杂志简介：《中国生物工程》杂志经新闻出版总署批准，自1976年创刊，国内刊号为11-4816/Q，是一本综合性较强的生物期刊。该刊是一份月刊，致力于发表生物领域的高质量原创研究成果、综述及快报。主要栏目：研究报告、技术与方法、综述、行业分析、发展战略
杂志简介：《中国生物工程》杂志经新闻出版总署批准，自1976年创刊，国内刊号为11-4816/Q，是一本综合性较强的生物期刊。该刊是一份月刊，致力于发表生物领域的高质量原创研究成果、综述及快报。主要栏目：研究报告、技术与方法、综述、行业分析、发展战略
作者：李炳娟; 李玉霞; 李北平; 凌焱; 周围; 刘刚; 张景海; 岳俊杰; 陈惠鹏 刊期：2013年第08期
目的：构建前手性酮类化合物的重组全细胞催化体系，并研究CbFDHC-端无序的11个氨基酸与酶活性的关系。方法：利用基因工程方法构建野生型LbADH，CbFDH及C-端11个氨基酸缺失的CbFDH截短突变体的表达菌株；SDS-PAGE分析其表达方式及表达量，利用分光光度计法测定全菌破碎上清中的酶活性；将含野生型LbADH及CbFDH的菌株与底物混合孵育，考察双菌全...
作者：朱小三; 戴益琛; 陈章兴; 谢军培; 曾伟; 林园园; 赵本华 刊期：2013年第08期
目的：观察烯脂酰辅酶A水合酶短链1 （enoyl-CoA hydratase short chain 1, ECHS1 ）细胞凋亡的影响。方法：构建ECHS1基因的干扰质粒，转染HepG2细胞后通过嘌呤霉素筛选稳定干扰ECHS1的细胞株（HepG2．siECHS1），利用Westernblot验证其干扰效率；利用流式细胞仪及TUNEL方法检测ECHS1干扰后HepG2细胞凋亡情况，再采用Western blot检测凋亡相关...
作者：王思佳; 丁明珠; 元英进 刊期：2013年第08期
为了研究并优化不同启动子和质粒类型对酵母细胞青蒿二烯产量的影响，对携带游离型质粒的酿酒酵母人工细胞进行了四种启动子替换，对携带整合型质粒和着丝粒型质粒的人工细胞进行了强启动子和弱启动子替换。利用GC-TOF／MS检测并比较以上几株人工细胞的发酵产物浓度。结果表明，所构建的人工细胞均能生产青蒿二烯，其中携带着丝粒型质粒的人工细...
作者：秦迎春; 杨立荣; 徐刚; 吴坚平 刊期：2013年第08期
根据S-2-氯丙酸脱卤酶的基因序列设计引物，克隆重组大肠杆菌中的S-2-氯丙酸脱卤酶基因。将目的基因片段构建到pPIC9K载体，经SacI单酶切后转化到毕赤酵母GS115中，通过G418抗性YPD平板筛选高拷贝重组子，甲醇诱导成功实现胞外活性表达。重点考察了基因拷贝数和甲醇浓度的影响，结果表明重组子含有12个拷贝，甲醇浓度为1％时较佳，重组脱卤酶的...
作者：梁莹; 刘金颖; 樊晓晖; 宋德志; 肖庆; 殷君; 冯安林; 杨利; 周丹旎; 赖振屏 刊期：2013年第08期
HN蛋白是新城疫病毒（ Newcastle disease virus, NDV ）的血凝素神经氨酸酶蛋白（ hemagglutinin-neuraminidase, HN），是NDV识别宿主细胞的包膜蛋白。NDV-HN能与NK细胞的NKp46受体结合，活化NK细胞上调TNF-α和IFN-γ发挥抗瘤效应。然而HN蛋白是否能直接活化NK细胞上调TNF相关凋亡诱导配体（ TNF-related apoptosis-inducing ligand , TRAIL）...
刊期：2013年第08期
蛋白质研讨班学员问：姜老师，您好!我是您第13期“蛋白质分离纯化技术专题研讨班”的学员，想请教您几个问题。我想用细胞培养的上清进行SDS电泳，但是总做不好，怀疑是上清中白蛋白含量较高。请问：细胞培养上清中会有白蛋白吗？如果有会影响SDS电泳吗？如果会影响，怎样把我的目的蛋白纯化出来，或者把白蛋白除去（我的目的蛋白大小是17kDa和...
