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两株PRRSV NSP2不同位置缺失基因工程病毒的生物学特性分析

作者：谯雨; 王治家; 张婧; 孙普; 白兴文; 李坤; 包慧芳; 曹轶梅; 李平花; 李冬; 刘在新; 卢曾军 刊期：2019年第09期

为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NSP2高变区对病毒复制及相关细胞因子表达水平的影响,以PRRSV GSWW/2015强毒株感染性分子克隆为基础,在前期缺失NSP2第519~565位47个氨基酸的D5毒株的基础上,进一步缺失了NSP2第628~747位120个氨基酸(D14),并比较分析了缺失毒株与亲本病毒GSWW的复制能力。结果显示,D14缺失病毒相对于D5缺失毒与亲本病毒GS...

基于单个B细胞抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体的研制

作者：张雨; 秦晓东; 朱学亮; 殷相平; 李彦敏; 张志东 刊期：2019年第09期

为了建立基于单个B细胞制备抗体技术,本研究以O型灭活FMDV为抗原,采集健康C57/BL小鼠脾细胞,经过磁珠富集、流式B220+/CD38+/Ig G1+/抗原+分选,获得单个抗原特异性的B细胞。经单细胞巢式PCR反应扩增获得抗体完整轻、重链可变区序列后,分别构建轻/重链表达质粒,然后共转染HEK-293细胞后,成功获得3株特异性单克隆抗体,且证明均属于Ig G1型抗体;ELI...

非洲猪瘟病毒荧光RPA快速检测方法的建立及初步应用

作者：林彦星; 曹琛福; 曾少灵; 花群俊; 杨俊兴; 黄超华; 史卫军; 花群义 刊期：2019年第09期

本研究根据非洲猪瘟病毒(ASFV)基因组中序列保守稳定的B646L基因设计特异性引物和探针,建立了敏感、特异、高效的ASFV核酸RPA快速检测法。结果显示,该方法特异性强,能准确检测ASFV核酸,与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)、口蹄疫病毒(FMDV)、猪A型塞内卡病毒(SVA)等灭活病毒核酸无交叉反应;敏感性高,本试验中...

广东部分地区乳牛肠道寄生虫感染情况的调查

作者：梁楠; 常艳凯; 崔朝辉; 李东方; 郑双健; 陈远才; 庞歌; 索勋 刊期：2019年第09期

为了解广东省奶牛肠道寄生虫感染情况,采用离心沉淀法、卢戈氏碘液染色法和饱和蔗糖漂浮法对广东省部分地区10个奶牛场共1 440份乳牛粪便样品进行显微镜检测,之后对隐孢子虫、十二指肠贾第虫和毕氏肠微孢子虫进行PCR鉴定。镜检结果显示:10个奶牛场寄生虫总感染率为47.64%(686/1 440),共检测出9类肠道寄生虫即球虫、十二指肠贾第虫、隐孢子虫、阿...

蓝舌病病毒和流行性出血病病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

作者：杨振兴; 朱建波; 李占鸿; 李卓然; 何于雯; 谢佳芮; 李华春; 廖德芳; 杨恒 刊期：2019年第09期

为建立检测蓝舌病病毒(BTV)和流行性出血病病毒(EHDV)的快速诊断方法,笔者根据BTV的第10基因节段(Seg-10)和EHDV的第5基因节段(Seg-5)序列,分别设计BTV与EHDV的特异性引物和TaqMan探针,经过反应条件优化,建立了同时检测两种病毒的双重荧光定量RT-PCR方法,并进行了特异性、灵敏度、重复性和临床样品检测验证。用该方法对BTV Seg-10和EHDV Seg-5节...

基于昆虫细胞表达的鹅细小病毒VP3蛋白的VP3-ELISA诊断方法的建立

作者：陈雪明; 张树梅; 林委卫; 孙悦; 陈秀红; 呼喝巴特儿; 刘明; 葛明; 张云 刊期：2019年第09期

将鹅细小病毒EP22株VP3基因克隆到杆状病毒转移载体pFast-Bac-HTB中,酶切鉴定及测序筛选出阳性重组转座载体pFastBac-VP3,转化至含有杆状病毒穿梭载体Bacmid的DH10Bac感受态细胞,构建杆状病毒表达载体,获得重组转座子rBacmid-VP3,在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得到含鹅细小病毒VP3基因的重组杆状病毒rBV-VP3。经SDS-PAGE、Western-blot以及...

可视化多重荧光LAMP鉴别诊断牛轮状病毒和产肠毒素性大肠杆菌的研究

作者：范晴; 谢芝勋; 谢志勤; 谢丽基; 黄娇玲; 张艳芳; 曾婷婷; 王盛; 罗思思; 邓显文; 刘加波 刊期：2019年第09期

本研究旨在建立一种同时检测牛轮状病毒(BRV)和产肠毒大肠杆菌(ETEC)的多重荧光LAMP检测方法。根据GenBank中BRV和ETEC的基因保守区域设计3套LAMP引物,在每条内引物FIP的5’端标记荧光基团,在同一体系中进行多重LAMP扩增,对各反应条件进行优化,应用该方法对采集自广西各地牛场的56份样品进行检测。结果显示,该方法能特异地鉴别牛轮状病毒和产肠...

