作者:辛海明; 陈杰; 王刚; 蔡云; 候露; 刘利; 刘泽军 期刊:《中华血液学》 2007年第12期
ASPP家族成员抑制剂(inhibitory member of the ASPP family,iASPP)是最近发现的能特异抑制p53抑癌功能的蛋白。研究发现iASPP在多种肿瘤细胞中表达显著升高,提示通过抑制肿瘤细胞中iASPP基因的过表达有可能成为恢复p53抑癌功能的新策略。我们通过构建iASPP基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,将其分别转染到含野生型p53和非野生型p53基因白血病细胞株中,检测其对iASPP基因的沉默作用以及细胞凋亡的变化情况,探讨白血病...
作者:赖静; 夏爱军; 杨天燕 期刊:《中国医药导报》 2013年第29期
目的以pGPH1/GFP/Neo质粒为载体,构建特异性针对HP450基因shRNA真核表达载体,并通过脂质体介导转染正常的大鼠肝细胞株(BRL),以探讨靶向干扰HP450基因对BRL细胞生长的影响。方法构建pGPH1/GFP烈eo-HP450真核表达载体。应用脂质体转染技术,将重组的pGPH1/GFP/Neo-HP450真核表达载体转染至大鼠肝细胞株(BRL),并于转染后6、12、24h在荧光倒置显微镜下观察细胞状态。结果成功构建针对HP450基因shRNA真核表达载体pGPH1/G...
作者:朱国献; 朱函坪; 梁伟峰; 姚苹苹; 朱智勇 期刊:《中国媒介生物学及控制》 2005年第03期
目的构建汉坦病毒(HV)Z10株包膜糖蛋白G2基因的重组表达载体,探索其在昆虫细胞中的表达及在免疫荧光诊断中的应用.方法以质粒pUCm-Z10M为模板设计引物,用聚合酶链反应(PCR)扩增Z10株G2基因片段,将G2片段克隆入pUCm-T质粒载体,碱法提取质粒pUCm-Z10-G2,酶切后将回收片段插入杆状病毒转移载体pFastBacHTa,构建重组体pFastBacHTa-Z10-G2,重组体转化感受态细胞E.coli DH10Bac后,经2轮筛选,提取重组质粒转染昆虫细胞sf9,并用间接免疫荧...
作者:胡芳琳; 钟小林; 陈亚军; 钟警 期刊:《安徽医科大学学报》 2019年第11期
作者:武文; 焦玮; 周沛红; 李建国 期刊:《中华实用诊断与治疗》 2019年第08期
作者:玛依努尔·达吾提; 胡尼其古丽·阿巴克; 阿依努尔·玉苏普; 祖丽胡玛尔·阿卜杜合力力; 依米提·热合曼 期刊:《山东医药》 2018年第08期
目的探讨过表达miR-18a-5p对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法将结肠癌SW480细胞随机分为miR-18a-5p-e GFP组、NC-e GFP组、空白对照组,miR-18a-5p-e GFP组、NC-e GFP组分别转染含miR-18a-5p-e GFP、NC-e GFP的质粒DNA,空白对照组不予转染。转染48 h,采用MTT法检测各组细胞增殖抑制率,采用流式细胞术检测各组早期凋亡率和晚期凋亡率,采用qRT-PCR法检测各组miR-18a-5p靶基因DUSP5、FZD3、CCND2表达。结果 m...
作者:娄忠子; 杨彬; 兰喜; 李学瑞; 李志勇; 殷相平; 李宝玉; 柳纪省 期刊:《畜牧与兽医》 2010年第12期
通过PCR方法分别从含有猪圆环病毒2型(PCV-2)核衣壳蛋白(Cap)基因和猪γ-干扰素(PoIFN-γ)基因的重组克隆载体pMD18-PCV-2Cap和pMD18-PoIFN-y中扩增出Cap和PoIFN-γ的基因,将两基因亚克隆到真核表达载体pBudCE4.1中,构建重组真核双表达载体pBud-IFNPCV.重组质粒转染BHK-21细胞后进行ZeocinTM抗性筛选建立细胞系,阳性细胞通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot检测cap和PoIFN-y在BHK-21细胞中的表达.结果显示,试验中筛选出1株ZeocinTM抗...
