摘要：目的 建立迁移和侵袭抑制蛋白（MIIP）荧光素酶报告基因稳定过表达的结肠癌HCT116细胞系, 为MIIP基因的在体功能研究提供细胞模型。方法 将MIIP基因插入慢病毒载体pLEX-MCS-HA中获得重组慢病毒载体pLEX-MCS-HA-MIIP。利用该重组载体pLEX-MCS-HA-MIIP及包装载体VSVG、△8.9, 共转染HEK293T细胞, 包装表达MIIP的慢病毒, 将其感染HCT116细胞后, 采用适宜浓度的嘌呤霉素筛选, 建立MIIP稳定过表达的HCT116细胞。利用表达荧光素酶报告基因的慢病毒进行二次感染, 建立MIIP和荧光素酶报告基因稳定共表达的HCT116MIIP-Luc细胞和仅表达荧光素酶报告基因的HCT116Luc细胞。利用实时荧光定量PCR检测MIIP的mRNA水平, Western blot法检测MIIP蛋白水平, 小动物活体成像技术观察HCT116MIIP-Luc细胞和HCT116Luc细胞的荧光强弱。结果 成功建立了MIIP荧光素酶报告基因稳定共表达的HCT116MIIP-Luc细胞和仅表达荧光素酶报告基因的HCT116Luc细胞, 在HCT116MIIP-Luc细胞中实现了MIIP过表达, 生物发光成像结果显示HCT116MIIP-Luc细胞和HCT116Luc细胞均可产生较强的荧光。结论 分别建立了可传代的MIIP过表达及荧光素酶报告基因稳定共表达的结肠癌HCT116细胞株。

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