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噬菌体展示抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子的筛选和序列分析

作者：张爱华; 端义坤; 闭兰; 赵亚杰; 张智; 阎莹; 王志友; 余模松 刊期：2005年第01期

目的从自建的免疫噬菌体展示Fab抗体库中获得抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子,并进行基因序列分析.方法采用纯化的乙型肝炎病毒表面抗原作为包被抗原,对自建的4×105Fab噬菌体抗体库进行富集筛选,从阳性强的次级库中挑选单个克隆菌,分别进行噬菌体ELISA、PCR和限制性内切酶鉴定后,再选取三者均为阳性的克隆菌进行基因序列分析.结果共挑选了60...

人纤溶酶原饼环区5蛋白的原核表达体系的建立

作者：陈显久; 张悦红; 于保锋; 牛勃; 解军; 杨琦; 程牛亮; 郝一彬 刊期：2005年第01期

目的构建人纤溶酶原饼环区5(hPK-5)蛋白原核表达载体,并进行表达和鉴定,为获取大量高纯度、具有生物活性的hPK-5蛋白奠定基础.方法以纤溶酶原cDNA为模板,PCR扩增hPK-5基因,经酶切后构建表达载体pBV220/hPK-5,转入大肠杆菌JM109进行温控诱导表达,表达产物经纯化、复性后,检测其抑制鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的生物学活性.结果带有pBV220/hPK-5...

HIV-2 Gp105基因重组鸡痘病毒的构建及鉴定

作者：张立树; 金宁一; 李子健; 江文正; 王宏; 宋英今; 金洪涛 刊期：2005年第01期

目的研制预防HIV-2的重组鸡痘病毒活载体疫苗.方法将HIV-2Gp105基因插入鸡痘病毒转移载体pUTA2复合启动子的下游,构建鸡痘病毒转移载体pUTA2-Gp105.将该重组质粒与鸡痘病毒(FPV)282E4株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行同源重组.通过3次BrdU加压筛选,以PCR、RT-PCR、IFA和Western blot鉴定重组病毒.结果从重组鸡痘病毒的基因组和总RNA中能扩增出...

弓形虫信号转导蛋白14-3-3的高效表达及免疫学诊断的初探

作者：都建; 沈继龙; 王维; 李小月; 胡元生; 钟政荣; 刘淼 刊期：2005年第01期

目的构建弓形虫信号转导蛋白14-3-3基因的重组质粒,并在E.coli中高效表达,用于免疫学诊断.方法以限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切质粒pGEM-T/Toxo-14-3-3,获得弓形虫信号转导蛋白14-3-3编码基因片段,插入载体pET28a,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,在非变性条件下纯化融合的表达产物,通过Westernblot和ELISA检测其特异的免疫反应性.结果所构建的...

人乳头瘤病毒16型L1 N-端主要抗原基因的原核表达

作者：陈蕤; 穆士杰; 张菊; 阎小君 刊期：2005年第01期

目的获得序列正确的人乳头瘤病毒(HPV)16型L1 N-端主要抗原基因,构建其原核表达载体,并进行诱导表达.方法采用PCR法从宫颈癌组织中获得HPV16型L1 N-端主要基因重组表达质粒,转化E.coli DH5α,42℃诱导表达,Western blot分析表达产物.结果获得了序列正确的人乳头瘤病毒HPV16型L1 N-端主要基因,相对分子质量约为51 000.表达蛋白能与乳头瘤病毒抗体...

重组人肝细胞生长因子α在大肠杆菌中的表达及活性检测

作者：杨利军; 杨涛; 牛勃; 程牛亮; 王惠珍; 赵建滨 刊期：2005年第01期

目的建立人肝细胞生长因子α链(rhHGFα)高效原核表达体系.方法以pRC/CMV-hHGF为模板,扩增hHGFα cDNA,继以XhoI酶切为386和954 bp 2个片段,亚克隆入pBSKS,DNA测序后,将上述两个片段与pBV220连接,构建重组质粒.转化E.coli JM109、DH5α和BL21(DE3),筛选高效表达菌株.分离包涵体,8 mol/L尿素溶解,梯度复性后利用反相和凝胶过滤层析纯化重组蛋白,经MTT...

FQ-PCR试剂质量评估方法的建立及评价

作者：黄学忠; 杜笑雅; 吴祥 刊期：2005年第01期

本文介绍一种简捷、实用的荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)试剂质检评估方法,具体方法是随机选择不同品牌HBV DNA的FQ-PCR试剂,分别将其编为a、b和c.

