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抗EGFRvⅢ噬菌体抗体库的构建和筛选

作者：周敏; 石必枝; 顾健人; 李宗海 刊期：2010年第04期

目的：应用噬菌体展示技术筛选针对表皮生长因子受体突变体Ш（epidermal growth factorreceptor variant typeⅢ,EGFRvIII）的单链抗体（single chain Fv,scFv）。方法：利用原核表达纯化的人EGFRvIIIex蛋白和高表达EGFRvIIIex的小鼠成纤维细胞系NIH3T3免疫小鼠,扩增VH和VL片段并拼装成scFv基因,连接至噬菌粒pCANTAB5E,电击转化Hpd3cells,构建噬...

脑膜炎奈瑟氏菌外膜蛋白NhhA的克隆表达及免疫学分析

作者：陈柳; 李健峰; 徐维明; 戴宗祥; 李智华; 孙强明 刊期：2010年第04期

通过克隆脑膜炎奈瑟氏菌NhhA基因GNA0992于原核表达载体pET-20b,在大肠杆菌BL21（DE3）中实现了可溶性表达,表达量约占菌体蛋白总量的20%。经初步纯化后免疫小鼠,对其免疫原性进行了初步分析。结果显示,经3次腹腔免疫,血清IgG滴度达到23186,同时杀菌力实验显示NhhA能诱导针对B群脑膜炎奈瑟氏菌的补体依赖的杀菌反应。证明了NhhA是一种良好的抗原...

促进CHO细胞生长及其产物hNGF表达的培养条件的初步研究

作者：宋小红; 于婷; 李冰; 付玲; 侯利华; 陈藢 刊期：2010年第04期

以稳定表达人神经生长因子（hNGF）的重组工程CHO细胞株为对象,采用无血清流加悬浮培养（Fed-batch culture）方式,考察使用基础培养基（无特殊添加物）,分别添加丁酸钠、DMSO、KH2PO4的培养基及不同培养温度（32℃和37℃）对细胞生长和重组蛋白表达的影响。每日取样检测细胞密度、细胞活率、葡萄糖浓度、重组蛋白浓度。结果表明细胞培养温度由3...

Ang2、Tie2基因的RNA干扰及其在体外抑制血管生成的作用

作者：王彪; 刘照亮; 林菊丽; 单秀英; 王美水; 张声; 鲁开化 刊期：2010年第04期

目的：探讨应用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术沉默Ang2、Tie2基因及其在体外抑制血管生成的研究,为将来进一步进行抑制肿瘤血管生成的动物实验研究奠定基础,为肿瘤的基因治疗提供实验依据。方法：用pSilencer1.0-U6-Ang2/Tie2-siRNA重组质粒转染人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,采用RT-PCR检测各组HUVECsAng2、Tie2的mRNA表达状况。应用体外...

大肠杆菌耐热性肠毒素STI三重串联突变体与黏附素K99融合基因的表达研究

作者：郭乐; 李敏; 王玉炯 刊期：2010年第04期

产肠毒素大肠杆菌（ETEC）是一种导致仔畜和婴儿腹泻的主要病原之一,它的毒力因子主要有两类：黏附素（CFAs）和耐热性肠毒素（ST）或不耐热性肠毒素（LT）。通过PCR技术及双酶切连接技术,成功构建了含有3个STI突变体和1个黏附素K99基因的重组表达质粒pE3S（S）LK和pE3S（G）LK。重组菌株BL21（DE3）（pE3S（S）LK）和BL21（DE3）（pE3S（G）LK...

毕赤酵母高密度发酵表达血管紧张素转化酶C-结构域

作者：徐珏; 许传莲; 杜方尧 刊期：2010年第04期

血管紧张素转化酶（ACE,EC3.4.15.1）在调节血压方面具有重要作用。研究证实,ACE的C结构域（ACE-C）是使血管紧张素I（AngI）分解的主要活性位点。在5L发酵罐中,对重组毕赤酵母表达ACEC-结构域的发酵工艺进行优化,探讨温度、pH、甲醇浓度等主要因素对重组蛋白表达量和酶活力的影响。结果表明,当工业培养基添加2%蛋白胨为氮源时,ACEC-结构域的降...

重组人ASCT2的C-末端胞外结构域的原核表达、纯化及鉴定

作者：欧阳东云; 徐丽慧; 高琦; 郭贺; 陈清; 何贤辉 刊期：2010年第04期

中性氨基酸转运蛋白（ASCT2）是人类内源性病毒的包膜蛋白合胞素在细胞膜上的主要受体,其最大的胞外结构域存在于C-末端的105个氨基酸（以下简称TAIL）。通过RT-PCR方法从人乳腺癌MCF-7细胞中克隆ASCT2基因编码区全长序列,再从中扩增ASCT2的TAIL序列,与pET-41b（克隆位点的N-和C-端分别有谷胱甘肽转移酶和His6标签序列）连接构建原核表达载体,重...

