1.动物实验的伦理学争论
自然界的生物经历了一个由低级向高级不断进化的过程,在这个过程中，人类处于自然界现有物种进化的顶端。人类在情感、自我意识、与他人的交往能力、正义感等方面是优于动物的。人是有理性的道德行动者,这决定了人类具有最高的道德地位，具有高于动物的价值。动物没有理性，并不是说它就没有道德地位，只能说它具有和人类不同的道德地位。动物是有痛觉的，它们在受到疼痛刺激时，也会表现出不同程度的痛苦表情和反应;而且,动物特别是脊椎动物是具有情感和认知能力的。动物实验是否可以通过伦理学评价，要视该动物实验是否为生物医学科学研究中必需的手段,并且实验动物所遭受的痛苦是否减少到最低水平，这两个要求是一个动物实验通过伦理评价的必要条件。
“道义论”者认为一个行动的对错要看它是否符合规定的义务的伦理原则。在由人组成的道德共同体中，人与人之间负有一定的义务,人们首先要考虑的是自身所属的道德共同体成员的利益和价值,对于不属于人类这一道德共同体的动物的义务，就要低于对人的义务。因此，如果进行动物实验的目的是为了人类或其它动物的利益,并不是为了伤害动物，且在实验的过程中没有给动物带来不应有的伤害,并把给动物带来的伤害降低到最低程度,那么进行动物实验是可以通过伦理学评价的。
“后果论”者认为大多数动物实验给生物医学所带来的好的结果要远远大于给动物带来的伤害。在一些生物医学研究中，活体实验是必需的过程与手段之一,如果没有活体实验，这些研究与进步可能就会停止。事实证明，目前还没有其他方法能够完全取代活体实验;如果禁止利用活着的动物进行实验，那么就会导致有更多的人成为受试者。为了保护动物的利益，而使人类承担巨大的风险，这是与同为一个道德共同体的人类首先要考虑人类自身的利益的要求背道而驰的。因此，为了最大程度保护人类的安全与利益，要求在设计人类受试者实验之前必须进行充分的动物实验是正确的。在实验过程中，如果避免或减少给实验动物带来不必要的伤害和痛苦，这些动物实验就完全可以得到伦理学辩护。
作为生物医学工作者,我们必须承认,动物是对人类的一种贡献，既要认识到动物实验研究是一件对人类有益的事情，也要看到保护动物有利于人类进步和社会发展的合理部分。动物保护主义者的合理意见也要采纳，既要不断通过实验为生物医学发展和人类健康提供更多更有益的成果,为人类进步和社会发展做出巨大的贡献，又要通过科学、高效、经济的方法和人道主义原则不断改进和提高研究方法和质量,尽量减少实验动物的痛苦，尽可能地满足这一群不会说话的生灵的无言的要求。此外,我们要承认动物实验是人所从事的，离开人来谈动物实验是虚伪的。如果地球上没有了人类,只生活着一群动物，那么，保护动物从何而来？又由谁来保护？其实，实验研究的本身不单是为人类,有些实验也是为了动物本身。
2.实验动物福利伦理现状及存在问题
为了人类的健康和科学的进步，无数实验动物为此承受着巨大的痛苦甚至丧失生命，我们在使用这些实验动物进行实验时是否认真、严谨、科学地对待它们的生命？是否考虑过它们的感受和痛苦？是否意识到它们与人类一样具有喜怒哀乐？长期以来，由于传统、习惯、人文和科学发展的因素，我国实验动物科学发展比较缓慢，国人乃至科学界没有及时、充分意识到实验动物的重要性，对实验动物福利伦理问题的认识更是滞后,实验动物基本的福利得不到维护和保障，降低了实验动物的质量，影响了科学研究结果的准确性。主要表现在:实验过程缺少人性精神，没有从心理上、思想上重视实验动物生命，只是将其视为一种工具，为取得实验成果必需的一种工具;动物实验缺乏科学性和严谨性,随意或滥用实验动物;实验后未及时对动物进行止痛、抗感染等妥善处理,使实验动物长时间忍受痛苦的煎熬;实验操作不熟练，不仅延误了实验时间，也增加了实验动物的痛苦。
3.实验动物福利伦理实施的必要性
所谓动物福利，即人类应该合理、人道地利用动物,要尽量保证那些为人类作出贡献的动物享有最基本的权利。在动物实验后的留观和照料过程中，我们要充分考虑到其居住环境的温度、湿度及一些其他相关的因素是否符合要求,只有把这些因素完全控制在一个非常合理的条件下（国标），实验动物才能够真正的反映出它某个实验的结果;其次,实验动物作为一种生命形式，同人类一样有着基本的生存需要和高层次的心理需要，只有当其基本福利得到满足时，动物才能充分享受大自然赋予的生命乐趣,保持良好的身心状态,达到标准化，符合科学实验的要求，确保科学研究的准确性和科学性。而不合理地改变或限制动物的这些需要,造成动物行为和生理方面的异常,会影响动物的健康，影响实验结果。因此，实施实验动物福利势在必行。
