生物技术通讯杂志 省级期刊

Ku70基因稳定敲除HeLa细胞株的建立及其生物学功能研究

作者：李达; 沈雪莲; 李少华; 丁红梅; 李慧; 黄皑雪; 耿介; 王超男; 白琛俊; 张坦; 董洁; 邵宁生 刊期：2018年第02期

目的：利用CRISPR/Cas9技术构建人Ku70基因稳定敲除的HeLa细胞株，并检测其生物学功能。方法：设计并构建向导RNA载体pCas-gRNA和同源重组供体DNA载体pBackZero-T-Ku70，2种重组质粒共转染HeLa细胞，加入潮霉素B进行抗性筛选，通过基因组PCR和Western印迹检验Ku70基因是否被敲除；进而，选择Ku70稳定敲除的细胞株，分别采用CCK-8和Transwell实验...

Vasorin基因稳定敲除HepG2细胞株的建立及其生物学功能研究

作者：耿介; 王超男; 李少华; 丁红梅; 李慧; 黄皑雪; 李洁; 李达; 白琛俊; 张坦; 董洁; 邵宁生 刊期：2018年第02期

目的：利用CRISPR/Cas9技术建立人Vasorin（VASN）基因稳定敲除的HepG2细胞株，并研究VASN蛋白对细胞增殖和迁移等生物学功能的影响。方法：根据人VASN序列设计向导RNA，将其克隆至表达载体pCas-Guide，获得质粒pCas-gRNA；PCR扩增VASN编码基因左、右同源臂及潮霉素B抗性基因，通过重叠PCR将三者拼接为一条片段，并克隆至载体pBackZero-T，获得...

卵巢癌中线粒体转录终止因子1的表达及其意义

作者：自加吉; 孙美涛; 王唯斯; 陈莹; 戴莉萍; 余敏; 熊伟 刊期：2018年第02期

重组炭疽疫苗免疫人体产生抗体基因的生物信息学分析

作者：刘渝娇; 陈郑珊; 王美荣; 张冠英; 范鹏飞; 房婷; 迟象阳; 于长明 刊期：2018年第02期

目的：采用多种生物信息学手段，提取并分析前期获得的重组炭疽疫苗免疫人体产生的抗体基因序列的特征信息，探究与抗体进化规律和功能预测相关的线索。方法：利用R、Perl等语言编写了一系列数据处理和接口程序，整合集成Change-O等相关程序集和R语言包构建抗体基因序列分析平台，对抗体重链基因的VDJ基因使用频率、聚类分布、CDR3区理化特性及...

重组水疱性口炎病毒载体病毒包装体系的建立及优化

作者：卢建博; 郑文铝; 余云舟; 叶建强; 戴秋云; 刘珠果 刊期：2018年第02期

目的：建立并优化重组水疱性口炎病毒（VSV）载体病毒包装体系，以获得稳定高效的重组VSV载体疫苗包装系统。方法：以prVSVΔG-GFP为骨架载体，pBS-N、pBS-P、pBS-G、pBS-L为辅助载体，探索不同的骨架质粒及辅助质粒用量、包装细胞系、重组痘病毒vTF7-3作用时间、转染试剂作用时间等因素对重组VSV载体病毒包装的影响，用光学显微镜及荧光显微镜观...

阿尔茨海默病重组4Aβ15-TF亚单位疫苗的免疫原性研究

作者：周果; 李庆丽; 陈博阳; 师丹阳; 陆健昇; 周晓巍; 余云舟 刊期：2018年第02期

目的：研究重组嵌合抗原4Aβ15-TF的免疫原性，评估其作为亚单位疫苗的可行性。方法：设计合成了重组融合蛋白4Aβ15-TF的基因序列，插入原核表达载体pTIG-Trx中，用大肠杆菌表达并纯化重组嵌合抗原4Aβ15-TF，与铝佐剂配制成亚单位疫苗免疫C57BL/6小鼠以研究其免疫原性。结果：重组嵌合抗原4Aβ15-TF免疫小鼠后刺激其产生了抗β淀粉样蛋白（Aβ）42的...

铜绿假单胞菌重组Bb-OprI疫苗免疫及PA01株感染后小鼠脾细胞因子IL-17和Treg的变化

作者：刘潇; 李文桂 刊期：2018年第02期

A型肉毒毒素单克隆抗体的制备和鉴定

作者：吕孙慧; 刘凌志; 霍江; 李磊; 汪建华; 游松; 熊向华; 张惟材 刊期：2018年第02期

目的：制备并鉴定抗A型肉毒毒素重链C端（BoNT/AHc）鼠源单抗。方法：以BoNT/AHc蛋白为抗原免疫小鼠，利用杂交瘤技术获得鼠源单抗，通过抗体分型、SDS-PAGE、Western印迹及ELISA法分析鉴定。结果：筛选得到3株鼠单抗1B1、1B2、1C6，重链类型均为IgG1，轻链类型均为κ型；3株纯化抗体的纯度达90%以上，均能与抗原BoNT/AHc特异性结合，亲和力常数...

