作者:余光银; 陶丽丽; 殷晓敏; 陈耀丽; 王柳 期刊:《中国现代药物应用》 2020年第03期
目的通过激活自噬来研究相互作用蛋白(SVIP)对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化的关键作用。方法用图像实验室软件Bio-Rad进行密度分析,用GraphPad进行统计分析。荧光显微镜检测脂滴和自噬体,进行图像采集和图像分析。结果在HepG2细胞中,SVIP可以激活自噬,但饥饿不能在体外和体内增加SVIP的表达。此外,与自噬活性和脂滴体积一致的SVIP表达在体内和体外用CCl4处理的肝纤维化进展期间首先增加然后减少。以及可以保护HepG2细胞免受CCl4的...
作者:王萱; 田九博; 张丽娜; 马培元; 于保锋 期刊:《中国生物制品学》 2019年第11期
目的分析胶原三股螺旋重叠蛋白1(collagen triple helix repeat containing 1,CTHRC1)的理化性质和分子结构,为进一步研究CTHRC1的分子功能及促癌机制提供参考。方法利用NCBI、ExPASy、SignalP、TMHMM、PSORTⅡ、SOPMA、Conserved Domain、SWISS-MODEL、STRING等软件对CTHRC1蛋白进行系统分析。结果CTHRC1为一种碱性不稳定的亲水性蛋白,有信号肽,无跨膜区,定位于细胞外的可能性最大;CTHRC1二级结构的主要形式是无规卷曲,含有1个Col...
作者:袁连玉; 梁国鲁; 杨松光; 童华荣 期刊:《植物生理学报》 2018年第01期
表观遗传修饰是真核生物基因转录调控的重要方式,在拟南芥生长发育过程中起着重要的作用。其中,PRC2(Poly-comb Repressive Complex 2)蛋白复合体和组蛋白脱乙酰化酶HDAC均为重要的表观遗传调控蛋白。本研究利用酵母双杂交系统证明了拟南芥PRC2蛋白复合体成员中的AtMSI1(Multi-Copy Suppressor of IRA1)蛋白和组蛋白脱乙酰化酶AtHDA6(Histone Deacetylase 6)蛋白间的相互作用,且确定其作用位点为AtMSI1蛋白的N端(1~114 aa)...
作者:周晓涛; 周文涛; 夏开德; 刘化蝶; 彭震; 赵云娟; 迪丽娜尔·波拉提; 李家大 期刊:《生物技术通讯》 2018年第01期
目的 利用酵母双杂交技术从人cDNA文库中筛选人前动力蛋白受体2 (hPROKR2) C端相互作用蛋白.方法: 复苏酵母菌Y2HGold-hPROKR2-C, 与人cDNA文库杂交, 计算杂交效率; 筛选相互作用克隆并测序, 寻找hPROKR2蛋白C端相互作用蛋白; 通过在DDO/X、 QDO/A/X平皿上划线, 对筛选到的人cDNA文库质粒的自活性进行验证; 采用GSTpulldown进一步验证两者之间的相互作用.结果: 酵母双杂交实验的杂交融合效率为1.375×108; 在人cDNA文库中筛选出...
作者:沈璐; 汤建光; 唐北沙; 江泓; 赵国华; 夏昆; 张玉虎; 蔡芳; 谭利明; 潘乾 期刊:《中华医学遗传学》 2005年第03期
目的筛选ataxin-3的相互作用蛋白并进行互作结构域分析,探讨ataxin-3的功能和脊髓小脑型共济失调Ⅲ型/马查多-约瑟夫病的发病机理. 方法应用酵母双杂交系统3,从成人脑cDNA文库中筛选和鉴定突变型ataxin-3的互作蛋白,构建ataxin-3蛋白羧基端Bait质粒,进行互作结构域分析.应用激光共聚焦显微镜观察ataxin-3与所筛到的互作蛋白在哺乳动物细胞中的共定位情况. 结果分离获得5个新的ataxin-3互作蛋白,视紫红质-二磷酸鸟苷解离抑制因子α、...
作者:孙媛媛; 刘佳; 富伟能 期刊:《中国医科大学学报》 2018年第06期
目的构建MYCT1-GST原核表达载体,并纯化MYCT1-GST融合蛋白。方法以正常人外周血c DNA为模板,PCR方法扩增该基因的开放阅读框,定向克隆至pET28a(+)载体后送测序鉴定。将构建好的MYCT1-GST表达载体转化至BL21(DE3)菌株,通过IPTG诱导表达,PCR结合测序方法鉴定载体构建是否成功,Western blotting方法鉴定MYCT1-GST融合蛋白的表达。结果测序结果证实成功将MYCT1的开放阅读框克隆至pET28a(+)表达载体,经诱导后成功纯化了MYCT1-GS...
