生物技术通讯杂志 省级期刊

含人CCR5Delta32基因重组慢病毒的包装及滴度测定

作者：安群星; 穆士杰; 张献清; 陈蕤; 夏爱军 刊期：2007年第06期

目的：包装含人CCR5Delta32基因的重组慢病毒并测定其滴度，用于获得性免疫缺陷综合征（AIDS）的基因治疗研究。方法：从CCR5Deha32突变个体外周血单个核细胞（PBMC）中提取人基因组DNA，利用PCR技术扩增CCR5Deha32全长基因，经EcoRI单酶切后与pUCm—T载体连接，随后转化EcoliDH5ct，提取质粒进行酶切鉴定及DNA测序；将鉴定正确的CCR5Delta32基...

半乳凝集素-3的表达对乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡的影响

作者：李晓明; 李平; 马清钧; 曹诚 刊期：2007年第06期

目的：研究半乳凝集素－33（Gal3）的表达对乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡的影响。方法：构建Gal3-siRNA的特异表达载体，转染乳腺癌细胞MCF-7，通过建立由siRNA介导的Gal3-knockdown稳定细胞株来研究半乳凝集素-3表达下调对肿瘤细胞凋亡的影响。结果：利用设计的Gal3-siRNA能够使细胞中半乳凝集素-3的表达降低90％左右；当用凋亡诱导剂处理时，Gal3-...

恶性疟原虫乳酸脱氢酶基因的克隆表达及表达产物免疫原性的鉴定

作者：邱少富; 朱虹; 檀华; 宋立华; 何君; 端青 刊期：2007年第06期

目的：克隆表达恶性疟原虫（Hasmodium falciparum，p．f）海南株（FCC1／HN）乳酸脱氢酶（LDH），并对其免疫原性进行鉴定．为制备抗LDH抗体用于胶体金法快速检测疟原虫奠定基础。方法：应用PCR技术对恶性疟原虫乳酸脱氢酶（LDHpf）基因进行特异性扩增，将扩增产物克隆入表达载体pET-32a（＋），重组表达载体经鉴定后诱导表达；重组LDHpf（rLDH...

重组抗癫痫肽二串体的表达、纯化与鉴定

作者：王宗仁; 高碧峰; 袁有才; 李晶华; 张德安; 马静 刊期：2007年第06期

目的：利用基因工程方法表达抗癫痫肽（AEP）串联体蛋白，并进行纯化、鉴定。方法：PCR扩增AEP及AEP—His基因片段，并分别克隆至测序载体中；测序正确后，利用基因重组技术获得二串体基因，构建毕赤酵母表达载体pPIC9K-AEP2-His，甲醇诱导AEP2-His在毕赤酵母中表达，用Ni—chelating SepharoseFF柱纯化表达的融合蛋白，并用抗His单克隆抗体进行...

汉滩病毒84FLi株L片段全长cDNA克隆的构建及鉴定

作者：张野; 李新红; 黄长形; 王平忠; 姜泓; 白雪帆 刊期：2007年第06期

目的：克隆汉滩病毒84FLi株L片段的cDNA。方法：提取病毒总RNA，反转录为cDNA模板，用高保真的Toq酶扩增出含有L片段部分克隆的片段84L1（1-1875）、84L2（1725—3352）、84L3（2921-4961）和84L4（4727—6533），将这4个片段分别与T载体pGEM-T-Easy连接，转化感受态大肠杆菌后获得4个克隆pGEM—L1、pGEM—L2、pGEM—L3和pGEM—L4。利用酶切连接...

甲胎蛋白特异性小干扰RNA表达载体的构建及鉴定

作者：郏雁飞; 胡安拉; 汪运山; 周芳; 马晓丽; 苏占涛 刊期：2007年第06期

目的：构建特异性抑制甲胎蛋白（AFP）的小干扰RNA（siRNA）表达载体，为进一步研究AFP基因功能及AFP相关肿瘤的基因治疗奠定基础。方法：设计并合成AFP特异性的短链寡核苷酸，退火形成双链DN段，通过与RNAi-Ready pSIREN-DNR-DsRed-Express Donor Vector连接、转化大肠杆菌、扩增、纯化得到所需质粒，用琼脂糖凝胶电泳及基因测序鉴定其分子量及...

以减毒沙门氏菌为载体的小鼠肝炎病毒DNA疫苗的构建及其免疫原性

作者：焦红梅; 潘志明; 崔一晨; 田华荣; 焦新安 刊期：2007年第06期

目的：构建以减毒沙门氏菌为载体的小鼠肝炎病毒DNA疫苗，研究该疫苗的免疫原性。方法：以小鼠肝炎病毒S1基因的重组真核表达质粒pVAX1—S1免疫BALB／c小鼠，ELISA检测其诱导抗体产生情况；再将重组质粒pVAX1—S1电转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207中，构建运送S1基因的重组减毒沙门氏菌SL7207（pVAX1—S1），口服免疫BALB／c小鼠，间接免疫荧光...