人突触囊泡蛋白2C单克隆抗体的制备及鉴定

作者：邱语进; 孙志杰; 赵鹏; 付楚溪; 霍江; 熊向华; 汪建华; 万冬梅; 张惟材 刊期：2018年第02期

目的：制备人突触囊泡蛋白2C（SV2C）单克隆抗体。方法：纯化SV2C/L4蛋白，免疫BALB/c小鼠并制备杂交瘤细胞，筛选针对SV2C/L4的特异性抗体，鉴定亚型及测定效价；选取效价最高的抗体进行大量制备，并经SDSPAGE、Western印迹、间接ELISA和动物实验对抗体纯度、特异性、亲和力及中和活性进行检测。结果：得到纯度大于95%的SV2C/L4蛋白，经2轮筛选...

食甲基杆菌J1-1吡咯喹啉醌生物合成突变株的筛选和鉴定

作者：李彤; 景爱霞; 杨亚欣; 刘晓阳; 汪建华; 刘党生; 熊向华; 张惟材 刊期：2018年第02期

目的：通过Tn5转座诱变筛选食甲基杆菌J1-1吡咯喹啉醌（PQQ）生物合成相关基因。方法：构建食甲基杆菌J1-1 Tn5转座突变体库，筛选PQQ合成水平差异明显的突变株，利用质粒拯救法鉴定突变基因，通过基因敲除、回补及过表达进一步研究该基因与PQQ合成的关系。结果：构建了J1-1的Tn5转座突变体库，筛选得到一株PQQ合成水平显著下降的突变株，经鉴定...

谷氨酰胺酶1在结肠癌中的表达及其对细胞代谢重编程的影响

作者：陶波龙; 曲璇; 张伟; 申亮亮; 张英起 刊期：2018年第02期

目的：检测谷氨酰胺酶1（GLS1）在结肠癌和癌旁组织中的表达，并观察干涉GLS1对结肠癌细胞代谢重编程的影响。方法：利用免疫组织化学实验观察50例结肠癌组织芯片中GLS1的表达状态，并进行统计学量化分析；利用siRNA干涉HT29细胞和Caco2细胞中的GLS1后，通过MTT实验、葡萄糖摄取实验和谷氨酰胺摄取实验检测其对细胞生物学行为的影响。结果：GLS1...

寨卡病毒囊膜E蛋白的原核表达及其抗体制备

作者：王佳美; 巩新; 刘党生; 吴军; 刘波 刊期：2018年第02期

目的：在大肠杆菌BL21（DE3）中重组表达寨卡病毒（ZIKV）囊膜（E）蛋白的200个氨基酸（138~338）截短片段ZIKV-E200，制备其多克隆抗体，为寨卡病毒亚单位疫苗后续研究提供检测抗体。方法：用全基因序列合成方法合成寨卡病毒E蛋白全长基因，以该基因为模板，用PCR方法克隆ZIKV-E200基因片段，经EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后连接到pET22b载体并转化大肠...

B细胞连接蛋白在原核细胞中的表达和纯化

作者：张志英; 肖斌; 蒋娟; 黄秀娜; 张蓉; 李晓; 刘娟子; 连菲; 杨永泉; 张莹莹; 孙朝晖; 李林海 刊期：2018年第02期

目的：利用原核细胞体系表达并纯化B细胞连接蛋白（BLNK）。方法：构建pMAL-c5x-BLNK重组质粒，转化至大肠杆菌BL21（Plyss），IPTG诱导BLNK融合蛋白的表达，通过MBP柱亲和纯化获得目标蛋白，进行12%SDSPAGE分析。结果：构建了BLNK的原核表达质粒pMAL-c5x-BLNK，该质粒在IPTG浓度为0.5 mmol/L、温度为11℃的条件下，可以在大肠杆菌BL21（Plyss）...

重金属镉通过DNA氧化损伤途径诱导细胞中心体扩增

作者：张瑞凯; 张艳花; 刘琴琴; 杨华丽; 李少钦 刊期：2018年第02期

一株产耐高温β-甘露聚糖酶菌株的筛选鉴定

作者：罗长财; 缪静; 李国莹; 杜瑶; 余晓斌 刊期：2018年第02期

目的：筛选鉴定一株产耐高温β-甘露聚糖酶的天然菌株。方法：通过形态、生理生化特征及16S rDNA比对，对从水温高于68℃的热泉中分离出的一株产β-甘露聚糖酶细菌进行鉴定。结果：该菌株的最适生长温度为50℃，可在35~80℃条件下生长，确定为一种极端嗜热枯草芽胞杆菌；该菌所产的β-甘露聚糖酶可耐受90℃高温处理。结论：产耐高温β-甘露聚糖酶极...