生物技术通讯杂志 省级期刊

青藏高原高原鼠兔Na^＋，K^＋-ATP酶β2亚基基因编码区的克隆与分析

作者：尚爱加; 陈婷方; 周定标; 白振忠; 高艳; 侯冰; 格日力; 张成岗 刊期：2007年第04期

克隆青藏高原高原鼠兔Na^＋，K^＋-ATP酶β2亚基（ATPlB2）的基因编码区，并分析其序列特征，以揭示高原鼠兔低氧适应的分子基础。方法：采用RT-PCR技术从高原鼠兔脑组织中扩增出ATPlB2基因编码区cDNA序列并进行序列测定，采用生物信息学技术对其进行分析。结果：ATPlB2基因编码区由873bp组成，编码290个氨基酸残基。序列分析结果显示，高原鼠兔A...

结核分枝杆菌Rv1009结构域基因的克隆、表达及亲和层析纯化

作者：樊爱琳; 苏明权; 师长宏; 徐志凯; 柏银兰; 马静; 刘家云; 张建芳; 程晓东; 郝晓柯 刊期：2007年第04期

目的：克隆结核分枝杆菌Rvl009结构域基因，经序列测定正确后进行融合表达和纯化。方法：采用PCR从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Rvl009结构域基因，用限制性内切酶消化后插入pUC-19克隆载体中，经测序正确后亚克隆到融合表达载体pPro-EXHT中，转化大肠杆菌DH5α，目的基因经IPTG诱导，由T7启动子调控表达了N端带6个连续组氨酸残基的Rvl009结...

pax2启动子的克隆及其在人胚胎肾293T细胞中的转录活性

作者：姜艳超; 丁丽华; 杨群辉; 胡建民; 曾敏; 杨智洪; 王晓辉; 李熔; 叶棋浓 刊期：2007年第04期

目的：克隆paired box 2（pax2）基因的启动子，插入荧光素酶报告基因载体中，并检测其活性。方法：采用PCR技术从人乳腺癌细胞系MCF-7基因组中扩增出pax2启动子，插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中，确定所扩增的DNA序列。将重组的报告基因瞬时转染人胚胎肾293T细胞，检测pax2启动子活性。结果：测序结果显示扩增的pax2启动子序列正确；活...

神经纤毛蛋白-1的原核表达及兔抗小鼠神经纤毛蛋白-1抗体免疫学活性的研究

作者：王文玲; 于洁; 薄洪; 贾汝静; 袁志宏; 黄前荣; 赵金存; 王炜; 高晓明 刊期：2007年第04期

目的：在原核系统中分段表达神经纤毛蛋白-1（Nrpl）；将纯化的蛋白免疫家兔后获得特异的抗体，并将其应用于检测组织和细胞中Nrpl分子的表达。方法：提取BALB／c胎鼠脑组织总RNA，通过RT-PCR分段扩增获得Nrpl基因片段，将PCR产物插入表达载体pET28a（＋），获得含5个Nrpl基因片段的重组质粒，在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导蛋白表达并纯化；将纯...

乳腺癌和卵巢癌易感基因2及2a编码蛋白N端的原核表达

作者：邹检平; 杜冠华; 吴春富 刊期：2007年第04期

目的：分别表达乳腺癌和卵巢癌易感基因BRCA2编码蛋白的N端500个氨基酸残基（nBRCA2）及其缺乏第3个外显子编码的蛋白（nBRCA2a），为分析比较含与不含第3个外显子所表达蛋白的功能差异准备条件。方法：采用RT-PCR，从BT-474细胞系的RNA扩增获得nBRCA2（编码1-500氨基酸残基）和nBRCA2a（编码1-18-105-500氨基酸残基）的基因片段，通过体外重组...

SARS冠状病毒S受体结合区蛋白片段在杆状病毒载体中的表达及其抗原性研究

作者：王弋嘉; 马翠卿; 吴明健; 郭彦; 李军锋; 周育森 刊期：2007年第04期

目的：利用Bac-to-Bacl杆状病毒系统，在sf9昆虫细胞中表达严重急性呼吸综合征（SARS）冠状病毒（SARS-CoV）的S受体结合区蛋白片段，并对其免疫原性进行研究。方法：将S蛋白的受体结合区基因片段定向克隆至转座载体pFast-Bacl，转化大肠杆菌DHl0Bac感受态细胞，用抗生素平板筛选重组杆粒。脂质体介导重组杆粒转染sf9昆虫细胞，待细胞形态明显改...

