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肝癌肿瘤干细胞的分离鉴定及差异性小分子RNA筛选

作者：许英晨; 管利东; 周军年; 曾泉; 袁红丰; 李思霆; 管兆轩; 何丽娟; 南雪; 陈琳; 岳文; 裴雪涛 刊期：2013年第01期

旨在分离并鉴定肝癌肿瘤干细胞,并对其异常表达的microRNA进行了初步筛选。首先利用流式细胞术及免疫荧光技术分别在肝癌细胞系及肝癌组织标本中确认了CD90＋细胞的存在;随后利用免疫磁珠分选技术从肝癌细胞系MHCC97-H中分离出了CD90＋细胞,化疗药物耐药性实验表明,CD90＋细胞具有明显的化疗药物耐受能力;两次裸鼠皮下成瘤性实验也表明CD90＋细...

EV71类病毒颗粒的表达和免疫原性的初步评价

作者：郭莉莉; 欧霞; 米锴; 孙茂盛; 李鸿钧 刊期：2013年第01期

目的：运用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建EV71类病毒颗粒,并对形成的类病毒颗粒的免疫原性进行初步评价。方法：构建重组杆状病毒表达载体Bacmid-P1-3CD,转染昆虫细胞sf9细胞系,获得携带EV71病毒结构基因P1和3CD蛋白酶基因的重组杆状病毒AcMNPV-P1-3CD。采用免疫荧光、Western blot及电镜观察等方法检测重组病毒表达产物及形态学特征。表达产...

重组人成纤维细胞生长因子8b原核表达载体的构建和纯化研究

作者：黄鹏煌; 王泽; 田海山; 赵海洋; 李海燕; 李校堃 刊期：2013年第01期

成纤维细胞生长因子8b（fibroblast growth factor,FGF8b）在生长因子中与内分泌癌的发生和发展相关联,是一个有潜在临床应用价值的候选分子,为了满足重组人FGF8b的研发需要,论文采用分子克隆的方法构建了以包涵体形式表达FGF8b的重组大肠杆菌,并初步摸索出包涵体蛋白的纯化和复性工艺条件,通过Western blot和MTT法鉴定了FGF8b的生物化学特征和...

黄瓜花叶病毒2b蛋白C末端无抑制局部RNA沉默的活性

作者：王盛; 曹慜; 董洁; 穆红珍; 丁国平; 张虹 刊期：2013年第01期

目的：黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）编码的2b蛋白具有RNA沉默抑制子的功能,其C末端氨基酸序列非常保守。为了明确2b蛋白C末端保守序列在RNA沉默抑制中的作用,构建了CMV Q株系野生型2b及其C末端缺失突变体2bdelC的植物瞬时表达载体。通过农杆菌共渗滤法对野生型2b及其C末端突变体的沉默抑制子活性进行了分析。结果与结论：烟草接种...

致谢

刊期：2013年第01期

中国林蛙核糖核酸酶Rdrlec新基因的原核可溶表达

作者：陶凤云; 尹雪薇; 李丹; 蒋丹; 赵伟 刊期：2013年第01期

来源于蛙属的核糖核酸酶由于具有显著的抗肿瘤活性而备受关注,Rdrlec是从中国林蛙基因组中克隆得到的核糖核酸酶新基因。获得大量高纯度野生型重组蛋白是研究其功能的基础。按照大肠杆菌偏好的密码子人工合成Rdrlec基因,通过EcoR I和Hind III位点插入到表达载体pET-32a（＋）中构建pET32-Rdrlec重组表达质粒,转化到Escherichia coli BL21（DE3）...

枸杞LmP5CS基因的克隆及表达分析

作者：冯远航; 王罡; 季静; 关春峰; 金超 刊期：2013年第01期

目的：为进一步研究枸杞抗逆境胁迫的机制,并为转基因育种,提供理论依据。提高农作物的抗逆性提供优质的基因资源。方法：提选取盐胁迫后脯氨酸含量变化较大的耐盐植物枸杞为材料,用1.5%NaCl处理后,提取枸杞叶片总RNA,利用RT-PCR及3＇RACE方法克隆获得吡咯啉-5-羧酸合成酶（delta 1-pyrroline-5-carboxylate synthetase,P5CS）基因的全长cDNA,命...

根癌农杆菌介导的金发草遗传转化条件的优化

作者：李美玉; 李锐; 于敏; 王胜华; 陈放 刊期：2013年第01期

金发草（Pogonatherum paniceum）是一种多年生岩生草本植物,在生态恢复和景观建设中起着重要的作用。利用根癌农杆菌介导转化金发草胚性愈伤组织,通过GUS（β-葡萄糖苷酸酶）瞬时表达率研究菌液浓度、浸染时间、乙酰丁香酮（AS）浓度、葡萄糖浓度、共培养时间等因素对金发草转化的影响,并利用确定的最佳条件将GUS基因转入金发草,获得稳定表达转...