神经细胞黏附分子样蛋白对小鼠NK细胞活性的影响

作者：刘青; 王宣军; 吴秀丽; 王丽颖; 于永利 刊期：2005年第01期

目的研究神经细胞黏附分子样蛋白对小鼠NK细胞活性的影响.方法将神经细胞粘附分子样蛋白的编码基因连接在补体C3d基因的下游,构建融合基因,再将此融合基因克隆入真核细胞表达质粒.用此重组质粒免疫小鼠,检测小鼠体内的抗体和NK细胞的活性.结果小鼠体内产生了神经细胞粘附分子样蛋白的特异性抗体,而且小鼠脾细胞的NK活性增强.结论神经细胞粘附分...

呋喃唑酮抑制Wistar大鼠精子细胞生成的研究

作者：张洪雁; 贺英勤; 董春娥; 刘素文; 曲立科; 韩巍 刊期：2005年第01期

目的探讨呋喃唑酮(NFZ)对成年雄性大鼠生精细胞的抑制作用及其副作用.方法以Wistar大鼠为模型,灌胃法给药,采用组织切片及生物化学方法进行分析.结果一定剂量的NFZ可以特异性抑制成年大鼠的精子细胞生成,而对睾丸的基本结构无损害,对其它脏器无伤害.此种抑制生精作用为可逆性,停药后较短时间即可恢复正常生育,子育正常.结论呋喃唑酮有可能作为男...

利用DNA改组筛选高活性抗凝血酶Ⅲ

作者：于群; 宋丽雅; 贺敏; 卜凤荣; 孙文种; 窦桂芳; 章金刚 刊期：2005年第01期

目的利用DNA改组技术大幅度提高抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)的生物活性.方法采用RQ1 DNase Ⅰ不完全酶解ST-Ⅲ基因,产生长度为50～100 bp的随机片段,用低熔点胶回收.无引物PCR从小片段组装成大片段,通过有引物PCR得到正确大小的片段.线性化的质粒通过电转转入毕赤酵母GS115细胞.结果获得了5株高活性的克隆.结论探索了在毕赤酶母进行DNA改组和筛选的方法和...

人组织激肽释放酶成熟蛋白的纯化及活性分析

作者：李体远; 杜珙; 朱莹; 黄瑞芳; 陈德珩 刊期：2005年第01期

目的制备纯化人组织激肽释放酶,并检测其生物活性,为中试放大及纯化工艺奠定基础.方法使用麦芽糖(MBP)融合分泌载体pMBP-P,构建并筛选出1株工程菌株,在6L培养基中经IPIG诱导表达人组织激肽释放酶融合蛋白.目的蛋白经亲和层析纯化及凝血酶切割后,采用电位滴度法测定其活力.结果筛选出的工程菌株表达相对分子质量约70000的激肽释放酶融合蛋白,大小...

卡介菌基因组DNA制备工艺研究

作者：王静; 胡振林; 周凤娟; 凌亦凌; 孙树汉 刊期：2005年第01期

目的摸索制备高纯度卡介菌(Mycobacterium bovis Bacillus Calmette-Guerin,BCG)基因组DNA(BCG-DNA)的制备工艺.方法采用超声破碎结核杆菌,加热使蛋白变性初步去除菌体蛋白,进一步经蛋白酶消化,乙醇沉淀DNA组分,再经离子交换和凝胶过滤层析,去除残余菌体蛋白和多糖,精制DNA,并进行质量检测.结果所制备的BCG-DN段大小介于200～250 bp之间,纯度大...

高效价特异性HER2ME抗体的制备及鉴定

作者：王宣军; 向泽敏; 包木胜; 王丽颖; 于永利 刊期：2005年第01期

目的制备高特异性HER2ME(Multi-epitope of human epidermis growth factor receptor 2)抗体.方法将表达HER2ME基因的pcDNA3质粒与CpG混合免疫C57小鼠.结果得到了HER2ME蛋白特异性抗血清.该血清与普通蛋白抗原免疫产生的血清相比,抗体特异性极高.未经纯化进行免疫印迹实验,显示出高度特异性.结论表达质粒与CpG混合免疫可简单快速获得高特异性HER...

A、B、E、F型肉毒抗毒素的制备与检定

作者：王棣; 陆俭; 杨仲璠; 赵红; 傅思武; 王永红; 张超; 陈孝婷; 彭恭嘉 刊期：2005年第01期

《中国生物制品学杂志》广告征订

刊期：2005年第01期