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Th表位修饰的BLyS突变体的构建及活性分析

作者：高会广; 府伟灵; 李蓉芬; 陈麟凤; 邢效如; 张艳; 何凤田 刊期：2005年第10期

在已克隆可溶性BLyS(sBLyS)cDNA的基础上,经PCR构建了其缺失不同区域的突变体(msBLyS)cDNA,然后将msBLyS cDNA与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)Th表位DNA序列重组,测序正确后分别克隆于原核表达载体pQE80L,并转化E.coli DH5α,经IPTG诱导后,融合蛋白以包涵体的形式表达,表达量均在菌体总蛋白的30%以上.包涵体经洗涤、溶解并经Ni-NTA层析纯化后,目的蛋白...

aFGF荧光分子探针基因的合成及其表达

作者：庞实锋; 郑青; 黄亚东; 周汝滨; 李校堃 刊期：2005年第10期

通过PCR技术和体外DNA重组技术将绿色荧光蛋白cDNA和酸性成纤维细胞生长因子cDNA构建成融合基因,克隆到表达载体pET3c中,构建成表达菌株BL21(DE3)/pET3c-GAF.经IPTG诱导表达,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的25%;DNA测序结果表明设计合成的融合基因与预期相符.Western blot结果表明重组蛋白具有aFGF的免疫原性.经IPTG诱导后的菌体及蛋白粗提液在...

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刊期：2005年第10期

丁酸钠和丙酸钠对工程CHO细胞生长代谢和嵌合抗体表达的影响

作者：马军; 董艳秋; 邹珉; 程联胜; 刘兢 刊期：2005年第10期

抗p185 erbB-2基因工程抗体是一种有潜力的抗肿瘤药物.以稳定表达抗p185嵌合抗体的重组工程CHO细胞株为对象,分别用不同浓度丁酸钠(0～2mmol/L)和丙酸钠(0～10mmol/L)对处在对数生长期的细胞进行处理,在连续5d的培养过程中,每隔24h取样测活细胞数量,并用ELISA检测上清中抗体含量,5d后结束培养用FACS检测细胞周期.同时还用丁酸钠和丙酸钠处理长至...

大容量人天然抗体库的构建、鉴定及初步应用

作者：唐晓明; 王清明; 杨俊涛; 陈吉中; 范国才; 汪思应 刊期：2005年第10期

从未经主动免疫的健康志愿者的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR扩增人抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,得到了6种VH家族基因,11种VL家族基因,这些抗体基因家族覆盖了人抗体基因多样性的95%以上.采用改进的SOE PCR法将VH基因和VL基因连接成人单链抗体(scFv)基因,并克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,将连接产物电转化大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M1...

化学工业出版社新书

刊期：2005年第10期

HA结合肽的筛选与序列分析

作者：茆灿泉; 刘畅; 马春燕; 徐柳; 佟鑫; 郭泰林; 李学如; 吴坚 刊期：2005年第10期

利用噬菌体随机十二肽库对羟基磷灰石进行结合肽筛选,经4轮生物淘洗和选择、噬菌体扩增和DNA测序,获得一组多肽序列,其中含有较高比例的脯氨酸、亮氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺以及疏水氨基酸.经Blast分析、CLUSTAL W多重序列比对推得羟基磷灰石结合肽可能的结合基序为VLPP、LP(X)6PL/X、PP(X)4～6P,(X为任意氨基酸).认为脯氨酸等氨基酸的高比例特性...

天蚕素A-蜂毒素杂合肽用pBV220载体的表达、纯化和活性测定

作者：王云起; 刘飞鹏; 李月琴; 张欣; 蔡继业 刊期：2005年第10期

为提高抗菌肽的表达,在抗菌肽的N端融合了1段酸性小肽以中和表达产物对宿主的毒性;并将融合肽基因同向串连成多拷贝,在大肠杆菌中获得了较高的表达.用化学合成法分别合成了编码天蚕素A(1-8)-蜂毒素(1-10)杂合肽和酸性小肽的DN段,首先将其拼接成融合肽的完整基因,然后通过前后接头将融合肽基因连接成两侧具有EcoRI和SalI酶切位点的同向串连的多拷...

