摘要：大麻素I型受体（CNR1）是介导内源性大麻素发挥作用的关键分子，在食欲和能量代谢调控中发挥着重要作用。为了更深入研究CNR1的基因功能，本实验旨在构建和筛选有效沉默CNR1基因的干扰表达载体，并筛选出稳定转染干扰质粒的阳性细胞系。设计合成3对CNR1基因的特异性发夹小干扰RNA（siRrA）干扰引物，将其连接入干扰载体pYr-1．1，构建可沉默CNR1基因的siRNA表达载体CNR1—1、CNR1．2和CNR1—3。并采用LipofectamineTM（Lip）2000介导质粒转染L6细胞，绿色荧光蛋白的表达和流式细胞仪监测转染效率，通过实时荧光定量分析siRNA表达载体的干扰效果。并进一步用G418进行了稳定转染细胞筛选。结果显示，CNR1基因的siRNA表达载体构建正确，瞬时转染L6细胞的转染效率分别为10．45％（／9〈0．01）、8．57％（P〈0．01）和8．71％（P〈0．01）；干扰效率为39％（P〈0．05）、64％（P〈0．01）及68％（P〈0．01）。稳定筛选的最佳G418浓度为800μg／mL，稳定筛选后干扰效率分别为43％（P〈0．05）、78％（P〈0．01）及91％（P〈0．01）。干扰效率较高的CNR1．3表达载体和稳定转染CNR1—3的细胞系为构建筛选成功的siRNA表达载体和阳性细胞系。本研究提供了一种有效沉默CNR1基因表达的方法，同时稳定沉默的阳性L6细胞系成功筛选为进一步研究大麻素I型受体的基因功能提供了基础资料。

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