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MMP-9信号肽高效诱导PEX重组蛋白在COS7细胞中分泌表达

作者：宋琳; 张志谦 刊期：2007年第05期

为了便于收集和纯化,重组蛋白常需要引导至真核细胞外。蛋白能否分泌主要取决于其是否含有信号肽,由于不同信号肽诱导蛋白分泌的效率不同,高效信号肽的筛选已成为生物工程领域提高重组蛋白产量的重要策略之一。为了筛选诱导MMP-2C末端PEX在COS7细胞中高效分泌表达的信号肽,在PEX的N末端分别融合大鼠生长激素（rGH）、小鼠IgGκ链和人基质金属蛋白...

N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅱ促进小鼠乳腺癌细胞迁移研究

作者：葛宇清; 顾玉超; 于文功 刊期：2007年第05期

研究表明在恶性肿瘤细胞中常见有N-糖链的异常增多。N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅱ（N-acetylglucosaminyltransferase Ⅱ,GnT-Ⅱ）是合成复合型N-糖链的关键酶,但对肿瘤细胞功能的影响尚未有报道。为了研究GnT-Ⅱ在肿瘤发生发展中的作用及其机制,采用反转录PCR（reverse transcription-PCR,RT-PCR）的方法检测了组织来源相同而恶性程度不同的小鼠乳...

高浓度RA诱导小鼠胚胎干细胞分化为神经细胞

作者：申景岭; 单智焱; 王燕; 黄小义; 赵勇; 雷蕾; 金连弘 刊期：2007年第05期

目的：高浓度RA诱导小鼠ESC体外向神经细胞分化。方法：通过5μMRA刺激拟胚体向神经前体细胞分化,在不同基质上进一步诱导神经前体细胞分化为神经细胞,通过免疫荧光鉴定。结果：5μmol/LRA诱导神经前体细胞分化;神经前体细胞分化为β-tubulinⅢ阳性神经细胞,β-tubulinⅢ阳性细胞中有55%为GABA阳性,4%为CHAT阳性细胞。结论：高浓度RA诱导并结

猪抵抗素（resistin）表达载体的构建、表达及表达产物的纯化鉴定

作者：冷扬; 刘铀; 刘艳芬; 王群; 潘颖斌; 高志杰 刊期：2007年第05期

用PCR方法扩增到抵抗素基因（RSTN）并将其亚克隆至pET-32a（＋）表达载体,获得重组质粒pET-RSTN。将重组质粒转化大肠杆菌BL-21（DE3）感受态细胞,用IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测结果表明,重组resistin蛋白分子量大小约30kDa。对表达条件如温度、IPTG浓度及诱导时间进行优化并用SDS-PAGE检测。结果表明,30℃、4h、IPTG浓度为1mmol/L时,可溶性重...

Gin49-磷脂酶A2基因工程定点突变及酶活性分析

作者：窦佳; 蔡河; 姬芳玲; 崔文举; 王静云; 包永明; 安利佳 刊期：2007年第05期

为了确认49位谷氨酰胺磷脂酶A2（glutamine 49 phospholipase A2,Gln49-PLA2）酶活性缺失与氨基酸序列的相关性,对Gln49-PLA2编码基因第49位氨基酸进行PCR定点突变,利用pET32a＋质粒载体在大肠杆菌中表达Gln49-磷脂酶A2的突变体---天冬氨酸磷脂酶A2（aspartic acid 49 phospholipase A2,Asp49-PLA2-Q49D-PLA2）。将表达的包涵体蛋白变性,采用固...

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刊期：2007年第05期

蛇毒纤溶酶Alfimeprase在毕赤酵母中的优化表达及活性鉴定

作者：史婧; 张守涛; 齐亚飞; 郭蔼光 刊期：2007年第05期

alfimeprase（ALF）是蛇毒纤溶酶fibrolase的N端突变体,有纤溶活性而无出血活性。通过双酶切从克隆载体上获取目的基因alf,将其克隆至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA,经高效电转化、Zeocin筛选鉴定及培养条件pH、每天甲醇流加终浓度、菌体生长密度和甲醇诱导时间的优化,获得了重组ALF（rALF）高表达菌株pPICZαA-alf/GS115,且在优化条件下rALF的...