槲寄生中多肽B6的分离纯化和一级结构测定

作者：孔景临; 杜秀宝; 范崇旭; 郑晓军 刊期：2005年第10期

采用离子交换、凝胶过滤、HPLC等提取、分离、纯化方法,从我国东北产槲寄生中得到第二种新成分槲寄生毒素B6.Edman降解结合质谱技术测定其一级结构为KSCCPNTTGRNIYNTCRFAGASRERCAKLSGCKⅡSASTCPSDYPK.进化分析说明该成分与白果槲寄生中的槲寄生毒素同源性很高,亲缘关系较近.同源模建表明B6是一种高α-螺旋的多肽.

离心粘结法制备孔隙连通的三维细胞支架

作者：陈际达; 刘伟; 崔磊; 曹谊林 刊期：2005年第10期

目的:改进多孔支架制备技术,使多孔支架具有孔隙结构均匀、孔隙连通性良好的特性.方法:间歇离心技术与湿度粘结方法结合,改善致孔剂粘结的均匀性;溶液浇注/颗粒沥析技术制备三维多孔细胞支架;扫描电镜观察支架的孔隙结构,原子吸收光谱检测致孔剂残余,力学实验仪与重量法表征支架的其它物理性能与制备条件的关系.结果:三维多孔支架的孔隙呈球形、...

科学出版社新书

刊期：2005年第10期

以重组人巨细胞病毒pp65制备的多克隆抗体建立检测感染性病毒颗粒方法

作者：李长贵; 王剑锋; 英志芳; 周铁群; 李娟 刊期：2005年第10期

人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染是造成器官移植失败的重要原因.建立灵敏、特异的检测方法可为及早发现感染、及时给予抗病毒治疗提供依据.以离子交换和分子筛方法纯化重组表达的HCMV pp65(rp65hp)抗原,经两步纯化后,rp65hp纯度达到95%.免疫家兔制备的抗血清,ELISA抗体滴度高达1:2 560 000;免疫印迹证明能与HCMV pp65抗原特异反应.将HCMV病毒感染...

用YO-PRO-1和PI联合染色定量检测细胞凋亡

作者：叶玲玲; 刘红; 李世崇; 刘兴茂; 吴本传; 陈昭烈 刊期：2005年第10期

经不同浓度staurosporine处理诱导凋亡的G7细胞样品,分别用YO-PRO-1/PI和AV/PI进行荧光染色,借助流式细胞仪检测凋亡情况,将两种检测方法得到的结果进行统计学分析显示,二者有显著的相关性(r=0.9659,P＜0.01),且没有显著性差异(P＜0.05);另外,上述凋亡细胞样品经YO-PRO-1/PI染色后在荧光显微镜下计数凋亡细胞比例的结果与AV/PI流式细胞仪的检测...

DNA甲基化微阵列

作者：黄庆; 府伟灵; 张华; 郭颖 刊期：2005年第10期

DNA甲基化微阵列是近年发展起来的高通量分析基因组水平DNA甲基化状态和模式的新型技术,已成为肿瘤表观遗传学组研究的重要工具之一.利用DNA甲基化微阵列研究某种疾病状态下异常甲基化的基因有利于进一步明确该疾病的表观遗传学异常机制,发现与之相关的表观遗传学标志物.现有的DNA甲基化微阵列主要包括CpG岛微阵列和甲基化寡聚核苷探针微阵列,根...

皮肤组织工程支架材料

作者：曹成波; 王一兵; 沈翔; 王勇 刊期：2005年第10期

皮肤组织工程支架材料为种子细胞提供生长和代谢的环境,是人工皮肤研究中的重要内容,可按来源分为合成支架材料和天然支架材料.近几年的研究重点是:前者通过表面仿生技术增强其对细胞的黏附性;后者通过物理或化学方法提高其力学性能和渗透性等.今后应重点研究以下内容:深入研究合成支架材料的表面改性,进一步提高其引导细胞行为的功能,促进材料...