作者:林才志; 谢海源; 黄振青; 周艳平; 甘尧; 戴明明; 程伟玲; 王春鹏; 廖丹 期刊:《中药药理与临床》 2019年第04期
目的:通过汗衣台抗HBV有效成分古伦宾、非洲防己碱对4种HBV启动子的影响研究,进一步探讨汗衣台抑制HBV病毒复制的可能机制。方法:采用CCK8法检测古伦宾、非洲防己碱对Hep G2细胞的增殖毒性,以确定它们的安全浓度;人工合成法、基因扩增法分别构建经典型和突变型的4种HBV启动子(S1p,S2p,Cp,Xp)调控的含荧光素酶报告基因的表达重组质粒(p Cp-Luc,p S1p-Luc,p S2p-Luc,p Xp-Luc),脂质体转染Hep G2细胞8h后,分别加入不同安全浓度的古伦...
作者:郑海亮; 王东方; 方雅; 刁小伟; 文勇; 袁云霞 期刊:《生物技术通报》 2019年第07期
建立一种通用型荧光素酶报告基因检测系统。以NF-κB信号通路为基础,用NF-κB-RE-Luc2P慢病毒感染HEK293细胞获得单克隆细胞系,并使用TNF-α进行了刺激验证;为证明该细胞系具备通用和改造能力进一步感染了FGF家族受体FGFRⅡ,筛选获得单克隆然后用FGF类药物进行刺激验证。结果表明,在TNF-α刺激实验中,响应值与TNF-α浓度呈现剂量依赖效应,且信噪比可达100倍以上,表明细胞系建立成功。FGF类药物刺激验证实验中,响应值与药物浓度可拟合成...
作者:赵源; 张超超; 路璐; 吴文斌; 朱贤丹; 樊海艇; 丁越 期刊:《中国比较医学》 2019年第09期
目的选用稳定表达荧光素酶报告基因的人源性肝癌细胞株(HCCLM3-Luc),构建人肝癌细胞株原位癌荷瘤裸鼠动物模型。方法活体成像仪定量分析不同细胞数量HCCLM3-Luc的荧光强度表达情况,并检测各细胞数量的荧光素酶活性,探索HCCLM3-Luc荧光素酶产生的光子量与肿瘤细胞数量之间的线性相关性。采用肝叶原位接种HCCLM3-Luc瘤块组织和尾静脉注射HCCLM3-Luc细胞悬液,分别构建人肝癌裸小鼠原位癌模型;比较两种方法构建人肝癌细胞株原位癌裸鼠...
作者:王强利; 国海东; 王奕; 吴心语; 赵亮; 王莹 期刊:《中国中医药信息》 2018年第11期
目的以CXCR4基因启动子为靶点,建立促干细胞归巢药物筛选细胞模型,并对中药单体进行筛选。方法将人CXCR4基因启动子序列(279bp)插入荧光素酶报告基因载体pGL4.17-Basic中,构建重组质粒pGL4.17-CXCR4,与内参质粒pRL-TK共转染293细胞,经验证CXCR4启动子转录活性后,单细胞克隆培养以获得稳转细胞株,并用于候选中药单体1~10的筛选,最后应用Westernblot验证所筛选出的中药单体促进间充质干细胞(MSCs)中CXCR4表达的作用。结果成功建立药...
作者:闫炳智; 王洁; 张波; 董福生; 侯琳; 王旭 期刊:《基础医学与临床》 2005年第03期
目的为了探讨P53基因对腺样囊性癌细胞端粒酶活性的抑制作用及机制.方法构建携带人野生型P53基因的腺病毒表达载体,以脂质体法瞬时转染腺样囊性癌SACC-83细胞,RT-PCR检测转染细胞P53基因mRNA的表达,TRAP-PCR-ELISA法检测转染细胞端粒酶活性的改变.并将P53基因与含有hTERT启动子核心调控区的荧光素酶报告基因pGL2-630共转染SACC-83细胞,测定转染细胞荧光素酶报告基因活性.结果 1. 瞬时转染含人野生型P53基因的重组腺病毒表达载体pΔE...
