摘要：目的:制备特异性杀伤HPV16阳性宫颈癌细胞的CAR-T细胞,初步探索CAR-T细胞治疗宫颈癌的可行性。方法:以HPV16 E711-19:HLA-A*0201复合物为靶点,合成第三代CAR基因序列,并克隆到慢病毒表达质粒,通过293T细胞包装慢病毒,将其转导人外周血T细胞,制备CAR-T细胞,采用流式细胞术检测CAR-T细胞的转导效率。将CAR-T细胞分别与宫颈癌细胞株HPV16+Ca Ski和HPV18+HeLa共培养,使用CCK-8试剂盒检测CAR-T细胞的杀伤效果,以及利用ELISA测定CAR-T细胞分泌IFN-γ和IL-2的水平。结果:流式细胞术检测显示T细胞的慢病毒转导效率为41.2%,其中CD4+T细胞为85.2%,CD8+T细胞为30.9%。体外共培养实验CAR-T细胞与Ca Ski和HeLa细胞为10:1时,对应的细胞活力分别为56.8%和98.3%。CAR-T细胞对Ca Ski细胞具有较强的细胞毒性,而对HeLa细胞的杀伤作用较小。Ca Ski细胞培养基中IFN-γ浓度达到100 pg/mL,IL-2浓度达到24 pg/mL,而HeLa细胞培养基中IFN-γ为16 pg/mL,IL-2为6 pg/mL。结论:我们成功制备靶向杀伤HPV16阳性宫颈癌细胞的CAR-T细胞,为CAR-T细胞治疗宫颈癌提供了初步的研究支持。

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