中国兽医学报杂志 北大期刊 CSCD期刊 统计源期刊

猪繁殖与呼吸综合征病毒和致病性沙门氏菌的混合感染

作者：汤景元; 姜平; 邓雨修; 李玉峰 刊期：2005年第04期

2003年9～11月某猪场发生母猪持续性繁殖障碍和7日龄仔猪呼吸困难、寒颤、下痢、体温升高和实质性器官出血为主要特征的疾病.3头发病仔猪的病变组织用RT-PCR检测,均为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性;由3头发病猪病料中所分离的细菌,可于普通琼脂、伊红美蓝和麦康凯琼脂培养基上生长,革兰氏染色阴性,形态与组织触片镜检及生化反应特性与沙门...

重组N蛋白抗原检测PRRSV抗体ELISA的研究——Ⅰ．ELISA方法的初步建立及其标化

作者：吴延功; 徐天刚; 王志亮; 张喜悦; 王君玮; 宋翠平; 刘佩兰; 徐培莲; 宋芳; 许立华; 陈溥言 刊期：2005年第04期

以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,对各种条件进行优化(如抗原的包被,作用时间及底物的选择),建立了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的间接ELISA方法.研究结果表明,重组抗原最适包被质量浓度为1 mg/L,最适包被条件为4C过夜,血清稀释度为1:40,待检血清和酶标二抗的反应时间分别为37C30 min和40 min,底物用TMB溶液,37C显色10 min.本研究对ELI...

鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的克隆及其原核表达

作者：郑海洲; 柏佳宁; 边艳青; 赵宝华 刊期：2005年第04期

根据鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的gB基因序列和表达载体pBV221的多克隆位点,设计了1对引物.以ILTV疫苗株基因组为模板,应用PCR扩增出gB基因片段,然后将其定向克隆于原核表达载体pBV221中,构建了重组质粒pBV-gB.重组质粒转化到受体菌DH5α中,得到阳性重组菌株DH5α(pBV-gB).该菌株在温控诱导下,SDSPAGE电泳可见表达的特异蛋白.ELISA检测证明,表达...

新城疫病毒HN蛋白球状头部在T4噬菌体衣壳表面的展示

作者：刘铀; 毕英佐; 曹永长; 马静云; 肖俊芳 刊期：2005年第04期

用RT-PCR扩增新城疫病毒(NDV)hn基因,得到大小约1 700bp的片段,将其克隆至pGEM-T easy载体并测定其核苷酸序列.根据测序结果,另设计1对引物带有EcoR I限制位点,用PCR扩增基因主要功能区即编码HN蛋白球状头部的hngd片段,将其分别克隆至pSOC和pR质粒soc基因3'端,重组质粒pSOC-HNGD转化E.coli BL-21(DE3)感受态细胞,以终浓度1 mmol/L的IPTG诱导表达...

2003年畜牧兽医类期刊影响因子和总被引频次较高的20种期刊

刊期：2005年第04期

犬瘟热病毒F1基因的原核表达与初步应用

作者：闫芳; 夏咸柱; 扈荣良; 谢之景; 黄耕 刊期：2005年第04期

将犬瘟热病毒(CDV)F1基因定向克隆入pET-28a(+)载体,构建了原核表达质粒pET-28F1.pET-28F1转化宿主菌BL21(DE3)plysS,在IPTG的诱导下,可高效表达目的基因,表达量达菌体蛋白总量的23.52%.Western blot分析表明,所表达蛋白能与抗CDV阳性血清发生特异性的抗原-抗体反应.以E.coli表达的CDV F1蛋白为抗原,HRP标记的兔抗犬IgG为二抗,建立了检测抗CDV抗...

牛病毒性腹泻病毒梅花鹿分离株E0基因的克隆与表达

作者：郜玉钢; 杜锐; 王全凯; 王楠; 王树志 刊期：2005年第04期

利用RT-PCR技术扩增了牛病毒性腹泻病毒(BVDV)梅花鹿分离株E0基因,并将其克隆到pMD18-T克隆载体和pET28a原核表达载体中,构建了pMD18-T/E0和pET28a/E0重组子,并进行了测序和表达.表达产物分别用12%SDS-PAGE检测和牛抗BVDV阳性血清进行Western-blotting检测,结果表明,BVDV梅花鹿分离株E0基因的核苷酸序列与匈牙利VEDEVAC株的同源性高达98.6%,与C2...

减毒沙门氏菌为载体的草鱼口服生长抑素DNA疫苗的构建及其稳定性

作者：戴贤君; 方维焕 刊期：2005年第04期

将生长抑素(SS)和乙肝表面抗原基因(HBsAg)融合后,插入真核表达载体pcDNA3,构建成pcDNA3-SS,再转化减毒沙门氏菌(S.typhimurium,dam-和phop-),构建了以减毒沙门氏菌为载体的生长抑素口服DNA疫苗ZJ111/pcDNA3-SS,并通过体外传代、灌服草鱼检验了ZJ111/pcDNA3-SS的侵袭力及体外和侵入草鱼体内过程中的稳定性.对草鱼肝脏和脾脏分离菌的生化特性检验...