作者:孙江; 李月; 牛世贤; 黄梦怡; 钟玙沄; 赵舒祺; 罗海华; 姜勇; 刘靖华 期刊:《中国临床解剖学》 2018年第03期
目的探讨SETD4(SET-domain containing protein 4)对脂多糖(LPS)诱导的AML12(小鼠肝脏细胞系)细胞IL-6的转录调控作用。方法构建SETD4表达质粒和IL-6启动子荧光素酶报告基因质粒,共转染小鼠肝脏细胞系AML12,使用双荧光素酶报告基因技术检测LPS刺激后IL-6启动子荧光素酶活性;单独转染SETD4表达质粒上调AML12细胞SETD4表达,检测LPS刺激后IL-6 mRNA水平变化。结果双酶切鉴定及核酸测序证实重组质粒pcDNA3.0/HA-SETD4、pGL3.0/IL...
作者:罗志英; 马晓楠; 郭小瑞; 马宁宁 期刊:《中国生物制品学》 2019年第08期
目的建立胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)融合蛋白(GLP1-Fc)生物学活性荧光素酶报告基因测定方法,并进行验证。方法采用电穿孔法将GLP-1受体(GLP-1R)表达载体和cAMP反应元件(cAMP response element,CRE)报告基因共转染入HEK-293细胞中,通过加入潮霉素B筛选和单克隆培养,获得稳定转染的单克隆细胞株;采用药物敏感的细胞株建立报告基因生物学活性测定方法,并对方法进行优化及验证。结果筛选出GLP-1-Fc活性检测细胞...
作者:王自强; 王灿; 董闪闪; 邵泓; 陈钢 期刊:《药物分析》 2018年第10期
目的:利用sis诱导元素(sis-inducible element,SIE)转录活性荧光素酶报告基因系统检测白细胞介素6(IL-6)受体拮抗剂的生物活性。方法:采用脂质体转染法将含有SIE转录因子组件及荧光素酶报告基因的质粒pGL 4.47转入293T细胞,并通过潮霉素压力筛选获得稳定转染细胞株。加入IL-6激活稳转细胞株中的荧光素酶报告基因,构建SIE转录活性荧光素酶报告基因系统,并进一步建立基于此系统的IL-6受体拮抗剂药物的生物学活性定量检测方法。...
作者:熊欣; 颜广; 王秦豪; 茹懿; 严奉奇; 李霞 期刊:《细胞与分子免疫学》 2018年第02期
目的 建立迁移和侵袭抑制蛋白(MIIP)荧光素酶报告基因稳定过表达的结肠癌HCT116细胞系, 为MIIP基因的在体功能研究提供细胞模型。方法 将MIIP基因插入慢病毒载体pLEX-MCS-HA中获得重组慢病毒载体pLEX-MCS-HA-MIIP。利用该重组载体pLEX-MCS-HA-MIIP及包装载体VSVG、△8.9, 共转染HEK293T细胞, 包装表达MIIP的慢病毒, 将其感染HCT116细胞后, 采用适宜浓度的嘌呤霉素筛选, 建立MIIP稳定过表达的HCT116细胞。利用表达荧光素酶报告基...
作者:许丰雯; 徐丹; 李森; 王明晓; 乔文涛 期刊:《南开大学学报·自然科学版》 2011年第03期
原型泡沫病毒(prototypic foamy virus,PFV)属于反转录病毒科泡沫病毒亚科.为了在细胞水平定量检测PFV的感染,建立了以萤火虫荧光素酶为报告基因的指示细胞系.在幼小仓鼠肾细胞BHK-21中转染含有PFV LTR启动子及其控制下的荧光素酶报告基因的质粒,经过G418筛选得到稳定整合的细胞系.当PFV感染指示细胞系时,其反式激活因子Tas激活LTR启动子,诱导下游报告基因的表达,通过检测荧光素酶的活性即可对PFV的感染进行定量检测.结果表明,该...
