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表达猪细小病毒VP2基因的重组伪狂犬病病毒构建及其免疫原性

作者：宋文博; 彭忠; 喻红艳; 国师榜; 范桂芳; 汤细彪; 吴斌 刊期：2019年第11期

猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)和伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)均可引起母猪的繁殖障碍疾病。本试验以PRV基因工程弱毒株rPRVSMX为载体,构建了表达PPV流行毒株VP2基因的重组PRV(rPRVSMX-VP2)。Western blot和IFA试验均证明了重组病毒在细胞中成功表达了VP2蛋白。动物试验结果证明重组病毒可以诱导猪体产生特异性的PPV抗体,首免后4...

猪圆环病毒3型Rep蛋白的表达与多克隆抗体制备

作者：连凯琪; 周玲玲; 张明亮; 张杰; 王英杰; 宋玉伟; 王双山 刊期：2019年第11期

为研究猪圆环病毒3型(PCV3)Rep基因在大肠杆菌中表达产物的反应原性和免疫原性,本试验对Rep基因进行原核表达和纯化,鉴定表达产物与PCV3阳性血清的反应性;制备重组Rep蛋白的多克隆抗体,Western blot鉴定多克隆抗体与重组Rep蛋白的特异性识别能力,通过ELISA测定多克隆抗体的效价。结果显示,Rep在大肠杆菌中获得大量表达,且主要以包涵体形式存在,...

PCV3Cap基因在昆虫杆状病毒中的表达与鉴定

作者：姜宇航; 徐一鸣; 许汪; 杜寿文; 宋利娜; 陈竞; 郝鹏飞; 金宁一; 李昌 刊期：2019年第11期

试验旨在获得具有天然构象且反应原性良好的猪圆环病毒3型(porcine circoviurs 3,PCV3)Cap蛋白。以本实验室保存的PCV3Cap基因为模板,设计不同引物扩增Cap基因,将其亚克隆至pEASY-Blunt载体上,验证正确后将目的基因分别克隆至杆状病毒表达载体pFastBacTM上(含有双启动子),获得含有2个PCV3Cap基因的重组质粒pFBD-P2C。将该重组质粒转化大肠杆菌DH...

PEDV S基因的B细胞表位嵌入型乳杆菌S-层蛋白的原核表达及其鉴定

作者：朝木丽格; 侯殿文; 韩佳; 黄天鹏; 吴咪; 贺海燕; 格日勒图 刊期：2019年第11期

利用生物软件和在线数据库中筛选出猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S基因的B细胞表位,通过overlap PCR方法将其嵌入到嗜酸性乳杆菌的S-层蛋白基因中,获得融合基因SLP-EpitopeS。将该融合基因导入到原核表达载体pGEX-4T-3中,成功构建了原核表达载体pGEX-SLP-EpitopeS。经过双酶切和PCR方法以及基因测序方法验证融合表达...

感染PRRSV弱毒株后仔猪病毒血症和抗体产生规律

作者：王冬梅; 李闻; 孙杨杨; 李想通; 许瑞勤; 魏凤灵; 张留君; 冯延; 马思续; 杨国宇; 夏平安; 张改平 刊期：2019年第11期

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1R弱毒株在仔猪体内的增殖及其诱导抗体产生的规律。本试验将PRRSV CH-1R弱毒株肌肉注射免疫9头45日龄健康仔猪,于免疫后0,7,14,28,35和42d通过前腔静脉采取新鲜血液,利用实时荧光定量PCR方法检测PRRSV在猪体内的增殖,ELISA方法检测抗PRRSV抗体,并利用基于PAM细胞建立的中和试验检测中和抗体。结果显示:P...

IBRV gD蛋白的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

作者：魏鑫; 张建华; 郭婷; 吕天星; 周雅坪; 张新竹; 吴倩; 陈新迪; 王艳芳; 白帆; 郝永清 刊期：2019年第11期

利用生物学软件分析牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gD蛋白的抗原决定簇,发现相应的核酸序列,设计特异性引物用PCR扩增IBRVgD基因片段并克隆到原核表达载体pET-32a中,通过双酶切鉴定正确和测序正确后进行诱导表达。利用间接ELISA方法和Western blot鉴定gD重组蛋白的免疫原性和反应原性。最后将gD重组蛋白用作包被抗原,并通过优化相应的反应条件建立...

水貂阿留申病毒串联表位重组抗原的表达及血清学初步评价

作者：秦飞燕; 孙杰; 马凡舒; 王洋; 柏玲; 张蕾; 闫喜军 刊期：2019年第11期

为探究水貂阿留申病毒(ADV)VP2主要抗原表位在水貂阿留申病血清学诊断中的作用,本试验将VP2蛋白主要抗原区的表位基因用柔性肽串联连接,将其克隆到表达载体pET-30a(+)中进行原核表达,并对诱导条件进行优化。利用Ni-NTA His-Bind纯化系统对融合蛋白进行纯化,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,并将融合蛋白作为检测抗原进行CIEP试验。结果显...