利用CRISPR/Cas9技术敲除TLR3基因及其影响NDV复制的研究

作者：邵玉乐; 许曼; 王辉; 曾为俊; 鲁国涛; 赵丽丽; 陈洪岩; 刘建华; 孟庆文 刊期：2019年第09期

牛细小病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者：李振雪; 赵飞鹏; 于晓丽; 姜艳平; 崔文; 李一经; 唐丽杰; 徐义刚; 王丽; 乔薪瑗 刊期：2019年第09期

为建立检测牛细小病毒的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,本研究通过提取牛细小病毒(ATCC VR-767)核酸,扩增NS1基因片段(大小约为171 bp),将NS1基因片段克隆到pMD19-T载体中,并将重组质粒p MD19-T-NS1/DH5α作为标准样品,用于建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法。研究结果显示,扩增基因片段长约171 bp,符合目的基因大小,经鉴定所构建的重组质...

霍乱弧菌三重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

作者：万莹; 陈永军; 任亚玲; 王亚磊; 王权; 蒋蔚 刊期：2019年第09期

为建立一种基于TaqMan探针法定量检测霍乱弧菌的三重荧光定量PCR方法,以霍乱弧菌种特异性基因ompW和毒力基因ctx、hly为靶基因,分别设计特异性引物及相应的TaqMan探针。在ompW、ctx、hly探针的5’端分别标记CY5、FAM、HEX荧光报告基团,3’端均标记BHQ1荧光淬灭基团。结果显示,本试验建立的三重荧光定量PCR方法与其他菌株无交叉反应,其最低检出限...

PEDV双抗体夹心ELISA检测方法的建立

作者：马宇聪; 刘增素; 王书博; 周晗; 姜艳萍; 崔文; 王丽; 乔薪瑗; 唐丽杰; 徐义刚; 李一经 刊期：2019年第09期

为了快速检测猪流行性腹泻病毒,本研究以纯化的家兔抗猪流行性腹泻病毒多隆抗体为捕获抗体,以小鼠抗猪流行性腹泻单克隆抗体为检测抗体,并对单克隆抗体进行HRP标记,由此建立了双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测法,检测抗体的最佳工作浓度为浓度为0.75ug/m L。当D450≥0.233且P/N≥2时判定为阳性。该方法特异性强,与猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒均无...

西藏部分地区牦牛球虫感染情况的调查

作者：张凯慧; 李东方; 毋亚运; 常艳凯; 李家奎; 张龙现; 赵金凤 刊期：2019年第09期

为了调查西藏部分地区牦牛球虫感染情况和流行现状,采用饱和蔗糖溶液漂浮法对从西藏林芝、山南和日喀则地区内放牧牦牛群随机采集的239份新鲜粪便样品进行球虫检测。结果显示:3个地区牦牛的艾美耳球虫总感染率为43.93%(105/239),共检测出11种艾美耳球虫,分别为邱氏艾美耳球虫25.94%(62/239)、椭圆艾美耳球虫15.48%(37/239)、柱状艾美耳球虫11.30...

金黄色葡萄球菌裂解性噬菌体的分离及生物学特性鉴定

作者：汤婷婷; 王一晗; 王孟孟; 李振雪; 狄亚心; 乔薪瑗 刊期：2019年第09期

以金黄色葡萄球菌CVCC 546为宿主菌,从粪便中分离出1株噬菌体,命名为4086-1。采用双层平板法分离并纯化噬菌体,观察噬斑形态,通过透射电镜观察噬菌体形态,同时测定一步生长曲线、热稳定性、pH稳定性,并分析有机试剂、去污剂及渗透压对噬菌体活性的影响。结果显示,噬斑呈圆形、透亮,边界清晰、有晕环,直径1~3 mm。电镜观察结果显示噬菌体为短尾噬...

阿克苏某场香猪毕氏肠微孢子虫的分子检测与鉴定

作者：张盈; 李东方; 赵爱云; 邢金明; 敖维平; 井波; 齐萌; 张龙现 刊期：2019年第09期

为了解阿克苏某场香猪毕氏肠微孢子虫感染情况、基因型及基因亚型分布特点,基于ITS基因位点,采用PCR法检测44份香猪粪便DNA样本,发现18份呈毕氏肠微孢子虫阳性,感染率为40.9%(18/44),其中断奶前和断奶后仔猪的感染率分别为100%(9/9)和32.1%(9/28),成年母猪未发现感染。鉴定出5个毕氏肠微孢子虫基因型:EbpA、EbpC、Peru8、MJ12和1个新基因型(命名...

猪急性腹泻综合征冠状病毒核衣壳蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

作者：周芝海; 谭耀荣; 郑瑶瑶; 曾繁文; 麦凯杰; 马静云 刊期：2019年第09期

为了制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)核衣壳(N)蛋白多克隆抗体,采用PCR方法扩增SADS-CoV/CN/GDGL/2017毒株N基因片段,并对N基因的序列以及N蛋白氨基酸突变位点进行分析。随后,将N基因片段克隆到原核表达载体pET-32a(+)构建重组质粒,测序验证后转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行原核表达,用Ni-NTA亲和层析柱纯化N蛋白,通过免疫BAL...