集成干扰素突变体ⅡFN_（72C）的构建及其聚乙二醇定点修饰

作者：黄湘鹭; 陶杉杉; 徐晨; 李洁; 周建平 刊期：2010年第04期

目的：设计构建集成干扰素突变体IIFN72C并进行聚乙二醇定点修饰,以获得高活性的长效干扰素分子。方法：利用蛋白质分子同源模建,选择在集成干扰素分子IIFN的第72位引入半胱氨酸残基构成集成干扰素突变体IIFN72C。诱导表达后经包涵体变复性和层析纯化,与单甲氧基聚乙二醇（mPEG-MAL）定点偶联。修饰产物经纯化后,以SDS-PAGE考察其纯度,用WISH-VS...

腺相关病毒载体介导siRNA抑制HBV的表达与复制

作者：辛娟娟; 孟庆玲; 高向东; 刘金毅 刊期：2010年第04期

目的：构建并制备能够有效抑制HBV mRNA表达的siRNA-重组腺相关病毒。方法：将筛选到的siRN段克隆入骨架质粒pAAV-MCS中,与pAAV-RC和pHelper质粒共转染人胚肾293T细胞,包装出重组腺相关病毒,将纯化后的重组病毒直接感染HepG2.2.15细胞,通过酶联免疫法和荧光定量PCR法检测重组腺相关病毒的抑制效果。结果：重组腺相关病毒显著降低HBV分泌的相关抗...

重组萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶在毕赤酵母优化表达初步纯化与鉴定

作者：李洋; 李晖; 祝建波; 刘进元 刊期：2010年第04期

将萝卜磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶（RsPHGPx）基因插入到分泌表达载体pPIC9K中,转化巴斯德毕赤酵母GS115细胞,筛选具有G418抗性的单拷贝转化子。经过优化表达条件,RsPHGPx在1%甲醇、pH6.0、28℃条件下诱导60h后得到最大表达量,产率约为102mg/L。通过硫酸铵分级沉淀、脱盐柱脱盐、凝胶过滤等纯化步骤,得到了90%以上纯度的RsPHGPx.活性分析显示纯化...

水稻高叶绿素含量基因DET1 cDNA的克隆、生物信息学分析及超表达载体的构建

作者：黄俊丽; 刘太波; 王贵学; 李贤勇 刊期：2010年第04期

提高水稻叶片中叶绿素含量可以提高光合作用效率。以水稻高叶绿素含量突变体为材料,在前期精细定位的基础上,克隆了高叶绿素含量基因DET1（DE-ETIOLATED1）cDNA。测序结果显示：DET1基因全长cDNA为1536bp,由11个外显子组成,编码512个氨基酸。与野生型珍汕97B相比,DET1基因在第7个外显子上有T-C的转换,该转换引入了一个EcoRI酶切位点,并导致第328...

植物乳杆菌ZS2058的亚油酸异构酶基因在乳酸克鲁维酵母中的克隆表达

作者：朱敬华; 陈海琴; 张白曦; 田丰伟; 赵建新; 陈卫; 张灏 刊期：2010年第04期

目的：将植物乳杆菌ZS2058（Lactobacillus plantarum ZS2058）的亚油酸异构酶基因在乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）中进行克隆表达。方法：根据NCBI中已报道亚油酸异构酶（linoleate isomerase,LAI）基因的序列特征,设计引物对筛得的植物乳杆菌ZS2058进行PCR扩增,得到亚油酸异构酶全基因序列,克隆至乳酸克鲁维酵母表达载体pKLAC1,电转...

大孔树脂对三孢布拉霉菌产番茄红素的吸附性能研究

作者：李干禄; 吴启赐; 武振军; 石楠; 万红贵 刊期：2010年第04期

为利用大孔吸附树脂分离纯化三孢布拉霉菌发酵液番茄红素,考察了4种大孔树脂（HP20,HP2MG,SP825,SP207）对番茄红素的吸附-解吸特性,筛选出最佳树脂。结果表明,HP20大孔树脂对番茄红素具有较好的吸附-解吸性能,且吸附迅速,能在1h内达到吸附平衡。用含55%和60%异丙醇的丙酮不连续梯度洗脱,回收率可达89.55%,重结晶后可获得纯度95%以上的番茄红素,...

急性早幼粒白血病HL60细胞电转染条件的优化

作者：王伟佳; 张秀明; 王前; 温冬梅; 邱宗荫 刊期：2010年第04期

目的：比较不同电转染条件下,真核表达载体转染HL60细胞的效率,筛选得到针对HL60细胞最佳的电转染条件。方法：采用pDsRED-C1真核表达载体,分别在2mm和4mm电转杯中依照不同电转条件对HL60细胞进行转染,根据存活细胞所占比例确定电转参数;在转染48h后,比较不同质粒加入量及二甲基亚砜（dimethylsulfoxide,DMSO）加入电转体系前后的细胞转染阳性率...

姜老师信箱

刊期：2010年第04期