作者:修霞; 吕志民 期刊:《中国医学科学院学报》 2005年第01期
表皮生长因子与其受体结合后,可导致受体的二聚化和自我磷酸化,诱发细胞内信号传导,控制细胞的一系列功能.受体激活的同时可引起受体的泛素化和内化,并在溶酶体进行降解以控制受体活性及信号传导的持续时间和强度.泛素连接酶Cb1及其相互作用蛋白CIN85,和运输所需要的内涵体分选复合物(ESCRT)在这个负向调节过程中起重要作用.由表皮生长因子受体或Cb1变异而引起的调节中断,可导致肿瘤发生.
作者:曾雪英; 黄功华 期刊:《赣南医学院学报》 2005年第01期
目的:测定一种与人蛋白激酶CKα'亚基相互作用蛋白的cDNA序列.方法:选择一个与人蛋白激酶CK2α'亚基相互作用蛋白的重组质粒pGADT7-Library cDNA,使用BigDyeTM荧光标记终止底物循环测序试剂盒,用载体pGADT7的T7-启动子为测序引物,在ABI PRISM 310型基因分析仪上进行DNA测序.结果:该重组质粒的插入片段与泛素-核糖体蛋白S27a cDNA序列只有一个碱基的差别.结论:通过DNA测序,该种与人蛋白激酶CK2α'亚基相互作用蛋白为泛素-核糖体蛋白S27...
作者:刘畅; 刘安 期刊:《生物信息学》 2018年第01期
核糖体蛋白S6激酶β1(Ribosomal protein S6 kinaseβ1,RPS6KB1)是一个有价值的肝癌诊断和预后标志物,也是一个潜在的基因治疗分子靶点,但其致癌机制和预后价值仍未完全阐明。为了全面认识RPS6KB1,本文使用生物信息学手段,对RPS6KB1蛋白的序列同源性、组织表达、亚细胞定位、理化性质、空间结构及蛋白质相互作用网络进行分析。结果表明人RPS6KB1基因编码525个氨基酸组成的多肽,在进化过程中高度保守,属于PKc_like超家族,是酸性不稳定...
作者:刘畅; 刘安 期刊:《生物信息学》 2018年第03期
FOXD3(Forkhead box D3)作为一个有价值的肿瘤预后标志物,其抑癌机制和预后价值仍未被完全阐明。为了全面认识FOXD3,本研究利用生物信息学手段,对FOXD3蛋白的氨基酸序列同源性、理化性质、组织表达、亚细胞定位、空间结构及蛋白质相互作用网络进行了预测和分析。结果表明:人FOXD3蛋白是酸性不稳定的亲水蛋白,在进化过程中高度保守,无信号肽和跨膜区域,属于FH超家族。该蛋白定位于细胞核的可能性最大,主要二级结构为无规...
日本Tsukuba大学的Emiko Noguchi博士及其同事在以前的研究中发现螨过敏性哮喘与染色体5q33上的标志相关。目前,研究人员进一步在这个区确定了可能的哮喘易感基因。对155个哮喘家庭基因突变的筛查显示有6个影响哮喘发生的基因多态性。而且所有的变异体都位于细胞质脆性X智力低下蛋白相互作用蛋白2(CYFIP2)的基因上。
作者:董战旗; 蒋亚明; 潘敏慧 期刊:《中国农业科学》 2019年第02期
【目的】HSP60是热休克蛋白中重要的一员,在昆虫先天性免疫过程中起重要作用,同时也是昆虫生长发育的必要因子。前期研究证明家蚕BmHSP60参与家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)入侵细胞过程,本研究通过鉴定BmHSP60相互作用蛋白,为其在家蚕先天性免疫中作用机制研究打下基础。【方法】利用免疫共沉淀和银联-质谱分析技术(LC-MS/MS),首先构建BmHSP60过表达载体并融合Flag标签,转染到家蚕细胞中48 h后,收集...
作者:王震; 孟宪敏; 曹慧青; 刘冬青; 冯艳; 尤昕; 王茵; 郭莲军; 屈伸 期刊:《科学通报》 2004年第21期
为了研究人新基因nelin及其心肌表达产物Nelin蛋白的生物特性,并寻找能够与其发生相互作用的蛋白质,对Nelin蛋白的全长及其部分结构域进行了肌动蛋白结合共沉淀实验,并在真核细胞内进行了免疫荧光共定位实验.结果发现,在体外共沉淀和细胞内共定位实验中Nelin均表现出同肌动蛋白相结合的能力.进一步采用酵母双杂交的方法将Nelin与人心脏cDNA文库进行杂交筛选,得到了3个阳性克隆分别为细丝蛋白(Filamin)C亚型、肌联蛋白(Titin...
作者:赵静; 王军; 陈洋; 郑立双; 孙城涛; 吕文发 期刊:《中国兽医》 2013年第10期
本研究利用酵母双杂交系统筛选与牛肌肉生成抑制素(MSTN)相互作用的蛋白,为阐明MSTN生物学功能的调控机制奠定基础.首先,构建诱饵质粒pGBKT7-MSTN转化Y2 HGold酵母菌,随后,与构建好的牛肌肉cDNA文库Y187酵母菌杂交配对,涂布接种在SD/-Trp-Lew His-Ade营养缺陷培养基上筛选与MSTN相互作用的蛋白,并通过免疫共沉淀技术对筛选到的T-cap与MSTN进行相互作用验证.结果表明:经酵母双杂交两轮严格筛选,最终得到一种可能与MSTN特异性相互...