要真正实现动物福利也是很困难的，必须从伦理学的角度去认识动物福利,而伦理学是关于道德以及人与人关系的古老学问。现在，人与自然、人与动物的关系都被纳人到伦理学研究的范畴,在判定动物在人类社会中的地位和判断动物应当被如何使用的问题上，伦理学思考有着至关重要的作用。只有从伦理学的角度认识实验动物福利，才能充分保证实验动物福利的实施。
4.实验动物福利伦理立法状况
从实验动物福利理论兴起至今，许多国家和国际组织在实验动物福利方面已经制定或即将制定相应的法律、法规、标准和准则。第一部针对实验动物福利的法律是美国1966年出台的《动物福利法》，至今已经多次修订。随后,加拿大、英国、德国、澳大利亚、新西兰、曰本、泰国、菲律宾等国针对动物实验福利成立实验动物管理委员会或进行立法,加大了对实验动物使用情况的监督和管理。1986年11月24日，欧洲议会通过了《保护在实验中或为达到其他科学目的使用脊椎动物的欧共体条例》,2000年12月经济合作与发展组织(OECD)了《识别、评估和使用临床症状对试验用动物在安全状态下实施仁慈终点的指导文件》等文件，这些法律法规对实验动物福利规定的基本点可以用“3R”（Reduction，Replacement,Refinement)原则予以概括,SP“减少、替代、优化”。Reduction是指在科学研究中,使用较少@动物获取同样多的实验数据,或使用一定数量的动物能获得更多的实验数据的方法;Replacement是指使用其他方法而不用动物所进行的实验或其他研究课题，以达到某一实验目的;Refinement是指通过改进和完善实验程序，减轻或减少给动物造成的疼痛和紧张，以提高动物福利的方法。以Reduction、Replacement和Refinement为核心的“3R”原则已经为越来越多的科学家所接受,并在实际研究工作中得到了广泛的应用，对推动生物医学及其相关学科研究的发展起到了重要的作用。
1988年颁布的《实验动物管理条例》是我国实验动物法规体系中最重要的文件之一。为了更好地适应科学研究、经济建设、社会发展和对外开放的需要，2001年11月，《实验动物管理条例》修改工作已经启动,其中最为引人关注的内容是增加了生物安全和动物福利两个章节。2006年，科技部颁布了《关于善待实验动物的指导性意见》，这是我国第一个关于实验动物福利和动物实验伦理的法规性文件。2006年11月7日,科技部的第11号令《国家科技计划实施中科研不端行为处理办法(试行)》，明确将“违反实验动物保护规范”列为六种不端行为之一,需要进行坚决治理。此外，在一些新出台的地方法规中也相应规定了实验动物福利内容，在《北京市实验动物管理条例》、《湖北省实验动物管理条例》、《云南省实验动物管理条例》、《江苏省实验动物管理办法》等法规中都有实验动物福利伦理方面的内容，北京市为了更好地贯彻条例,还专门制订了《北京市实验动物福利伦理审查指南》。但是,尽管国家和地方上述政策法规已经出台，但仅是零星地出现，尚未形成专门的实验动物福利法’也缺乏实质性可操作性配套措施，执行情况尚不理想，实验动物福利伦理审查尚停留在制度和形式中。总体而言，目前实验动物伦理观念还没有以理性的方式全面地深入公众之心，冷酷无情地对待各种动物和实验动物，给它们造成不必要痛苦的现象还比较普遍。
5.科学合理地进行动物实验
早在1831年，英国生理学家MarshallHall就建议对动物实验加以规范。他曾提出著名的5条法则:如果靠观察可以获得所必需的资料，则不需要进行动物实验;如果没有明确的限定和预期结果则也不需要进行实验;科学家应对前人和同代人的工作有充分的了解以避免不必要的重复实验;良好的实验应该使动物受到最少的痛苦(可改用较低等的、反应迟钝的动物）任何实验均需在能提供明确结果的环境下进行,以避免或减少重复实验。建立实验动物伦理审查委员会、加强对动物实验的监管、制定相应的法律法规，也是保障实验动物福利的重要手段和措施。