大肠杆菌F18菌毛A亚单位基因的多样性分析

作者：成大荣; 徐建生; 曹军; 唐波; 吕玲; 孙怀昌; 高崧 刊期：2005年第04期

根据已经发表的大肠杆菌F18ab菌毛A亚单位(FedA/ab)的基因序列(fedA/ab)设计1对引物,利用PCR技术从本实验室保存的10株大肠杆菌(F107/86、YCED1、YCED2、C、D、E、12F、2134P、8199、8813)中分别扩增到一段序列,并克隆至pGEM-T载体,获得重组质粒TF107A、TYCED1A、TYCED2A、TCA、TDA、TEA、T12FA、T8813A、T8199A、T2134PA.通过序列测定,并与已发...

间接免疫组化法检测鸭疫里默氏杆菌感染和抗原定位

作者：刘维平; 程安春; 汪铭书; 陈孝跃; 周毅; 康; 刘菲; 孟琼华; 黄诚; 宋涌 刊期：2005年第04期

应用鸭源血清1型鸭疫里默氏杆菌(RA)作为抗原,免疫兔制备兔抗RA的IgG,建立了检测雏鸭感染鸭疫里默氏杆菌的间接免疫酶组织化学法.该法检测大肠杆菌(O1、O8、O79、O138)、鸭沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌(5:A)感染发病死亡雏鸭组织,不出现阳性反应,而检测RA感染发病死亡雏鸭组织出现特异性阳性反应;检测RA人工发病死亡雏鸭,可在心脏、肝脏、肺脏、肾...

羊附红细胞体病PCR检测方法的建立

作者：杨鹏华; 秦建华; 赵月兰; 李玉文; 张富梅 刊期：2005年第04期

根据羊附红细胞体的16S rRNA基因参考序列,设计1对特异性引物,建立了检测羊附红细胞体的PCR技术.用本方法从感染血样中特异扩增出1条预期大小为1 169 bp的片段.该方法灵敏、快速、特异性高,可用于羊附红细胞体病的早期快速诊断和流行病学调查.

狂犬病病毒口服疫苗株SRV9基因组全长cDNA的克隆及特性分析

作者：王铁东; 张守峰; 扈荣良; 郭建顺 刊期：2005年第04期

为了解狂犬病病毒口服疫苗株SRV9的基因序列与生物学特性的关系,明确其作为疫苗株的分子基础,通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),获得了贯穿全基因组的3个重叠的cDN段.将获得的cDN段分别克隆至pMD-18T载体上并进行序列测定,对测序结果进行拼接得到全长cDNA序列(GenBank登录号:AF499686).SRV9株与亲本株SAD B19全序列比较分析显示,二者同源性为99...

H9N2亚型禽流感病毒原位杂交检测方法的建立

作者：张万坡; 程国富; 谷长勤; 李德学; 宋念华; 毕丁仁; 胡薛英; 胡思顺; 胡智斌 刊期：2005年第04期

根据已知禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)核蛋白(NP)基因序列,选取其中保守区域设计出1对引物,以RT PCR方法扩增出543 bp的NP基因片段,采用地高辛标记制备探针.MDCK细胞人工感染H9N2亚型禽流感病毒后,不同时间取样制备细胞涂片,进行原位杂交,研究了禽流感病毒对MDCK细胞的感染,探讨了原位杂交的条件及其应用于检测AIV感染的可行性.结果显...

应用双重PCR检测产毒素多杀性巴氏杆菌

作者：唐先春; 吴斌; 刘国平; 刘建杰; 王大鹏; 陈焕春 刊期：2005年第04期

参照有关文献设计了2对引物,分别扩增多杀性巴氏杆菌的Kmt及toxA基因,以使同时检测并区分产毒素与非产毒素多杀性巴氏杆菌.该PCR能检出103cfu菌量的模板.特异性试验表明,这2对引物都不能从猪的其他6种常见病原菌扩出特异性的带.对扩增的2个PCR产物测序结果表明,2序列都有很高的保守性,从而进一步证明了该PCR方法的特异性及灵敏性.临床应用,从386...

应用基因芯片对4种产毒霉菌的检测

作者：高宏伟; 马永和; 段铭; 彭龙 刊期：2005年第04期

以霉菌的ITS2基因为靶序列,利用DNAman、DNAstar等生物信息软件在靶序列的指定片段内设计针对黑曲霉、黄曲霉、串珠镰刀菌和鲜绿青霉菌的30 bp种特异性寡核苷酸探针和通用引物.将4种标准菌种的基因组通过扩增、线性Cy3或Cy5荧光标记、纯化、杂交试验,验证了探针的特异性和技术的可行性.结果表明,基因芯片可以应用于产毒霉菌的检测.