作者:李娟; 孟淑芳; 张春涛; 王佑春; 尹红章; 李德富 期刊:《中国生物制品学》 2005年第03期
目的对HPV18型DNA疫苗的免疫原性和安全性进行初步评价.方法将HPV1gL1基因与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建DNA疫苗质粒pcDNA-L1.使用脂质体将重组质粒转染COS-7细胞,用Western blot检测体外瞬时表达的抗原.将重组质粒pcDNA-L1肌肉注射BALB/c小鼠(100μg/只),加强免疫3次后分别采集血清,用ELISA法和Westernblot法检测抗体,实时荧光定量PCR法检测质粒的组织分布.采用ELISA法检测DNA疫苗免疫后抗核抗体和抗双链DNA抗体的效价.结果...
作者:胡涌泉; 曾璐漫; 吴艳阳; 魏云林; 刘东波 期刊:《中南药学》 2017年第06期
目的本研究目的是构建一种能稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)人胰高血糖素样肽-1受体(GLP1R)的胰岛细胞系,用来筛选GLP1R激动剂类药物。方法使用X-treme GENE HP DNA Transfection Reagent将pCMV6-AC-GLP1R-GFP质粒转染到Rin-m5F细胞,经G418筛选单克隆Rinm5F/GLP1R-GFP细胞并扩大培养。结果该细胞能稳定传代,荧光显微镜下观察细胞绿色荧光分布均匀,Western blot验证GLP1R蛋白表达显著增加。在实验验证中,对照空白组中细胞绿色荧光分布均...
作者:陈宁; 张同琳; 姚宏伟 期刊:《中国生物化学与分子生物学报》 2006年第11期
组织因子(tissue factor,TF)是机体外源性凝血途径的启动因子,发挥生理性止血的重要作用.近来研究表明,TF除凝血功能外尚与多种恶性肿瘤的血管生成,侵袭转移及预后密切相关.为了探讨TF对人类肝癌细胞的影响,将成功构建带有正义/反义TF cDNA的真核细胞表达质粒pcDNA3.1-TF(+)/(-)转染人肝癌细胞系HepG2,经药物筛选后获得稳定细胞克隆;应用RT-PCR和Westem印迹检测内源性TF mRNA及蛋白质表达水平的变化;通过体外...
作者:霍晓霞; 张晓岚; 申建刚; 魏娟 期刊:《中华消化》 2007年第11期
粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)磷酸化后,对多种类型细胞的生物学行为具有重要影响,如促进增殖,正性调控细胞周期,增强粘附、迁移,控制凋亡等。粘着斑激酶相关非激酶(FAK—related non-kinase,FRNK)是FAK的内源性抑制剂。本研究应用体外细胞培养技术,以纤维连接蛋白(fibronectin,FN)刺激肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖,在脂质体介导下瞬时转染FRNK质粒,探讨选择性阻断FAK磷酸化对HSC增殖...
作者:徐娥; 任阳; 朱琳娜; 伍婷; 袁章琴; 黄艳娜; 汪以真 期刊:《农业生物技术学报》 2012年第11期
大麻素I型受体(CNR1)是介导内源性大麻素发挥作用的关键分子,在食欲和能量代谢调控中发挥着重要作用。为了更深入研究CNR1的基因功能,本实验旨在构建和筛选有效沉默CNR1基因的干扰表达载体,并筛选出稳定转染干扰质粒的阳性细胞系。设计合成3对CNR1基因的特异性发夹小干扰RNA(siRrA)干扰引物,将其连接入干扰载体pYr-1.1,构建可沉默CNR1基因的siRNA表达载体CNR1—1、CNR1.2和CNR1—3。并采用LipofectamineTM(Lip)2000介...
作者:宋国华; 刘佳; 司艳红; 姚树桐; 秦树存 期刊:《中国病理生理》 2010年第A10期
作者:郝军; 郑书深; 赵建德; 刘青娟; 赵松; 刘淑霞; 刘巍; 段惠军 期刊:《中国组织化学与细胞化学》 2010年第03期
目的 SREBP-1重组质粒转染人肾小管上皮细胞(HKC)检测SREBP-1基因表达和细胞内脂滴的关系。方法体外培养人肾小管上皮细胞并随机分为空白对照组、pcDNA3.1空质粒对照组和pcDNA3.1-SC1重组质粒转染组,采用阳离子脂质体法将SREBP-1特异性质粒pcDNA3.1-SC1及pcDNA3.1空质粒转染到细胞内并培养48小时,半定量RT-PCR和Westernblot分析目标基因表达丰度的变化,并采用油红O染色检测细胞内脂滴。结果 pcDNA3.1-SC1重组质粒转染的细胞内SRE...