生长激素释放激素和人血清白蛋白融合蛋白的克隆表达

作者：王楠; 赵洪亮; 刘志敏; 刘党生; 薛冲; 熊向华 刊期：2007年第04期

目的：通过与人血清白蛋白（HSA）融合，延长生长激素释放激素（GHRH）在体内的半衰期。方法：根据毕赤酵母偏爱密码子重新设计GHRH的核酸序列，并通过化学合成和重叠PCR法将GHRH的N端与HSA的C端通过一个11肽的接头连接，获得GHRH和HSA融合的全长基因序列。构建pPIC9-HSA-GHRH表达载体，电击转化毕赤酵母GSll5感受态细胞，通过表型筛选和诱导表...

线虫抗凝血蛋白c2的融合表达及其抗凝活性分析

作者：彭礼飞; 邓莉; 杨陈; 吴亚敏; 鲁澄宇; 胡晶晶 刊期：2007年第04期

目的：在大肠杆菌中表达硫氧还蛋白-线虫抗凝血蛋白c2（Trx-NAPc2）融合蛋白，并检测其抗凝活性。方法：将扩增的NAPc2基因经BamHI和HindⅢ双酶切后连接到表达载体pET-32a中，转化至大肠杆菌BL21（DE3），分别经IPTG和乳糖诱导表达；表达产物经镍琼脂糖凝胶FF纯化后，用体外凝血酶原时间（PT）和活化部分凝血活酶时间（aPIT）试验检测抗凝血活性...

用基因芯片技术分析铝胁迫下小麦的基因表达谱

作者：李荣华; 郭培国; Guihua; Bai; Patricia; Ayoubi 刊期：2007年第04期

目的：采用基因表达谱分析方法，探讨小麦耐铝的分子机理。方法：利用抑制消减杂交（SSH）技术，以小麦的铝敏感品种Chisholm及其耐铝近等基因系Chisholm-T（其耐铝性来自小麦品种Arias66）的根尖为材料，构建了2个铝胁迫后的SSHeDNA文库，共含有1628个表达序列标签（EST），利用这些EST制作了小麦根系的eDNA基因芯片。以eDNA基因芯片为平台，在...

化学工业出版社书讯

刊期：2007年第04期

人14-3-3蛋白家族的生物信息学分析

作者：袁保梅; 昝玉玺; 王天云; 张俊河; 杨保胜 刊期：2007年第04期

目的：分析人14-3-3蛋白家族的同源性及分子进化关系。方法：利用已公布的人基因组数据库，采用BIASTN程序检索人14-3-3蛋白家族各成员的编码基因和假基因，并利用DNAMAN软件进行序列联配，绘制其分子进化树。结果：该家族半数成员具有多个假基因序列，为返转座类型假基因。进化分析表明该家族有共同的祖先，可归为3个亚类。结论：人14-3-3蛋白...

全国医药生物工程2007年学术研讨会征文通知

刊期：2007年第04期

利用Pyrobest　DNA聚合酶一步法进行大片段基因的定点突变

作者：朱大兴; 周清华; 王艳萍; 车国卫; 唐小军; 朱文; 陈小禾; 孙芝琳 刊期：2007年第04期

目的：介绍一种简单、快速、高效和经济的进行大片段基因定点突变的方法。方法：小量抽提含有NM23H1-EGFP融合基因的逆转录病毒真核表达质粒pLXSN-NM23Hl-EGFP，体外合成突变引物对，利用高保真PyrobestDNA聚合酶对质粒DNA进行PCR突变反应，然后用Dpn I限制性内切酶消化PCR产物以去除模板DNA，取适量消化产物转化大肠杆菌XLl-Blue，随机挑选克隆...

鼠源抗B型肉毒毒素Fab抗体库的构建及初步筛选

作者：杨秀清; 王慧; 史晶; 侯晓军; 包士中; 荫俊 刊期：2007年第04期

目的：应用重组噬菌体抗体库技术制备抗B型肉毒毒素Fab抗体。方法：用重组B型肉毒毒素重链C端片段（BoNTB／Hc）免疫BALB／c小鼠，从其脾淋巴细胞扩增免疫球蛋白Fd段和K链基因，克隆至表达载体pComb3中，并将抗体Fab段表达于噬菌体表面，建立容量为5．96x10^6 cfu的噬菌体抗体库。以BoNTB／Hc为抗原对所建抗体库进行4轮亲和筛选，获得与B型肉毒...

2种β2-受体激动剂抗血清的比较研究

作者：史利军; 董鹏; 杨正涛; 张乃生 刊期：2007年第04期

目的：通过比较分析，为β2-受体激动剂的快速免疫学检测方法及最佳免疫抗血清的选择提供依据。方法：分别以偶氮化法和碳二亚胺法将β2-受体激动剂克伦特罗（CL）和沙丁胺醇（Sal）连接到牛血清白蛋白和卵清蛋白上，免疫家兔；4次免疫后，采血制备抗CL和抗Sal的抗血清；用间接ELISA检测抗血清效价，用间接抑制ELISA检测抗血清交叉反应。结果：为...