作者：李建波; 江明锋; 王永 刊期：2013年第08期
克隆了藏绵羊溶菌酶（LZM，EC3．2．1．17）基因cDNA序列，构建重组质粒pET-32a-LZM，并在大肠杆菌B121中成功表达，重组LZM有一定的抗金黄色葡萄球菌活性。系统进化树分析表明，藏绵羊乳腺LZM与山羊LZM的亲缘关系最近。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）结果表明，藏绵羊乳腺LZM在乳腺中表达量最大。此结果对LZM的应用有一定价值。
作者：薛正莲; 刘阳; 王洲; 马琦亚; 赵世光; 苏燕南 刊期：2013年第08期
从高温大曲中筛选到一株产酯化酶的地衣芽胞杆菌G2。采用低温等离子体对G2进行诱变，以筛选酶活提高最多的3株菌株作为亲本。将亲本原生质体灭活后对其进行基因组改组。将融合后的菌体进行筛选纯化之后，对融合子进行发酵测定其酶活并挑选酶活较高菌株进行传代测定其酶活稳定性。结果表明6#融合子酶活最高且稳定为10．7U／ml，相对于初始菌株的5...
作者：王玉磊; 朱健; 卫功元; 许宏庆; 汪成富 刊期：2013年第08期
考察了柠檬酸钠对S-腺苷蛋氨酸（SAM）和谷胱甘肽（GSH）联产发酵的影响，发现柠檬酸钠有利于SAM和GSH的联合高产。采用响应面分析法对柠檬酸钠浓度及其添加时间进行优化，模型预测和验证实验结果均表明在联产发酵6h时一次性添加10g／L柠檬酸钠的效果最佳。通过对SAM和GSH联产发酵过程进行分析，发现柠檬酸钠能够显著提高胞内NADH和ATP的水平，...
作者：王美玲; 薛超友; 赵方龙; 卢文玉 刊期：2013年第08期
通过补加植物油（菜籽油、玉米油、豆油）、油酸甲酯、玉米浆，考察其对多杀菌素发酵产量的影响。结果显示，在96h补加3％的混合油脂（油酸甲酯：菜籽油=2：1），同时在96h和144h分别补加1％的玉米浆可使多杀菌素的产量提高2．11倍，发酵单位达到804．59mg／L，为实现工业化生产奠定基础。
作者：姚元锋; 赵莹; 赵广荣 刊期：2013年第08期
sRNAs作为一种强有力的基因表达调控工具，在真核生物中得到了广泛的应用。随着微生物中sRNAs的不断发现以及其调控机制的逐渐明确，新近开发的人工sRNA工程在微生物代谢工程的改造上也展现了巨大的优势。通过对大肠杆菌负调控L-酪氨酸生物合成途径的碳贮藏调控因子（csrA）基因的sRNAs进行了人工设计和筛选，分析了对L-酪氨酸合成的影响。结果...
作者：郑丽娟; 陈少云; 徐刚; 吴坚平; 杨立荣 刊期：2013年第08期
为了实现异丁醇代谢途径中关键酶的高效共表达，选择具有双17启动子的质粒载体pCDFDuet、pRSFDuet和pACYCDuet，将基因kivd和alsS分别克隆至pCDFDuet的两个启动子下，yqhD和ilvCD分别克隆至pRSFDuet或pACYCDuet的两个启动子下，构建成两种双质粒共表达系统，获得产异丁醇重组大肠杆菌Eco（CDF＋RSF）和Eco（CDF＋ACYC）。其中重组菌Eco（CDF＋RS...
作者：李明珠; 韩伟东; 邢光慧; 滕珍林; 薛国梅; 侯辰瑞; 阮宏强; 陈薇 刊期：2013年第08期
目的：对于直接用N端测序仪无法进行测序的N端焦谷氨酸环化封闭的抗体类药物，去除焦谷氨酸后实现对其N端序列的从头测序。方法：对抗体的重轻链分别进行N端测序无果，再通过LC—MSMS对其重轻链N端的焦谷氨酸进行确认，证明其为焦谷氨酸封闭。对抗体蛋白进行焦谷氨酸氨肽酶酶解后，再通过N端测序仪进行Edman降解法N端测序，获得抗体药物重轻链的...
作者：王琪; 俞慧清; 陈建泉; 曾宪垠; 成国祥 刊期：2013年第08期
为了获得细胞穿透性的重组酶Tat-FLPe应用于基因重组研究，建立了高效稳定的Tat-FLPe原核表达与纯化体系。首先，以质粒pCAGGS-FLPe为模板，PCR扩增FLPe序列，将其克隆到pET28a-Tat中并与穿膜蛋白Tat相连，获得表达载体pET28a-Tat-FLPe，然后将Tat-FLPe分别插入到另外3个原核表达载体pET22b、pET30a、pET32a中，转入原核表达菌Rosetta诱导表达，...
作者：闫亚彬; 蔡勤; 蔡琳琳; 龚秀丽; 朱怡文; 管翌华; 黄英 刊期：2013年第08期
目的：用牛生长激素（bGH）和牛催乳素（bPRL）乳腺特异载体DNA分别转染携带人转铁蛋白（hTF）的转基因小鼠乳腺上皮细胞，比较这二种载体对外源基因（人转铁蛋白）的表达影响，为研制特异、高效表达外源蛋白转基因动物过程中载体的合理构建，提供有价值的理论和技术基础。方法：将构建β-酪蛋白启动子（P1A3）调控的bGH和bPRL乳腺特异表达载体分...
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