含VEGF启动子的报告基因的构建及雌激素受体对其活性的影响

作者：熊志红; 丁丽华; 杨树兴; 孙启鸿; 杨晓; 袁斌; 韩聚强; 王朝云; 程龙; 叶棋浓 刊期：2007年第06期

目的：构建含血管内皮生长因子（VEGF）基因启动子的荧光素酶报告基因载体，并检测其在雌激素受体作用下的转录活性。方法：以乳腺癌细胞系MCF-7基因组为模板，扩增VEGF启动子片段，克隆到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中。用脂质体介导的基因瞬时转染法，将重组正确的报告基因载体转染293T细胞，检测重组质粒中荧光素酶报告基因的表达。结果...

小鼠CSRP2基因的克隆、融合表达及蛋白的分离纯化

作者：高雪; 薛赢; 孙景豫; 邱建华 刊期：2007年第06期

目的：获得小鼠CSRP2（cysteine rich protein2）基因片段，高效表达、纯化CSRP2。方法：用RT-PCR技术从小鼠心脏组织中提取总DNA并扩增出相应大小的CSRP2DN段，将其与pGEM—T—easy载体连接后测序，将测序正确的CSRP2从BamHⅠ和HindⅢ酶切位点克隆入原核表达载体pRSET—A，将连接产物转化大肠杆菌BL21，挑出阳性克隆，IPTG诱导表达重组的6xHis...

β2-微球蛋白mRNA低表达在肝细胞癌免疫逃逸中的作用

作者：吴尘轩; 杜智; 高英堂; 军; 朱争艳 刊期：2007年第06期

目的：研究肝细胞癌（HCC）组织中人白细胞抗原（HIA）I类分子轻链β2-微球蛋白（β2-m）在肿瘤免疫逃逸中的作用，探讨肝硬化背景对肝癌组织内β2-m的mRNA水平的影响。方法：RT—PCR法检测40例肝癌和癌旁组织中β2-m的mRNA水平，并从不同角度进行分析。结果：肝癌组织中β2-m基因mRNA水平显著低于非癌组织，肝硬变背景下肝癌组织内β2-m的mRNA水平低...

HSPC300蛋白的表达对原发性结肠癌细胞迁移能力的影响

作者：韩亚娟; 马大烈; 茹莉莉; 蔡雄伟; 张开泰 刊期：2007年第06期

目的：探讨HSPC300蛋白与原发性结肠癌发生与发展的关系，及其异常表达的细胞生物学意义。方法：用免疫组织化学方法分析HSPC300蛋白在正常、腺瘤及结肠腺癌中的表达；通过体外细胞迁移系统观察异常表达的HSPC300对结肠癌细胞迁移能力的影响。结果：HSPC300在正常结肠组织中的表达阳性率为25％（5／20），在结肠腺瘤组织中为15％（3／20），结肠...

NMDA型谷氨酸受体在骨祖细胞和成骨细胞表达并介导力学信号转导

作者：曾强成; 张西正; 邢建新; 田利源; 熊福银; 温叶飞; 陈红星; 邓继先 刊期：2007年第06期

目的：鉴定骨髓间充质干细胞D1和成骨细胞MC3T3-E1、MC3T3-E1亚克隆14是否表达NMDA型谷氨酸受体（NMDAR），并初步探讨NMDAR是否参与力学信号转导。方法：采用RT—PCR技术、免疫荧光染色技术、蛋白免疫杂交技术和体外细胞循环拉伸装置，鉴定了上述3个细胞系中NMDAR的表达情况，并初步探讨了在MC3T3-E1亚克隆14细胞系中，NMDAR在力学信号转导中的...

利用噬菌体展示肽库筛选鸡传染性支气管炎病毒模拟抗原表位

作者：安烨; 王宏俊; 张培君 刊期：2007年第06期

目的：利用噬菌体展示肽库技术筛选鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的模拟抗原表位。方法：用IBV阳性血清纯化IgG作为靶标。对噬菌体展示随机12肽库进行筛选，通过ELISA和竞争抑制ELISA鉴定筛选克隆的结合特性，并对阳性克隆提取ssDNA进行测序分析。结果：3轮生物淘洗后，目标噬菌体得到125倍富集。随机挑选50个克隆进行ELISA和竞争抑制ELISA。其中...

化学工业出版社书讯

刊期：2007年第06期

三株口蹄疫病毒的克隆和基因型鉴定

作者：相磊; 梁之昶; 章振华; 王学文; 胡国良; 徐福洲; 石岗; 陈小玲 刊期：2007年第06期

目的：将O、A、Asia—Ⅰ型等3株口蹄疫病毒（FMDV）VP3-VP1—2A区域的一个片段克隆到pMD18-T载体上，构建阳性重组质粒，并且鉴定3株病毒所属的基因型。方法：将从中国农业科学院兰州兽医研究所获得的O、A、Asia—Ⅰ型灭活FMDV提取RNA作为模板，采用RT-PCR技术扩增了VP3-VP1-2A区域的一个约1070bp的片段，包含了全部的VP1序列；将其克隆到pMD18-...