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流行性出血病病毒抗原捕获ELISA方法的建立

作者：杨振兴; 朱建波; 肖雷; 高林; 苗海生; 何于雯; 孟锦昕; 杨恒; 李华春 刊期：2019年第01期

基于GIS的中国非洲猪瘟疫情风险分析

作者：卢易; 王烁; 易敬涵; 钮冰 刊期：2019年第01期

非洲猪瘟(ASF)是猪的一种烈性传染病。虽然ASF不会感染人类,也不会影响猪和野猪以外的其他动物物种。但由于目前没有有效的疫苗和治疗方法,对养猪业产生巨大威胁,是世界范围内养猪业重点防范的疫病。本研究利用地理信息系统(GIS)方法对我国ASF疫病分布情况,疫情定向趋势和时空聚类情况等进行分析。结果表明:疫情暴发点分布具有明显的方向性,目前...

靶向抑制PRRSV复制的Nsp9/shRNA的筛选及干扰

作者：吴锦艳; 田宏; 陈妍; 王光祥; 尚佑军; 张志东 刊期：2019年第01期

RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,使机体具有抗病毒的功效,本试验针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp9基因设计多对shRNA序列,并从细胞水平验证其干扰效果,从中筛选可以使Nsp9基因沉默的优势shRNA序列。利用BLOCK-iTTM RNAi Designer软件设计并合成shRNA对应的DNA序列-ds Oligo,构建入门载体pENTR/U6/shRNA;采用共转染技术,经荧...

山东省部分地区猪伪狂犬病病毒分离鉴定及其gE基因遗传变异分析

作者：古金元; 马梓承; 彭涛; 刘照虎; 孟凡亮; 王玉超; 刘思当 刊期：2019年第01期

自2011年下半年以来全国多个省份使用Bartha-K61疫苗(gE/gI双缺失)免疫的猪场陆续出现了母猪繁殖障碍、仔猪神经症状及死亡、伪狂犬gE抗体阴性猪群突然转阳的问题。同时有的猪场内出现犬、猫、鼠等死亡的现象,经检测都是由变异伪狂犬病病毒(vPRV)引起。为了解山东省猪伪狂犬病病毒(PRV)近期流行特征,本试验对2017年上半年来自山东省不同地区的12...

猪圆环病毒2型和3型双重PCR检测方法的建立

作者：徐朋丽; 赵宇; 张宇; 韩昊莹; 张鸿鑫; 郑慧华; 田润博; 陈红英 刊期：2019年第01期

猪圆环病毒3型(PCV3)是一种新的猪圆环病毒,与猪皮炎和肾病综合征、母猪繁殖障碍及心脏和多系统炎症相关。为了建立一种同时快速检测猪圆环病毒2型(PCV2)和PCV3的双重PCR方法,根据GenBank收录的PCV2和PCV3基因序列,分别在PCV2 Cap基因和PCV3 Rep基因高度同源保守区设计并筛选2对特异性引物,经过双重PCR反应条件的优化,建立了同时检测PCV2/3的双...

我国蓝舌病病毒血清24型毒株的分离与遗传特征分析

作者：杨恒; 王金萍; 李乐; 肖雷; 孟锦昕; 寇美玲; 廖德芳; 何于雯; 高林; 李占鸿; 李华春 刊期：2019年第01期

掌握云南省蓝舌病病毒(BTV)的活动情况与流行毒株的遗传特征。2012—2015年,在云南省的师宗县、江城县与芒市分别设立3个监控点,进行BTV的分离。自监控动物采集的BTV核酸阳性血液通过'鸡胚-C6/36细胞-BHK细胞'接种的方式进行病毒分离;采用RT-PCR与中和试验进行分离病毒的血清型鉴定;设计特异性引物对分离病毒的Seg-2、Seg-3、Seg-7与Seg-6基因节...

犊骆驼口蹄疫母源抗体的测定及口蹄疫A-O-Asia Ⅰ型三价灭活疫苗首免日龄的确定

作者：王涛; 张寅生; 徐敏; 杨小亮; 蔡扩军; 吴星星; 丁剑 刊期：2019年第01期

利用O、A型及亚洲Ⅰ型口蹄疫(FMD)抗体液相阻断ELISA检测试剂盒,参照试剂盒使用说明书通过测定20峰分娩母骆驼的FMD抗体合格率及其分娩的初生犊骆驼母源抗体在0,1,7,21,35,49和63日龄的抗体水平,摸清母源抗体的消长规律,确定犊骆驼的首免日龄,在首次免疫后15,30d采样检测FMD抗体水平。结果表明:母骆驼FMD的抗体水平以及犊骆驼是否能吃到初乳决定...

