中国生物制品学杂志 北大期刊 CSCD期刊 统计源期刊

抗氨基末端脂多糖结合蛋白基因工程抗体库的构建及体外表达筛选

作者：王长松; 刘友生; 李红; 葛晓冬; 邓军; 陈燕平 刊期：2005年第03期

目的构建人源化的单链可变区抗体库,运用体外表达技术翻译并筛选特异性的抗NH-LBP抗体.方法分离健康人外周血单核细胞,抽提总RNA设计引物,扩增抗体轻重链的可变区,通过一段柔性片段将其连接成单链抗体库;应用体外表达技术翻译抗体库,并筛选出与NH-LBP高度结合的单链抗体片段.结果扩增的单链抗体可变区片段分别为340 bp和325 bp,经连接后约为750 ...

人层粘连蛋白α4链LG1组件融合蛋白的表达

作者：连继勤; 张玉静; 戴旭芳; 张艳宇; 何凤田 刊期：2005年第03期

目的表达重组人层粘连蛋白α4链LG1组件(Human Laminin Alpha4 LG1 Module,hLNα4LG1)蛋白并检测其抗原性.方法采用RT-PCR方法从人胎盘组织扩增hLNα4LG1的cDN段,用T/A克隆法将其插入pMD-18T载体进行测序.用DNA重组技术构建原核表达载体pET-28a-LG1,用BL21(DE3)/pET系统表达hLNα4LG1融合蛋白,SDS-PAGE鉴定表达产物,用Ni-NTA亲和柱对表达蛋白进行纯...

RGD特异性结合多肽与重组改构人肿瘤坏死因子融合基因的克隆表达及其抑瘤活性

作者：王慧; 颜真; 赵宁; 张英起 刊期：2005年第03期

目的构建RGD多肽与重组改构人肿瘤坏死因子融合基因,进一步提高rmhTNF的临床疗效.方法应用基因重组技术构建了CRGDC与rmhTNF的融合基因,在E.coli DH5α中诱导表达重组蛋白RGD-rmhTNF,采用溶菌酶法裂解菌体,裂解上清经硫酸铵沉淀、阴阳离子交换层析纯化后,用S180荷瘤小鼠模型和L929细胞体外杀伤实验测定纯化的重组蛋白RGD-rmhTNF的体内、外杀伤活...

《免疫接种的反应和处理》征订启事

刊期：2005年第03期

重组人BAFF134-285的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

作者：陈麟凤; 何凤田; 李蓉芬; 钟小林 刊期：2005年第03期

目的克隆人TNF家族的B细胞激活因子(B cell activatingfactor to the TNF family,BAFF)胞外区cDNA,并进行高效表达和纯化.方法提取人新鲜扁桃体组织总RNA,经RT-PCR扩增编码人BAFF胞外区134～285氨基酸残基cDNA,经序列测定后,克隆至pQE-80L载体中,并转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达及Ni2+-NTA柱层析纯化目的蛋白,最后经SDS-PAGE和Western blot检...

鼠白细胞介素-2（mIL-2）真核表达质粒的构建及蛋白检测

作者：姜春来; 马红霞; 于湘晖; 吴永革; 李惟; 孔维 刊期：2005年第03期

目的构建重组鼠白细胞介素-2的真核表达体系,获得mIL-2基因的表达质粒,用其提高DNA疫苗的免疫原性.方法从经PMA刺激的小鼠脾细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术调取鼠白细胞介素-2基因,并将其克隆至真核表达质粒VR1012中,转染COS-7细胞,将转染细胞裂解,进行Western blot检测.结果获得完整的带有信号肽的mIL-2序列的质粒,经Western blot检测阳性.结...

广西流行的猪瘟病毒株E2基因序列测定及分析

作者：廖素环; 罗廷荣; 吴显实; 刘芳; 陆芹章; 黄伟坚; 温荣辉; 秦爱珍; 余克伦 刊期：2005年第03期

目的对广西流行的猪瘟病毒E2基因进行序列测定及分析.方法应用PCR对15株猪瘟病毒E2基因进行扩增、克隆及测序,利用DNAstar分析软件对所测定的15株毒株与兔化弱毒(HCLV)、石门(Shimen)毒株的相应基因片段进行同源性分析.结果得到长度为1092 nt猪瘟病毒E2基因,编码364个氨基酸残基的目的基因片段.广西株与HCLV、Shimen株的核苷酸同源性分别为81.5%...