科学出版社新书

作者：克雷布斯; 江松敏(译) 刊期：2013年第01期

Benjamin Lewin的《基因》出版之时就已经为这本书设定了很高的标准，并成为～本分子生物学与分子遗传学领域国际通用的优秀参考书籍。过去几十年中的9个版本见证着分子生物学与分子遗传学日新月异的变化。作为《基因》系列的最新版本，《Lewin基因X》（中文版）对分子生物学和分子遗传学进行了精彩的论述，内容涵盖了基因的结构、序列、组织和...

一株苯系物降解真菌筛选及降解特性

作者：张占生; 李彦旭; 杜青平; 夏丽娟 刊期：2013年第01期

采用逐量分批驯化的方法以污水处理厂污泥作为菌源,苯、甲苯、二甲苯为唯一碳源,驯化、分离、筛选能够有效降解苯系物的真菌,命名为B1。采用单因素以及正交实验方法并对真菌降解环境影响因素及降解效率进行了测定和研究。结果表明：真菌B1对苯系物降解的最佳条件为C∶N=5∶1,pH5,温度30℃,菌种接种量为5.5ml（50ml培养基）。采用GC对初始液相浓...

链霉菌Streptomyces sp. M-Z18转化前体L-赖氨酸合成ε-聚赖氨酸的研究

作者：陈旭升; 任喜东; 曾昕; 董难; 毛忠贵 刊期：2013年第01期

目的：考察不同细胞培养方式对Streptomyces sp.M-Z18转化前体L-赖氨酸合成ε-聚赖氨酸过程的影响。方法：利用两阶段细胞培养和发酵过程流加方式,建立了两阶段细胞培养转化前体L-赖氨酸合成ε-聚赖氨酸以及转化前体L-赖氨酸耦合甘油发酵生产ε-聚赖氨酸的策略。结果：（1）两阶段细胞培养转化前体L-赖氨酸合成ε-聚赖氨酸策略实现ε-PL积累15 g/L,转...

用生物传感器方法测定正常小鼠肝脏中miR-21活性

作者：田文洪; 胡键阳; 董小岩; 李明皓; 吴小兵 刊期：2013年第01期

目的：建立生物传感器检测小鼠肝脏中microRNA（miRNA）活性的方法,测定miR-21在正常小鼠肝脏中的活性。方法：首先,分子克隆方法构建检测miRNA活性的通用型质粒传感器Dsensor。将各种miRNA的互补序列插入Dsensor中构建成相应miRNA活性检测传感器。用水动力法将检测miR-21的Dsensor注射至正常小鼠体内,以miR-122 Dsensor为阳性对照,miR-206Dsens...

HIV-1整合酶链转移反应抑制剂的荧光筛选方法

作者：刘斌; 刘昕; 李杉; 何红秋; 张小轶; 谭建军; 陈慰祖; 王存新 刊期：2013年第01期

整合酶被认为是抗HIV-1药物研究的理想靶点之一。为了建立便捷高效的整合酶链转移反应抑制剂筛选方法,首先将HIV-1整合酶原核表达载体pNL-IN转化入大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）进行原核表达,并用镍琼脂糖凝胶进行亲和纯化,获得了纯度和活性均较高的整合酶重组蛋白;然后设计了生物素标记的供体DNA和FITC标记的靶DNA,用链霉亲和素磁珠捕获反应体...

抗心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体制备、鉴定和在侧向免疫层析方法中的应用

作者：康可人; 吴培钿; 李悦琳; 黄绮玲; 李高辉; 唐时幸; 王继华 刊期：2013年第01期

目的：制备抗心型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）单克隆抗体（mAb）,并建立侧向免疫层析方法检测血浆中H-FABP。方法：用H-FABP蛋白免疫纯系Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术建立能稳定分泌抗人H-FABP的单克隆杂交瘤细胞株。常规制备腹水,纯化后得到特异性抗H-FABP单克隆抗体,进行效价、特异性、亲和力的鉴定分析,并在ELISA平台进行抗体配对,用所筛选到的抗...

不依赖天然外显子的蛋白质内含子定向进化筛选系统

作者：邱沛然; 胡芳; 林瑛; 孟清 刊期：2013年第01期

蛋白质剪接技术为在蛋白质水平上直接对蛋白质进行修饰和加工提供了一种全新的解决方案,因而在蛋白质工程及相关领域具有非常广阔的应用前景。现阶段,大部分天然的蛋白质内含子在异源蛋白质中剪接活性非常低,极大限制了蛋白质内含子的开发和应用。为了开发一个可以同时对蛋白质内含子通用性和剪接活性进行筛选的系统,利用Bsa I限制性内切酶识别...