作者:杨建青; 潘光栋; 褚光平; 刘强; 肖亿; 袁林; 刘振 期刊:《中华普通外科》 2008年第01期
目的研究干扰素α抑制乙肝病毒X蛋白诱导肝细胞癌侵袭转移的分子机制,为肝癌的临床治疗研究提供实验依据。方法采用脂质体法构建pcDNA3.1-HBx质粒转染CCL13细胞,将CCL13/HBx细胞与干扰素-α共培养,并用RT—PCR、Western Blot从mRNA和蛋白质水平检测CCL13/pcDNA3.1、CCL13/HBx、CCL13/HBx—INF—α中p202、PTEN基因表达,Transwell实验检测CCL13/pcDNA3.1、CCL13/HBx、CCL13/HBx—INF—α细胞侵袭能力。结果CCL13/HBx细胞...
作者:刘丹 彭易安 刘卓琦 汤蕾 尹东 何明 期刊:《中国药理学通报》 2013年第01期
目的探讨Bcl-2/Bad/mPTP通路在14—3—31对抗脂多糖所致心肌损伤中的作用。方法构建pFLAG-14—3—3r重组质粒,转染至原代乳鼠心肌细胞中,然后行LPS损伤处理。处理结束后,取培养液检测LDH活性,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,线粒体肿胀实验检测mPTP开放,Westernblot检测14—3—3r、Bad、phospho—Bad以及线粒体Bcl-2蛋白表达。结果LPS损伤使心肌细胞LDH活性升高、细胞存活率下降、凋亡细胞增加、mPTP开...
作者:王家兴 石铮 何庆良 期刊:《临床外科》 2009年第11期
作者:闻海兵 邹树峰 李嘉杰 洪涛 期刊:《 重庆医学》 2011年第19期
目的通过上调脑胶质瘤细胞U251的Cx43表达水平,检测其对U251侵袭能力的影响,为抑制肿瘤的恶性浸润提供新的治疗途径。方法通过构建缝隙连接蛋白Cx43真核表达重组质粒,并转染U251细胞,过表达U251细胞缝隙连接蛋白Cx43,RT-PCR及Weston-blot检测Cx43 mRNA及蛋白表达水平变化。用Traswell细胞培养板结合MTT法测定U251细胞侵袭能力的改变。结果 (1)成功构建pCMV-Cx43 cDNA重组质粒。(2)成功转染U251细胞并筛选稳定转染过表达Cx43细...
作者:徐丽 郭立平 朱淼 高雪 张路培 高会江 李俊雅 许尚忠 期刊:《中国畜牧兽医》 2013年第05期
为了研究固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element binding factor 1,SREBP1)基因的表达与细胞脂肪形成的关系,本研究构建了pEGFP-C1-SREBP1重组质粒,利用脂质体介导法将重组质粒pEGFP-C1-SREBP1及pEGFP-C1空质粒转染至牛胎儿骨骼肌成纤维细胞培养48h,实时荧光定量PCR和Western blotting分析目标基因表达水平的变化,并采用油红O染色检测细胞内脂滴。结果发现,pEGFP-C1-SREBP1重组质粒转染细胞内SREBP1mRNA的表达水平显著...
作者:龚丽景 胡扬 李燕春 梅涛 期刊:《体育科学》 2014年第05期
Case-Control研究表明,人线粒体基因(mtDNA)D-Loop区mt235、mt514—515、natl6183、mtl6290和mtl6319多态位点与有氧运动能力有关。拟从下游基因表达做进一步的研究,以探讨上述多态位点的分子调控机理。方法:采用全基因组合成法合成包含上述多态位点的DNA序列,分别连接到pGL3一promoter载体构建重组质粒,将重组质粒转染至293T细胞,观察携带5对mtDNA质粒对下游双荧光素酶报告基因的表达及荧光素酶mR—NA表达的影响。结果:...