者经DHPLC筛查发现在外显子13、23及24存在杂合二倍体....
作者:刘朝晖; 王汉平; 陈劲龙; 杨银梅; 叶惠芬; 曾军 期刊:《中华微生物学和免疫学》 2005年第09期
目的通过运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对前期研究已确认产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的肺炎克雷伯菌临床分离株TEM型质粒进行基因分型,试图建立一种方便快捷的用于ESBL分子诊断及其流行病学监测的新方法.方法利用PCR技术从肺炎克雷伯菌临床分离株中扩增出TEM型质粒的编码序列,扩增产物运用DHPLC技术进行分析,分析提示,异常的样本通过测序确定其基因突变的类型,最后通过比对确定其基因型.结果共分析了101例肺炎克雷伯菌临床分离株,...
作者:孙宏钰; 蔡贵庆; 陆惠玲; 刘超; 陈丽娴; 李向阳; 伍新尧 期刊:《法医学》 2005年第04期
目的基于变性高效液相色谱技术,建立一种不需测序和杂交的新的mtDNA控制区多态性分析系统.方法 mtDNA控制区序列(包括HV Ⅰ,HVⅡ和HVⅢ)被分为4个扩增片段,采用配对分析突变检测模式进行DHPLC分析.对DHPLC检测条件(包括柱温和洗脱梯度等)进行优化.对100个不同类型差异序列的组合配对以检验该方法的检测效力.结果 10组序列相同的样本配对DHPLC图谱均只显示1个样品峰.对序列相差1个碱基~7个碱基、插入(/缺失)1个碱基、插入(/缺失)2...
作者:许尧; 董航; 张兴菊; 毛文智; 邵洪泽; 胡桂学 期刊:《吉林畜牧兽医》 2017年第02期
小鹅瘟和沙门氏菌感染是严重危害养鹅业发展的常见病,为了快速、准确地对小鹅瘟、鹅沙门氏菌感染进行诊断,减少这两种病的危害,本试验将这两种病原体的PCR—DHPLC检测方法结合起来,建立一种可以同时检测小鹅瘟和鹅沙门氏菌的方法,并进行了初步应用。结果表明这种新的PCR-DHPLC方法稳定、敏感、特异性强,适合专业检测使用。
作者:李莉; 王翀; 陈瑶生 期刊:《生物技术通报》 2006年第C00期
变性高效液相色谱(DHPLC)是一种高通量筛选DNA序列变异的新技术,从该仪器设备的组成、工作原理、基本操作方法、主要技术特点等作一综述,并对其在基因组领域的应用如SNP分析、双链DN段分析、微卫星分析、mRNA定量分析、引物纯度检测等方面度在医学、遗传学方面的应用作了较详细的综述。
作者:卢锡林; 莫照龙; 姚晓黎; 陈飞; 周世锋; 周少珑; 李才明 期刊:《中国热带医学》 2006年第12期
目的探讨N^6,N^10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性与海南黎族缺血性脑卒中(IS)的关系。方法运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测87例海南黎族IS组及83例对照组的MTHFR基因多态性。结果IS患者的MTHFR基因TT、CT、CC基因型频率分别为8.0%、64.4%、27.6%,T等位基因频率为40,2%,C等位基因频率59.8%;对照组的TT、CT、CC基因型频率分别为3.6%、39.8%、56.6%,T等位基因频率为23.5%,C等位基因频率7...
作者:郭亮; 周磊; 李忠浩; 杨媛媛; 宋维龙; 狄和双; 王根林 期刊:《安徽科技学院学报》 2007年第04期
乳房炎是奶牛生产中最普遍、最复杂也是花费最多的疾病,与乳铁蛋白存在一定的相关性。本实验以DHPLC取代SSCP检测bLF基因点突变。结果表明,DHPLC对点突变的检出率达到97%,优于SSCP等方法。
作者:周明奎; 李文哲; 朱文斯 期刊:《生命科学研究》 2006年第S1期
变性高效液相色谱(D enaturing H ighP-erform ance Liquid Chrom atography,D H PLC)是一种可以对核酸片段进行灵敏、快速的分析,并检测出单碱基错配及插入缺失的新技术,在生命科学许多领域有广泛的应用.对D H PLC在致病微生物基因抗药性突变检测、基因型分析等领域的应用研究进展进行了综述.
