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pUC19K质粒的构建及其在布鲁氏菌突变株构建中的应用

作者：乔凤; 陈泽良; 王玉飞; 赵瑾; 杜昕颖; 于雅琴; 黄留玉 刊期：2007年第12期

突变株的构建是细菌基因功能研究的前提。构建了一个可用于布鲁氏菌突变株构建的自杀质粒。在pUC19质粒的多克隆位点插入卡那霉素抗性基因，在该基因两侧添加多个酶切位点。构建成为pUC19K。利用该质粒，构建了布鲁氏菌外膜蛋白Omp25基因的突变株。结果表明，利用该自杀质粒，通过一轮筛选即可得到目标基因被抗性基因替换的突变株。pUC19K质粒的...

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刊期：2007年第12期

α-synuclein对小剂量鱼藤酮导致的线粒体损伤的调控作用研究

作者：鲁玲玲; 梁源; 段春礼; 赵春礼; 赵焕英; 杨慧 刊期：2007年第12期

建立稳定表达α-synuclein基因的人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞，鱼藤酮作用1、2、4周后分别提取各组细胞线粒体，检测其complex Ⅰ功能、线粒体膜肿胀度和超氧阴离子的含量。结果显示在1、2周时过表达α-synuclein基因的细胞与对照组细胞相比，前者的complex Ⅰ的活性高，线粒体膜肿胀度轻，线粒体超氧阴离子的含量少，但4周后，前者的complex...

致谢

刊期：2007年第12期

融和蛋白GST—SUMO—MT在大肠杆菌中的表达、纯化及其活性研究

作者：黄亚东; 苏烨; 丁长才; 张敏静; 李校堃; 苏志坚 刊期：2007年第12期

将编码融合蛋白GST-SUMO-MT的DN段连接到大肠杆菌表达载体pET-28a中，构建重组表达质粒pET-GS-MT并转化到大肠杆菌Origami（DE3）中。20℃，1mmol／L的IPTG诱导20h后，获得分子量约为43kDa的融合蛋白，表达量占菌体上清总蛋白的38．4％。利用谷胱甘肽交联琼脂糖（glutathione sepharose 4B）凝胶柱和Sephardex G-25分子筛联用可以得到纯度为95％...

重组肿瘤坏死因子-α衍生物的制备及聚乙二醇修饰

作者：毕研伟; 罗娜; 龙海亭; 杨增福; 杨旭; 李健锋; 徐维明 刊期：2007年第12期

应用搭桥PCR技术，将肿瘤坏死因子-α基因的前4位氨基酸的编码序列删除，对hTNF-α的第8／9／10／29／31／157位氨基酸的密码子进行定点突变，将突变后的cDNA插入到pBV220载体中构建重组质粒pBV220-tnf-αD4。将重组质粒转化大肠杆菌DH50t，筛选获得了高效表达TNF-αD4突变体的工程菌，表达的重组蛋白约占菌体蛋白总量的45％左右，经硫酸铵沉淀和阳...

Sumo分子伴侣与富含二硫键的抗真菌肽Drs基因的融合有助于其可溶性表达

作者：肖业臣; 秦玉侠; 解佳森; 刘孝菊; 庞实锋; 杨婉莹; 李校堃 刊期：2007年第12期

利用PCR引物延伸的方法合成了分子伴侣Sumo和抗真菌肽Drosomycin的融合基因，将其插入到表达载体pET-3c中，构建出重组表达质粒pET-3c-SD，并转化至大肠杆菌BL21（DE3）中。筛选重组转化子，进行表达条件的优化和表达产物的可溶性分析。结果表明在30℃件下，用0．5mmol／LIPTG诱导3h后，目的蛋白表达量最高，约占菌体总蛋白的22％，其中可溶性蛋...

天蓝淡红链霉菌SIPI-1482的dauW基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

作者：胡鹤; 尚珂; 胡又佳; 朱宝泉; 朱春宝 刊期：2007年第12期

柔红霉素产生茵一天蓝淡红链霉菌（Streptomyces coeruleorubidus）SIPI-1482位于基因组上dnrX和drrB之间的基因被克隆和测序，它与如r矽有较高的同源性，将其命名为dauW，并提交GenBank获得登录号EF523565，根据保守域推测dauW所编码的蛋白属于FAD依赖的氧化还原酶类。将dauW分别克隆至表达载体pET-28a（＋）、pET-32a（＋），转入大肠杆菌BL21...