作者:李春苗; 黎寿丰; 赵振华; 黄华云; 王钱保; 薛龙岗 期刊:《中国家禽》 2017年第02期
钙蛋白酶抑制蛋白在宰后嫩度和肌原纤维更新过程中起着关键的作用。为探讨CAST基因启动区G-198A突变位点不同基因型启动子活性,构建鸡CAST基因5′调控区CAST517序列的不同基因型双荧光素酶报告基因表达载体(pGL3-CAST517/promoter),采用脂质体转染法将不同基因型报告基因表达载体质粒(pGL3-CAST517G/promoter和pGL3-CAST517A/promoter)、空白对照质粒(pGL3-Basic)和海肾荧光素酶载体质粒pRL-CMV共转染至293T细胞,利用t检验法...
作者:况舸; 黄爱龙; 唐霓 期刊:《中华肝脏病》 2005年第06期
目的研究并比较肿瘤特异性Survivin和甲胎蛋白(AFP)基因启动子在不同肝细胞癌细胞系中的转录活性,为肝癌靶向性基因治疗提供依据.方法采用聚合酶链反应法扩增获得Survivin和AFP基因的启动子片段,并克隆入表达虫荧光素酶基因的报告质粒中,通过测定荧光素酶报告基因的表达情况,测定Survivin与AFP基因启动子的转录活性,同时采用巨细胞病毒启动子为对照,评价其转录活性水平.结果 Survivin启动子在肝癌细胞中具有相当强的活性,其活性水...
作者:陈懿榕; 阙任烨; 刘进锴; 沈艳婷; 晏旎; 李勇 期刊:《广州中医药大学学报》 2017年第04期
【目的】观察柴胡皂苷d对大鼠肝星状细胞内的雌激素受体转录激活的调节作用,探讨柴胡皂苷d的药理机制。【方法】体外培养大鼠肝星状细胞系HSC-T6,将雌激素受体的特异性报告基因ERE-tk-Luc用人工细胞膜介导细胞瞬时转染法转入HSC-T6细胞中,在不同药物浓度、不同时间作用点及加用雌激素受体抑制剂ICI182.780等条件下,采用双荧光素酶报告基因检测系统观察柴胡皂苷d及雌二醇对转染细胞荧光素酶(Luc)表达的影响。【结果】柴胡皂苷d浓...
作者:刘蕊 期刊:《天津医科大学学报》 2017年第01期
目的:克隆编码多药耐药基因-1(MDRl)中不同长度的启动子片段并探讨和比较其在乳腺癌细胞中的转录活性。方法:利用PCR扩增技术以MCF-7/ADR细胞基因组为模板克隆3种不同长度的启动子片段。pGL3-basic的启动区域中,构建一系列报告基因栽体pGL3-MDRlPn。以pGL3-control为阳性对照,分别将含不同长度的MDRl启动子的报告基因载体pGL3-MDRlPn与pRL-TK以一定比例共转染到敏感的MCF-7细胞和耐阿霉素的MCF-7/ADR细胞,通过分析表达的...
作者:刘晓彬; 仝颖娜; 张露芳; 周云丽 期刊:《天津医药》 2016年第12期
目的探讨雌激素受体α(ERα)阳性的乳腺癌细胞中ERα对神经激肽受体-1截短型变异体(NK1R-Tr)的调控作用,以及ERα是否通过调控NK1R-Tr的表达,间接调控细胞的增殖能力。方法染色质免疫共沉淀(CHIP)实验验证ERα是否可以结合到NK1R-Tr启动子上游的ERα反应元件,直接调控NK1R-Tr的表达;荧光素酶报告基因实验验证ERα是否对NK1R-Tr的表达起正性调控作用。Westernblot实验和RT-PCR实验检测乳腺癌细胞系MCF-7和T47D的ERα和NK1R-Tr在蛋...