作者:张晓燕(综述); 刘朝晖(审校) 期刊:《国际检验医学》 2007年第08期
近年来,耐药问题一直困扰着公众健康,如何检测耐药菌株,更好地促进耐药菌株的分离是关键。最近,一项新的技术——变性高效液相色谱(DHPLC)被应用于细菌耐药性的检测。在相同的温度下,杂合双链比纯合双链解链早,DHPLC以此来检测DNA分子的突变;WAVEMAKER软件将结果转换成不同的图谱。DHPLC同时具备了全自动、准确、灵敏以及高通量的优点。
作者:宋传贵; 卢辉山; 黄昌明; 刘星; 侯培锋; 张祥福 期刊:《中国癌症》 2006年第05期
背景与目的:DNA修复基因XRCC1参与DNA损伤的碱基切除修复途径(BER),其Arg399Gln多态可以改变蛋白产物的DNA修复效能.本研究探讨XRCC1基因Arg399Gln多态与胃癌临床病理因素的关联性。方法:采用聚合酶链反应PCR-变性高效液相色谱分析(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)方法对102例胃癌患者进行XRCC1基因Arg399Gln多态的基因型分析,比较基因型分布与胃癌组织临床病理特征之间的关系。结果:XRCC1基...
作者:王静波; 李丹; 潘凯枫; 陆道培 期刊:《中国实验血液学》 2006年第06期
为了探讨通过变性高效液相色谱(DHPLC)进行HLA-DRB1配型的可行性,选择经PCR-SSP证实的20例HLA-DRB1相合及2例HLA-DRB1不相合的病人及其同胞供者的标本为实验对象,全部标本通过PCR扩增HLA-DRB1第二外显子基因片段,PCR产物经梯度变性处理后通过DHPLC检测,在部分变性温度下,检测病人与供者的HLA-DRB1第二外显子DHPLC峰型是否相同,以判断供受者的HLA-DRB1基因型是否相同。结果表明:DHPLC与PCR-SSP进行DRB1配型比较分析,经kap...
作者:杨建伟; 苏颖; 陈增; 蒙燕; 高炜; 林锦源 期刊:《国际病理科学与临床》 2014年第01期
目的:应用变性高效液相色谱技术(denaturing—performanceliquidchromatography,DHPLC)高通量的实验平台,探讨晚期胃癌患者细胞色素P450代谢酶CYP3A4基因的多态性与患者接受多线化疗、化疗周期数及不良反应的相关性。方法:福建省肿瘤医院住院的接受含紫杉醇和/或奥沙利铂联合姑息化疗晚期胃癌患者外周血53份,进行全血DNA分离、提取,经PCR,DHPLC分析筛查以及DNA测序鉴定基因型,观察并评价患者接受多线化疗、化疗周期数及...
作者:李琳; 王玉平; 沈建忠; 吴永宁; 吴聪明 期刊:《中国兽医学报》 2009年第10期
选择11株动物源沙门菌(包括6种血清型)进行环丙沙星耐药性体外诱导。应用变性高效液相色谱(DH—PLC)对11株诱导株不同诱导阶段的靶基因gyrA、gyrB、parC、pare的喹诺酮耐药决定区(QRDR)和mar操纵子基因marO、marR、marA、marB、soxR、soxS及外排泵acrAB的抑制基因acrR(包括启动子区)进行基因突变筛选,并对筛选出的突变基因进行测序确证。结果显示,6种血清型沙门菌在诱导过程中,GyrA突变集中在S83F和/或D87G,marR、sox...