AILTV临床分离株鸡肝癌细胞培养特性及黏附因子测定

作者：张石磊; 包佳鹭; 王文静; 翟向和; 陆安; 张铁 刊期：2019年第11期

禽传染性喉气管炎病毒(avian infectious laryngotracheitis virus,AILTV)引起鸡上部呼吸道传染病,危害养鸡业的发展。2017年冬季至2018春季,本实验室从河北地区各发病鸡场病死鸡分离鉴定得到8株AILTV,分别编号为AILTV-HB-1~AILTV-HB-8。将病毒进行鸡胚传代后,与标准强毒王岗株和河北地区使用的2株疫苗分别接种于鸡肝癌细胞(LMH),检测LMH增殖速...

腹泻仔猪中奇异变形杆菌分离鉴定与耐药基因分析

作者：杨睿; 王婷婷; 王孝友; 余远迪; 张邑凡; 付利芝 刊期：2019年第11期

从腹泻仔猪中分离奇异变形杆菌,并对其耐药性和14种常用抗生素的耐药基因进行检测和分析。采用分离培养、攻毒试验、药敏试验和PCR特异性扩增等方法对分离菌进行鉴定和耐药基因的检测。结果显示,共分离到15株奇异变形杆菌,发现部分分离菌可以导致仔猪腹泻,所有分离菌均有多重耐药性,86.67%(13/15)的分离菌含有3种以上的耐药基因;四环素类、磺胺...

2017年我国规模化猪场副猪嗜血杆菌流行病学调查

作者：郭龙; 宋文博; 贾双; 袁意; 陈翔鸿; 喻红艳; 汤细彪 刊期：2019年第11期

为了解副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)在我国规模化猪场中的流行情况及耐药情况,本试验对2017年全国20个省市疑似HPS感染的样品进行细菌分离培养、PCR鉴定分型和药敏试验。结果表明:从6287份样品中共分离出563株HPS,分离率为8.42%。对其中115株HPS进行分型,得到血清型1型7株、2型2株、4型26株、5/12型38株、6型1株、7型2株、9型1株、10...

胸膜肺炎放线杆菌引起猪应激时急性期蛋白转录水平变化

作者：崔亮亮; 王金坡; 熊进城; 刘晓丽; 张万坡; 胡薛英; 谷长勤; 程国富 刊期：2019年第11期

迟缓爱德华菌分子伴侣蛋白GroEL原核表达及免疫特性

作者：张志强; 葛成; 杜万年; 于秀剑; 康元环; 单晓枫; 潘晓艺; 史秋梅; 刘莉 刊期：2019年第11期

GroEL是细菌内分子伴侣蛋白,参与细菌多种生命活动,在布鲁菌、链球菌研究中,GroEL蛋白展示了良好的疫苗潜力。前期利用迟缓爱德华菌抗体Pull-down技术筛选到GroEL蛋白,揭示了该蛋白的潜在应用价值,本试验以迟缓爱德华菌GroEL蛋白作为研究对象,利用大肠杆菌表达系统表达纯化GroEL重组蛋白(rGroEL),进一步通过动物模型评估rGroEL的免疫效果。结果...

爪哇花蜱的形态学和分子标记特征

作者：段德勇; 张清飞; 周鸿铭; 程天印 刊期：2019年第11期

为了便于识别和鉴定爪哇花蜱,本试验从湖南省长沙市南郊公园穿山甲体表采集了爪哇花蜱,并借助体视显微镜超景深系统观察雌、雄成蜱的形态结构,通过分子生物学技术测定了COX1和16SrDNA基因序列。结果显示,雌性成蜱假头基呈矩形;孔区小而深;须肢前宽后窄,第2节长;盾板暗赤褐色,无珐琅斑,心脏形;眼小而扁平,不明显,仅见一痕迹;肛沟位于肛门后;气门...

HB株E.tenella AMA-1基因的克隆及免疫调节型真核表达载体构建

作者：闫艳娟; 李蕴玉; 张东林; 庞洪泽; 张香斋; 李佩国 刊期：2019年第11期

为研究HB株柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)AMA-1基因的免疫原性,根据GenBank收录的AMA-1基因序列设计了1对引物,对HB株E.tenella的AMA-1基因进行克隆,应用生物信息学分析软件预测AMA-1基因的核苷酸及编码的蛋白质的结构和功能。连接pPIC9载体,并与细胞因子IL-2串联,构建真核表达载体pPIC9-IL-2-AMA-1,转化毕赤酵母细胞GS115,进行蛋白表达及纯化验证...

2017—2018年河南省规模化猪场弓形虫血清流行病学调查

作者：解伟涛; 乔松林; 梁跃; 郝慧芳; 邓瑞广; 张龙现; 李祥瑞; 张改平 刊期：2019年第11期