青霉素酶基因在枯草芽孢杆菌中的高效表达

作者：赵洪坤; 刘兴旺; 邱强; 李秀星; 杜连祥 刊期：2007年第12期

以获得大量胞外青霉素酶为目的，将青霉素酶基因克隆至表达载体pWB980中，并转化到双蛋白酶缺陷的Bacillus subtilis DB104。重组菌在LB培养基中培养24h后，SDS-PAGE分析发现目的蛋白分子量为28kDa，酶活力为339U／ml；通过筛选7种不同的发酵培养基发现4。培养基更利于青霉素酶的表达，最大酶活力为1580U／ml，较优化前提高了3．66倍，并对该重...

南极深海底泥色盐杆菌属NJS-2 ectABC基因克隆及二氨基丁酸转氨酶ectA基因的表达

作者：傅英楠; 陈志亮; 姜蔚宇; 陈荣忠 刊期：2007年第12期

从南极深海底泥中分离筛选得到一株中性嗜盐菌Chromhalobactersp．NJS-2，以该菌株基因组为模板，利用PCR技术扩增出ectABC基因，基因全序列大小为2378bp。OMIGA软件分析该基因序列上含有三个阅读框，大小分别为576bp、1272bp和393bp，预测其分别编码二氨基丁酸乙酰转移酶（EctA）、二氨基丁乙酸转氨酶（EctB）和四氢嘧啶合酶（EctC）。将二氨基...

解淀粉芽孢杆菌抗菌活性物质的分离纯化及抑菌活性研究

作者：王英国; 王军华; 权春善; 范圣第 刊期：2007年第12期

植物真菌病害给农业生产带来了巨大损失，因此对生物农药的开发迫在眉睫。从堆肥中分离得到一株解淀粉芽孢杆菌，它具有强烈的抗真菌活性。其发酵液经硫酸胺沉淀得到粗提液，粗提液经Hiprep26／10 Desalting，HiLoad26／10 Q Sepharose和HPLC多步柱层析，分离纯化得到一种抗真菌活性物质。ESI—MS质谱法测得其分子量为1498Da。经活性检测发现，...

玉米原料高产γ-聚谷氨酸优良菌株的选育及发酵条件优化

作者：梁金钟; 李艳华; 范洪臣 刊期：2007年第12期

以筛选到的一株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）B-1为出发菌株，采用紫外诱变技术对出发菌株进行反复诱变，得到一株能够利用玉米原料生产γ-聚谷氨酸的优良高产菌株B-115，摇瓶发酵γ-聚谷氨酸的产量由原菌株的12．5g／L提高到19．5g／L。再以该菌株为研究对象利用响应面法进行碳源、氮源、谷氨酸钠、金属离子等发酵条件的优化实验，经48h摇瓶...

K202A突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的影响

作者：邹有土; 吴义真; 施文芳; 林琳 刊期：2007年第12期

利用易错PCR定向进化扩展青霉脂肪酶（PEL），获得了一株热稳定性有所提高的随机突变体（ep8），ep8包含有一个氨基酸的改变。为进一步提高其热稳定性，利用重叠延伸PCR法，以ep8基因为模板，将第202位赖氨酸突变为丙氨酸（K202A），构建表达质粒pA0815．ep8．K202A。并将其引入毕赤酵母GS115构建叠加突变体（PEL-ep8．K202A）。同时以野生型lip...

硅藻变温发酵生产二十碳五烯酸的研究

作者：曹小红; 赵玉华; 鲁梅芳; 雷静; 王春玲 刊期：2007年第12期

考察不了同温度（10℃～30℃）对硅藻（Nitzschia laevis）合成二十碳五烯酸（EPA）的影响，对不同温度下的发酵过程进行动力学特性分析。在此基础上，提出了EPA合成的变温培养方法：延滞期及对数期初期温度控制在25℃，从对数期中期开始在20℃条件下进行培养。采用此变温培养进行发酵，EPA的含量和产量分别达到了6．00％和291．60mg／L，较采用...

硝化菌保藏特性及衰减动力学研究

作者：任杰; 林炜铁; 罗小春; 谢明权 刊期：2007年第12期

采用单因素试验设计及一阶指数衰减模型，对影响硝化菌保藏过程中的4个主要影响因素（温度、pH值、离子强度和渗透压调节剂）进行了研究，并建立了硝化菌的衰减动力学方程。研究发现，当温度为4℃，离子强度为0．035×3mol／kg，pH7，60时，硝化菌衰减指数由0．25降至0．013，半衰期由2d延长至53d。在低温环境（4℃）下，添加甘油可以较好地延缓...