禽腺病毒血清4型RPA-LFD快速检测方法的建立

作者：万文妍; 刘延珂; 吴艳阳; 杨东东; 王增; 赵军 刊期：2019年第01期

为了建立一种快速、灵敏、简便的禽腺病毒血清4型(FAdV-4)现场检测方法,本试验将重组酶聚合酶扩增(RPA)与胶体金侧向流试纸条(LFD)技术联合,设计针对FAdV-4hexon基因的特异性RPA引物,上、下游引物的5′端分别进行6-羧基荧光素(FAM)和生物素(Biotin)标记。通过对引物浓度、RPA反应时间和温度等条件的优化,建立了一种可用于FAdV-4现场检测的RPA-LF...

1株Ⅰ类新基因型新城疫病毒的基因组特性分析

作者：魏润宇; 王静静; 吕艳; 罗瑶瑶; 郑东霞; 赵云玲; 李金明; 刘文博; 刘华雷; 王志亮 刊期：2019年第01期

为了研究我国新型新城疫病毒的分子流行病学特性,对2016年从主动监测中分离到的1株新出现的鸭源新城疫病毒(duck/China/NX2209/2016)进行了基因组测序和遗传进化分析。序列分析结果显示该分离株全长15 198nt,F基因ORF全长为1 662bp,共编码553个氨基酸,裂解位点处的氨基酸为:112 ERQERL117,符合低致病性新城疫病毒特征。同源性分析表明该新型毒株...

鲤浮肿病毒环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用

作者：曹欢; 徐立蒲; 李清; 张文; 王立新; 王小亮; 王静波; 王姝; 江育林 刊期：2019年第01期

为了给鲤浮肿病(carp edema virus disease,CEVD)的防控提供特异、灵敏、快速的检测方法,针对鲤浮肿病毒(carp edema virus,CEV)的P4a基因序列设计5条特异性引物,建立CEV的环介导等温扩增检测方法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)。结果表明该方法具有很高的特异性。最低可检出6 000拷贝/μL,检测灵敏度与Real-time PCR方法相当。...

仔猪粪便DNA中产气荚膜梭菌主要毒素基因检测及荧光定量PCR计数方法的建立

作者：韩春生; 戴益民; 王林康; 王婧祺; 周姣; 张锦华 刊期：2019年第01期

为探究产气荚膜梭菌(Cp)及其产生的β2毒素对7日龄内仔猪腹泻的影响,本试验利用PCR技术对江西不同地区96份仔猪粪样DNA进行分析。首先检测产气荚膜梭菌α、β、β2、ε、ι、CPE毒素基因来推断Cp存在和基因型,然后对不同地区的β2毒素基因全长进行测序比对、MEGA7构建进化树,最后采用荧光定量PCR对携带CpA(β2+)的健康、腹泻样品中的Cp菌数进行测定。结...

E型产气荚膜梭菌的外毒素致病性及其类毒素疫苗免疫效果

作者：马连营; 郭梦娇; 吴发浩; 温新水; 柴同杰 刊期：2019年第01期

貉肠炎沙门菌htra基因缺失株的构建及生物学特性

作者：张志强; 苏硕青; 李永慧; 段滇宁; 杨楠; 李巧玲; 吴同垒; 史秋梅 刊期：2019年第01期

为研究HtrA蛋白对貉源肠炎沙门菌毒力和生物学特性的影响,本试验利用Red同源重组方法对HtrA蛋白编码基因htra进行敲除,并从生长特性、生化特性、耐pH应激与氧化应激、抗血清杀伤和菌株毒力等方面对突变菌株进行评价,结果显示:与野生型菌株相比,htra基因缺失株生长特性和生化特性无明显差异,但其对酸性和碱性环境的敏感性增加,对血清的耐受力下降...

猕猴小袋纤毛虫形态学观察及分子生物学鉴定

作者：王宏; 赵德明; 季维智; 李鹤龄 刊期：2019年第01期

旨在对猕猴肠道内的小袋纤毛虫进行形态学观察及基于ITS1-5.8SrRNA-ITS2序列的分子生物学鉴定分析。收集猕猴的新鲜粪便,经直接涂片、碘液染色、吖啶橙染色和苏木素染色后镜检进行虫体形态学观察;提取粪便总DNA,针对ITS1-5.8SrRNA-ITS2序列设计特异引物进行PCR扩增、测序,经Blast进行同源性分析,并应用MEGA7.0绘制系统发育进化树。虫体形态学观...

重组rSD01H9N2禽流感病毒感染A549细胞及其诱导的免疫反应

作者：郝梦婵; 韩少杰; 柴同杰 刊期：2019年第01期

为了解禽流感病毒(AIV)与其他病毒重组带来的风险,本试验利用反向遗传技术,以H9N2A/Chicken/Shandong/01/2008(SD01)株为骨架,将其PA基因替换为H1N1A/swine/Shandong/07/2011(SD07)株的PA基因,构建了1株重组病毒rSD01-PA。以A549细胞为模型,感染H9N2AIV SD01及其重组株rSD01-PA。通过间接免疫荧光(IFA)和荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法,检测H9N2AIV...