致谢

刊期：2007年第05期

枯草杆菌NX-2聚谷氨酸解聚酶的克隆表达及其降解性质研究

作者：金晶; 姚俊; 徐虹; 许琳 刊期：2007年第05期

利用PCR技术从γ-聚谷氨酸产生菌Bacillus subtilisNX-2的基因组DNA上扩增出聚谷氨酸内切解聚酶基因（ywtD）,克隆后测序,对该基因编码区进行了序列分析,比对结果表明扩增的ywtD基因编码与文献报道的序列相似性为99.0%,碱基的差异均表现为碱基取代,仅有一个碱基取代导致编码氨基酸的变化,即第349位密码子由GCC变为GTC。将ywtD基因克隆入表达载体p...

分枝杆菌甾酮C1，2位脱氢酶基因敲除的研究

作者：田琳; 李玉; 史文玉; 戴永鑫; 路福平; 王建玲; 杜连祥 刊期：2007年第05期

利用分枝杆菌对植物甾醇进行边链降解可产生4-AD（4-烯-雄甾-3,17-二酮）和ADD（1,4-二烯-雄甾-3,17-二酮）,ADD由4-AD在C1,2位脱氢酶（ksdD）作用下脱氢产生,这两种物质在化学结构上高度相似,难以分离。首先扩增出部分ksdD基因,大小为631bp,并以此为基础构建打靶载体pUC19-MK。将pUC19-MK电转分枝杆菌感受态,通过同源重组敲除分枝杆菌染色体上...

水稻端粒酶活性定量分析研究

作者：刘小川; 梁永恒; 陈波 刊期：2007年第05期

端粒酶活性直接与细胞的分生能力、生活力、生命力有着密不可分的关系,因此对其活性测定有着重要意义。参照人类端粒酶体外检测的原理和方法,设计了特别的先导引物和反向引物,采用不同的退火温度将PCR循环分成两步进行,再结合DNA凝胶电泳成像定量分析系统,以模式植物水稻为研究对象,对端粒酶活性定量检测方法和反应条件进行了探索。结果显示,水...

勘误

刊期：2007年第05期

维生素对谷氨酸棒杆菌SYPS-062直接发酵合成L-丝氨酸的影响

作者：张晓娟; 窦文芳; 许泓瑜; 许正宏 刊期：2007年第05期

研究了VB1,生物素,VB6,VB2,叶酸和VB12对一株谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）SYPS-062直接利用糖质原料发酵生产L-丝氨酸的影响,并且初步分析了这几种维生素对菌株SYPS-062发酵积累L-丝氨酸的调控机制。添加一定量的生物素,VB1和VB6表现出对L-丝氨酸积累分别为35%,28%和11%的促进;添加VB2实现了L-丝氨酸和生物量的等幅提高;而叶酸和...

两步发酵过程中有机酸对产1，3丙二醇的影响

作者：吕吉鸿; 诸葛斌; 沈微; 饶志明; 方慧英; 诸葛健 刊期：2007年第05期

考察了基因工程菌两步发酵生产1,3丙二醇过程中,有机酸对发酵过程的影响,并选用了不同的离子交换树脂对甘油发酵液进行处理。发现有机酸,特别是乳酸对1,3丙二醇生产的抑制作用最明显。在使用离子交换树脂处理有机酸的过程中,确定了使用005号离子交换树脂处理效果最好,005号离子交换树脂可除去大部分的有机酸,处理有机酸后的发酵液发酵产1,3丙二...

包埋氧化亚铁硫杆菌的海藻酸钙凝胶扩散特性研究

作者：徐绍霞; 张永奎; 向海; 陈宁; 梁颖; 黄亚洁 刊期：2007年第05期

采用非稳态法测定了FeSO4在未包埋氧化亚铁硫杆菌的凝胶中的有效扩散系数,分析包埋细菌的氧化情况。结果表明,FeSO4在凝胶中的有效扩散系数De随着海藻酸钠浓度的升高而降低,当海藻酸钠浓度为2%时最优;凝胶剂CaCl2的浓度对扩散系数的影响较小。包埋的氧化亚铁硫杆菌在10h达到增殖平衡,而FeSO4在包埋细菌的凝胶内扩散系数明显减少。包埋的氧化亚铁...