作者:王珊; 周杰; 王宝利; 李晓霞 期刊:《天津医药》 2016年第09期
目的:构建核因子C(nuclear factor I-C,Nfic)基因3′非编码区(3′UTR)荧光素酶报告质粒,利用双荧光素酶报告基因验证microRNA-20a(miR-20a)与其潜在靶基因Nfic的靶向关系。方法通过microRNA靶基因预测软件Targetscan获取miR-20a与Nfic基因3′UTR潜在的互补结合位点;PCR扩增出Nfic基因3′UTR序列,将此序列克隆至荧光素酶报告载体pMIR-Report Luciferase;将重组荧光素酶报告质粒与miR-20a mimics(实验组)或NC mimics(...
作者:熊志红; 丁丽华; 杨树兴; 孙启鸿; 杨晓; 袁斌; 韩聚强; 王朝云; 程龙; 叶棋浓 期刊:《生物技术通讯》 2007年第06期
目的:构建含血管内皮生长因子(VEGF)基因启动子的荧光素酶报告基因载体,并检测其在雌激素受体作用下的转录活性。方法:以乳腺癌细胞系MCF-7基因组为模板,扩增VEGF启动子片段,克隆到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中。用脂质体介导的基因瞬时转染法,将重组正确的报告基因载体转染293T细胞,检测重组质粒中荧光素酶报告基因的表达。结果:酶切鉴定和DNA序列分析表明构建了正确的pGL3-basic—VEGF报告基因载体;转录活性实验...
作者:姜艳超; 丁丽华; 杨群辉; 胡建民; 曾敏; 杨智洪; 王晓辉; 李熔; 叶棋浓 期刊:《生物技术通讯》 2007年第04期
目的:克隆paired box 2(pax2)基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中,并检测其活性。方法:采用PCR技术从人乳腺癌细胞系MCF-7基因组中扩增出pax2启动子,插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,确定所扩增的DNA序列。将重组的报告基因瞬时转染人胚胎肾293T细胞,检测pax2启动子活性。结果:测序结果显示扩增的pax2启动子序列正确;活性实验表明构建的报告基因具有启动子活性,雌激素受体Ot(ERa)能以剂量依赖的方式升高...
作者:Volp; K.; Brezhiceanu; M.; -L.; Bosser; S.; M.; Zornig.; 刘丽娜(译); 王顺涛(校) 期刊:《世界核心医学期刊文摘·妇产科学分册》 2006年第06期
背景:高迁移率族蛋白-1(HMGBI)是一种非组蛋白染色体蛋白质,参与多种重要的生物学过程包括基因转录、DNA修复、V(D)J重组、分化和发展。HMGB1过表达可抑制程序性细胞死亡,因此HMGB1分子可能是一种抗细胞凋亡的癌蛋白。实际上,已有报道HMGB1在多种不同类型的肿瘤中表达增强。c—IAP2是一种抗细胞凋亡蛋白,可能是HMGB1激活核因子κB(NF—κB)的正调节产物。该研究拟对结肠癌患者HMGB1和C—IAP2的表达水平进行分析。方法:选...
作者:张振明; 李晖; 董钦; 刘宇; 李凤兰; 马宁; 李金波; 刘端阳; 舒畅; 逄淑超 期刊:《哈尔滨医科大学学报》 2007年第06期
目的 为了研究大鼠心肌SCN5A基因启动区+495bp-+584bp区域内的顺式作用元件对转录调控的影响。方法 应用聚合酶链反应扩增大鼠心肌SCN5A基因启动区+495bp~+584bp片段,与荧光素酶报告基因载体pGL3-promoter重组,以pGL3-promoter空载体为对照,瞬时转染人胚肾母细胞(HEK293)和小鼠胚胎心肌细胞(H9C2),检测荧光素酶活性。结果 成功构建的pGL3-P1重组载体的荧光素酶活性与pGL3-promoter对照载体相比,在HEK293细胞无明显差...