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猪瘟病毒Shimen株侵染猪肺泡巨噬细胞与猪血管内皮细胞的转录组共表达基因分析

作者：龚小程; 胡傲雪; 李雪鹏; 吴中兴; 何骏; 郭少敏; 宁蓬勃 刊期：2018年第12期

猪瘟病毒(Classical swine fever,CSFV)引起的猪瘟对于全球养猪业具有广泛危害,其深层发病机制仍待阐明。该研究基于CSFV Shimen株侵染猪肺泡巨噬细胞和猪血管内皮细胞差异表达的转录组学数据,深度挖掘这两种宿主细胞共同应答CSFV Shimen株侵染的关键基因。结果显示,真核生物起始因子4A3(eukaryotic translation initiation factor 4A3,EIF4A3)...

抗猪流行性腹泻病毒噬菌体单链抗体库的构建及筛选

作者：孙举; 高倩文; 曲雪婷; 仝舟; 毕玉海; 尹燕博 刊期：2018年第12期

构建抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)噬菌体单链抗体库,筛选鉴定抗猪流行性腹泻病毒的单链抗体。用猪流行性腹泻疫苗免疫发病耐过的猪,3次免疫后采血,分离淋巴细胞,提取淋巴细胞的总RNA,分别扩增猪IgG重链和轻链可变区,将其组装成scFv基因,连接到噬菌体质粒。进行3轮吸附-洗脱-富集选淘抗猪流行性腹泻病毒的噬菌体单链抗体库。结果构建了库量为9.5×10^...

布鲁菌L7/L12蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

作者：成璐; 张冬星; 吴娟; 李影 刊期：2018年第12期

为制备布鲁菌(Brucella)L7/L12蛋白及其小鼠源多克隆抗体,根据猪布鲁菌(Brucellasuis)S2株L7/L12基因序列,设计合成特异性引物,PCR扩增L7/L12基因并将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a-L7/L12,经鉴定正确后转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达。SDS-PAGE分析表明,重组菌经IPTG诱导后成功表达出分子质量为17ku...

不同免疫程序接种PRRS疫苗对仔猪血清抗体水平的影响

作者：丁尊俄; 赵双成; 张双翔; 周碧君; 肖焕星; 欧伟业; 王开功; 秦文学; 刘昱; 胡兴义; 张海; 李如举; 陈勇 刊期：2018年第12期

猪禽源大肠埃希菌和沙门菌对黏菌素的耐药性及MCR-1耐药基因检测

作者：李振斌; 姜雯; 宋传周; 赵建梅; 李月华; 迟良; 刘焕奇; 曲志娜 刊期：2018年第12期

为了解猪禽源大肠埃希菌和沙门菌对黏菌素的耐药性以及MCR-1基因的流行情况,选取2008年-2015年采集的18203株大肠埃希菌和2009年-2015年采集的1729株沙门菌为研究对象,使用WPS Office2016软件对菌株的MIC值分布和耐药结果进行统计分析,用PCR对部分菌株进行MCR-1基因检测。统计发现,在MIC≥4μg/mL时,大肠埃希菌和沙门菌所占比例分别为17.97%和29....

新型竹鼠源阿卡斑病毒RT-PCR检测方法的建立

作者：唐海波; 彭可可; 陈凤莲; 白安斌; 刘金凤; 吴健敏 刊期：2018年第12期

为了建立新型竹鼠源阿卡斑病毒RT-PCR的检测方法,通过对新型竹鼠源阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)及其同属各病毒基因序列进行比对分析,设计了针对AKAVM基因片段的一对特异性引物,经优化建立AVKV的RT-PCR检测方法。结果表明,在57℃退火温度条件下,于3h内可完成目的片段扩增,目的片段大小为816bp;该方法能特异性地扩增新型竹鼠源AKAV,不能扩增竹...

头似辐首线虫的形态观察及rDNA-ITS序列分析

作者：胡丽莉; 孙彦; 张悦; 卜艳珍 刊期：2018年第12期

为了探讨头似辐首线虫( Gyalocephalus capitatus )的形态和分子序列特征,应用数码显微镜和分子生物学技术对该线虫进行形态观察和分子序列测定分析,然后用MEGA 5.0软件,采用最大似然法(Maximum likelihood,ML)。构建圆线虫的系统发育树。研究表明,头似辐首线虫中等大小,口囊短而宽,囊壁前宽后窄,外叶冠由90个~95个小叶组成,内叶冠由30个~40个小...