从猪血中提取纯化凝血酶方法的改进

作者：周文静; 吕嘉枥 刊期：2005年第03期

凝血酶(Thrombin)是在血液凝固系统中起重要作用的丝氨酸蛋白水解酶,具有较高的专一性,是近几年来国内开发的一种新型速效局部止血药.国内外对牛和人的凝血酶制备作了大量研究,但对猪凝血酶的研究报道较少,而且其制备工艺复杂,技术要求高,不利于工业化生产.我国生猪产量位居世界第一,年产猪血约10万吨.这些猪血除少量以简单的血粉形式被利用外,...

人恶性黑色素瘤A375细胞黑素刺激素受体（MCIR）的检测

作者：李铁征; 李泽鸿; 李月红; 邱业峰; 张培因; 王树君; 朱平 刊期：2005年第03期

目的检测人恶性黑色素瘤A375细胞膜上MCIR蛋白及其cDNA，为研究黑色素瘤细胞表面受体及靶向配体莫定基础。方法利用放射配体分析法检测人恶性黑色素瘤A375细胞膜上的MCIR蛋白；用RT-PCR方法扩增人恶性黑色素瘤A375细胞MCIR的cDNA，并克隆至洲D18T质粒，进行酶切分析鉴定及扩增片段DNA序列测定。结果放射配体分析结果表明，^125I-αMSH可与人恶性...

更正

刊期：2005年第03期

携带人血管抑制因子K1-5基因的腺相关病毒载体的构建及其对血管内皮细胞的抑制作用

作者：高雪军; 伍志坚; 封多佳; 吴小兵; 侯云德 刊期：2005年第03期

目的构建含人血管抑制因子K1-5基因的重组腺相关病毒载体rAAV-K5,研究其在体外表达及对血管内皮细胞的抑制作用.方法将K1-5基因插入通用型AAV载体质粒pSNAV中,构建重组质粒pSNAV-K5.用pSNAV-K5转染BHK-21细胞,经G418选择培养基培养载体细胞株BHK/K5.用辅助病毒感染BHK/K5细胞包装出重组病毒rAAV-K5.研究rAAV-K5感染BHK细胞获得的培养上清对血管...

人类免疫缺陷病毒1型C亚型核心蛋白（Gag）在大肠杆菌中的表达

作者：王杨; 褚嘉祐; 周东霞; 孙明; 黄小琴; 俞建昆 刊期：2005年第03期

目的表达人免疫缺陷病毒1型C亚型核心蛋白Gag,为HIV感染的诊断和疫苗的研制奠定基础.方法通过PCR扩增获得HIV-1 gag基因片段,并将其克隆到原核表达载体pGEX-5X-1的tac启动子下游,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDS-PAGE和Western blot分析验证其表达产物.结果表达产物是相对分子质量为82 000的GST融合蛋白,且能与抗p24...

狂犬病毒aG株糖蛋白在CHO细胞中的表达

作者：钱源; 孙明波; 张鸣; 杨卉娟; 蒋燕军; 姜述德; 廖国阳; 李卫东 刊期：2005年第03期

目的克隆狂犬病毒aG株糖蛋白(Glycoprotein)基因,构建重组真核表达载体,在CHO细胞中表达aG株糖蛋白.方法采用RT-PCR,从狂犬病毒aG株基因组RNA中扩增GP基因,并将该基因克隆至真核表达载体pCI-dhfr上,以脂质体介导法转染CHO-dhfr-细胞.用MTX筛选的抗性克隆经ELISA、免疫荧光及Western blot检测GP蛋白的表达.结果克隆到狂犬病毒aG株糖蛋白全长基因,...

SARS病毒刺突蛋白片段在大肠杆菌中的表达和纯化

作者：方勇; 张秀霞; 王宣军; 王志武; 李洋; 盛军 刊期：2005年第03期

目的获得SARS病毒表面刺突蛋白片段.方法用PCR方法克隆SARS S2片段基因,并在大肠杆菌中进行表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定,阴离子交换层析纯化.结果SARS病毒S2片段基因在大肠杆菌中获得了高表达,表达量占总蛋白的50%以上;得到纯度大于90%的SARS蛋白样品.结论获得了能够应用于SARS疫苗研究的SARS蛋白样品.

人乳头瘤病毒（HPV）18型晚期蛋白L1DNA疫苗的免疫原性及安全性

作者：李娟; 孟淑芳; 张春涛; 王佑春; 尹红章; 李德富 刊期：2005年第03期

目的对HPV18型DNA疫苗的免疫原性和安全性进行初步评价.方法将HPV1gL1基因与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建DNA疫苗质粒pcDNA-L1.使用脂质体将重组质粒转染COS-7细胞,用Western blot检测体外瞬时表达的抗原.将重组质粒pcDNA-L1肌肉注射BALB/c小鼠(100μg/只),加强免疫3次后分别采集血清,用ELISA法和Westernblot法检测抗体,实时荧光定量PCR法检...