作者:胡巍; 肖志强; 陈主初; 李建玲; 张鹏飞; 冯雪萍; 易红; 余艳辉; 唐新科; 刘清萍; 梁宋平 期刊:《生物化学与生物物理进展》 2004年第07期
鼻咽癌中p53基因突变罕见,但绝大部分鼻咽癌中存在p53蛋白过表达/聚集且功能失活.然而,到目前为止p53蛋白失活的机制仍然不清楚.为揭示鼻咽癌中p53蛋白功能失活的机制,采用免疫共沉淀技术分别富集鼻咽癌细胞系HNE1和HNE2的p53结合蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对免疫沉淀复合物进行分离,从胶中切取p53结合蛋白条带,胶内酶解后进行电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)分析,得到相应的肽序列标签(peptide sequence tags,PST),通过...
作者:台桂香; 徐桂月; 张鹏宇; 劳凤学; 王奭骥; 崔雪玲; 杨煜; 土田邦博; 柳忠辉 期刊:《中国生物制品学》 2005年第02期
目的在发现和克隆新的激活素受体相互作用蛋白3(ActRIP3)基因的基础上,探讨ActRIP3在海马神经细胞介导激活素信号传导的作用.方法利用GST-ActRIP3融合蛋白免疫家兔制备抗ActRIP3抗体,采用RT-PCR及免疫组化染色分析ActRIP3在脑组织中的表达与分布,采用pcDNA-ActRIP3与CAGA-lux质粒共转染海马神经细胞,分析信号传导作用.结果RT-PCR及免疫组化染色显示ActRIP3在海马神经细胞中高表达,构建的pcDNA-ActRIP3表达载体在体外培养海马神经细...
作者:毛山山; 程小珍; 崔荣花; 元建华; 王美清 期刊:《海南医学》 2017年第17期
目的 构建含有NGAL基因的p3XFLAG-NGAL真核表达载体并对其进行鉴定,获取人乳腺癌细胞MCF7中NGAL相互作用蛋白.方法 提取MCF7细胞中总RNA,反转录为cDNA后采用聚合酶链反应扩增NGAL基因,上下游分别引入NotⅠ和EcoRⅠ酶切位点,双酶切后将其插入p3XFLAG-CMV-14质粒中,构建p3XFLAG-NGAL重组质粒,并进行双酶切和测序鉴定.采用脂质体法转染该质粒至MCF7细胞中,经Western blot检测FLAG-NGAL融合蛋白的表达情况.再使用FLAG pull-down技术和...
作者:王静; 张学梅; 李征; 李夏雨; 马健; 沈守荣 期刊:《湖南医科大学学报》 2017年第04期
目的:利用亲和纯化技术联合质谱分析筛选鉴定与S100A8和S100A9相互作用的蛋白,为探讨S100A8和S100A9在结肠炎相关性结肠癌发生发展中的作用机制提供线索。方法:构建含有S100A8和S100A9 CDS区和Flag亲和标签的真核表达载体p3×Flag-CMV-S100A8和p3×Flag-CMV-S100A9,将其转染至HEK293细胞中,48 h后收集蛋白。运用标签分离纯化S100A8和S100A9蛋白,液相质谱/质谱分析技术(liquid chromatography mass spectrometry/mass spectrometry...
作者:何火聪; 苏颖; 林少俊; 邹长棪; 林可焴; 潘剑茹; 陈超 期刊:《肿瘤防治研究》 2017年第02期
目的筛选放射抗拒鼻咽癌细胞中Annexin A2的相互作用蛋白,以探讨Annexin A2在鼻咽癌放射抗拒中的作用机制。方法采用免疫共沉淀结合质谱(MALDI-TOF/TOF)技术筛选并鉴定放射抗拒鼻咽癌细胞CNE-2(R743)中Annexin A2相互作用蛋白,用Mascot软件在NCBInr数据库对质谱数据进行检索,生物信息学分析Annexin A2及其相互作用蛋白在放射抗拒鼻咽癌细胞中的作用。结果有5种蛋白与Annexin A2存在相互作用,分别是Calnexin、HSP90、GRP78、Vim...
作者:刘媛; 王文博; 邹自英; 朱冰; 胡宗海; 熊杰 期刊:《生命科学研究》 2016年第06期
富亮氨酸重复序列(Fli-1)相互作用蛋白-1(leucine-rich repeat(in flightless I)interacting protein-1,LRRFIP1)可与人flightless I(FLI)蛋白的leucine-rich repeat(LRR)结构域结合,具体作用并不明确,可能参与肌动蛋白的组装。近年来研究发现LRRFIP1在小鼠成纤维细胞和巨噬细胞中能够促进Ⅰ型干扰素的表达,同时LRRFIP1的过表达能够降低病毒感染水平,提示LRRFIP1可能参与病毒感染诱导的先天免疫应答。肝脏作为人体重要的消化器官,...