绵羊lncRNA-MRLN基因的克隆和蛋白编码能力分析

作者：刘芝瑾; 曹洋; 吾热力哈孜·哈孜汗; 倪伟; 王大伟; 胡圣伟 刊期：2018年第12期

为了验证长链非编码MRLN基因具有蛋白编码能力,通过提取哈萨克羊胚胎期比目鱼肌总RNA,用RT-PCR获得lncRNA-MRLN基因;用EGFP自身发光及不影响目的蛋白特性的特点,构建了pcD-MRLN-EGFP融合表达载体,且转染293T细胞对lncRNA-MRLN是否具有蛋白编码能力进行分析。结果表明,重组质粒经HindⅢ和EcoRⅠ双酶切成1059bp和5428bp片段,真核表达载体pcDNA3.1(...

外泌体源性oar-miR-10b在绵羊痘病毒感染绵羊睾丸细胞中的动态表达及靶基因的鉴定

作者：孔贺磊; 吴金恩; 郑亚东; 何贵天; 李雅婷; 丁军涛 刊期：2018年第12期

马立克病病毒感染鸡红细胞6种免疫相关因子转录水平的鉴定

作者：牛胜; 李欣; 张宁; 宁官保; 张鼎; Ali; Raza; Jahejo; 马海利; 郝卫芳; 高文伟; 赵宇军; 高诗敏; 李桂兰; 李建慧; 闫芳; 高荣琨; 毕玉海; 韩凌霞; 田文霞 刊期：2018年第12期

从江香猪源干扰素α2基因的克隆与序列分析

作者：温贵兰; 陈绍品; 张升波; 林汉卿; 赵德刚 刊期：2018年第12期

选取我国珍稀物种贵州从江香猪作为研究对象,提取贵州从江香猪肝脏组织总RNA,反转录生成cDNA,采用特异性引物扩增从江香猪的IFN-α2(CJ-poIFN-α2)基因编码区,克隆至pUCm-T载体后送上海英骏公司测序,并用生物学软件对CJ-poIFN-α2基因进行序列分析。测序结果显示,从江香猪IFN-α2编码区长为546bp;序列比对结果表明CJ-poIFN-α2与猪源IFN-α2核苷酸序列...

鸭源H6N6亚型禽流感病毒贵州株NA基因序列分析

作者：万润; 华敏; 龙立书; 贺欣薇; 张明洋; 周碧君; 王开功; 程振涛; 文明 刊期：2018年第12期

为了解H6N6亚型禽流感病毒贵州株N6基因生物学特性,根据GenBank上禽流感病毒N6基因序列设计特异性引物,对贵州地区分离的H6N6亚型禽流感病毒贵州株进行N6基因RT-PCR扩增与克隆测序分析,结果显示,4株H6N6亚型禽流感病毒贵州株N6基因编码区均为1380bp,可编码459个氨基酸,其中从第175-207位缺失33个核苷酸,即编码蛋白颈部存在11个氨基酸缺失(TNSTTT...

融合TAT重组猪细小病毒样粒子的构建及鉴定

作者：刘金凤; 杜毅超; 覃绍敏; 白安斌; 张振江; 陈凤莲; 吴健敏 刊期：2018年第12期

为表达和鉴定含TAT蛋白转导域的重组猪细小病毒(PPV)样粒子,以PPVN株为模板扩增其VP2基因,将具有穿膜功能的TAT蛋白转导域连接在VP2基因的N端,构建TAT-VP2融合基因,并用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统构建含TAT-VP2基因的重组杆状病毒,感染昆虫细胞进行融合基因的表达,通过间接免疫荧光(IFA)、电镜观察及血凝试验对表达产物进行鉴定。IFA...

气肿疽梭菌CctA基因的真核表达

作者：陈竞; 齐强; 罗永仁; 张皓; 李成辉; 任春宇; 车达; 姜永越; 于建华; 金鑫 刊期：2018年第12期

为了控制延边地区气肿疽病的发病率,制备出有效的核酸疫苗,根据NCBI上气肿疽梭菌细胞毒素A(CctA)的基因序列设计出一对特异性引物。将PCR扩增的CctA基因克隆到pMD19-Tsimple载体,对测序正确的基因进行序列分析,再次克隆至pcDNA3.1-1真核表达载体,并且将其转染Vero细胞。结果表明,pcDNA3.1-CctA组通过转染后的细胞存在绿色荧光的现象,同时pcDNA3....

信阳水牛成纤维细胞的体外培养及生物学特性分析

作者：楚秋霞; 于翔; 辛晓玲; 施巧婷; 滑留帅; 王二耀; 徐照学 刊期：2018年第12期

为建立信阳水牛成纤维细胞系,以信阳水牛耳缘组织为实验材料,采用组织块培养法进行原代和传代培养,并对其形态学、生长曲线、细胞活力、染色体、微生物检测等生物学特性进行分析。结果表明,培养的细胞形态为典型的成纤维细胞,生长曲线呈“S”型,细胞冻存前和复苏后的活率均在95%以上,细胞在10代之内二倍体均在96%以上;细菌、真菌、支原体检测结...