5.1实验设计、操作中实验动物福利伦理
动物实验要在符合相关动物福利伦理的法律法规下进行，要充分尊重实验动物的生命。一个科学、合理的动物实验，其前提是必须能够完成该实验或最终有益于人类和动物的预期计划。在选择实验动物时，应选择最适用于该研究的生物物种，当研究或教学涉及那些可能导致动物的痛苦、不安或应激的操作过程时，研究者应该使用那些最不可能受到伤害的物种。在使用实验动物制作人类疾病模型时，应选用合适的造模方式或成熟的动物模型,研究者应使用最少量的动物来实现研究目的,特别是那些对动物有伤害的研究更应如此。在动物实验过程中,应将动物的惊恐和疼痛减少到最低程度,尽量采用物理、化学及体外检测等非夺取动物生命的方法。在具体实验操作过程中，科研人员在实验开始前要充分了解实验动物的生理生态习性，熟练掌握抓取、注射、取样、测量等操作技巧，应遵循“温和保定，善良抚慰,减少痛苦和应激反应”的原则，使对动物身体的强制性限制减少到最低程度。在对实验动物进行手术、解剖或器官移植时，必须进行有效麻醉。术后恢复期应根据实际情况，进行镇痛、保温和有针对性的护理及饮食调理。实验动物的重复利用应根据评估,确认在重复使用过程中未加重对实验动物的伤害和痛苦,可以对其未利用的部位进行实验技术的操作训练,如做完感染性休克实验的家兔，在麻醉状态下，可以进行耳缘静脉注射、心脏取血、导尿及灌胃等操作训练。实验最终结束后动物尸体的处理须按照人道主义原则实施安死术,避免进行活体解剖或用粗暴方式处死动物。处死现场，不宜有其他动物在场。确认动物死亡后，方可妥善处置尸体。灵长类实验动物的使用仅限于非用灵长类动物不可的实验。除非因伤病不能治愈而备受煎熬者,猿类灵长类动物原则上不予处死，实验结束后单独饲养，直到其自然死亡。
5.2 实验后对留观动物照料管理中的福利伦理
实验动物照料和管理人员必须具有实验动物知识和从业资质，应为实验后留观的动物提供清洁、舒适、安全的生活环境，室内环境及笼具、垫料质量指标不得低于国家标准;笼具应定期清洗、消毒，垫料应灭菌、除尘、定期更换，各类动物所占笼具最小面积应符合国家标准,保证笼具内每只动物都能实现转身、站立、躺卧等自然行为。此外，照料管理人员应根据动物习性和实验需要，给予足够的饲料和清洁的饮水，减少消毒剂、紫外线等对动物的直接伤害。
6.如何加强和改善我国实验动物福利伦理工作
6.1尽快立法，维护实验动物福利伦理
我国实验动物福利立法刚刚起步，目前尚无专门的实验动物福利法，与发达国家相比，还存在着一定差距。为了科技发展的需要,也为了应对国际挑战并与国际接轨,我们应该结合国情，充分借鉴国外的成熟立法经验,不失时机地加快实验动物福利立法的步伐，缩小与发达国家的差距，以适应我国科学技术和国民经济快速发展的需要。
6.2 广泛进行有关宣传,培养科学、合理而人道地使用实验动物的理念
应充分利用有关资源和媒体，使普通公众特别是广大科技人员认识实验动物的重要性,认识维护实验动物福利伦理对实验动物质量,对科技进步、社会发展乃至人类健康具有重要的意义,从而逐步使实验动物福利伦理思想被人们所了解，改善我国实验动物福利伦理状况。
6.3加大投入,改善条件
加大实验设施、设备、器械经费的投人，使设施更加先进，设备、器械更合理，减少由于设施设备陈旧和器械老化等对动物的不良刺激，逐步建造符合实验动物福利伦理条件的、具有国际水平的动物实验设施和优良的设备器械。
1适配体及其优点
适配体的概念在1990年由Tuerk等首次提出,来源于拉丁语“aptus”,即“匹配”的意思,指能结合蛋白或其他小分子物质的单链或双链寡核苷酸片段。研究表明,在一定环境下,单链DNA或RNA能与某些物质形成多种热力学稳定的三维空间结构而成为各种功能分子。在大多数情况下,溶液中的单链DNA或RNA的空间构象是不确定的,当有目标分子存在时,在合适的环境下寡聚单链会发生适应性折叠,形成发夹(hairpin)、假结(pseudoknot)、凸环(bulge)、G-四分体(G-quartet)等特殊结构,通过氢键、疏水堆积作用、范德华力等与目标分子紧密结合[1]。研究者们在单链DNA或RNA自身形成的空间结构与目标分子高效特异结合的基础上,建立随机寡核苷酸文库,将该库中的核苷酸序列与目标分子混合,用洗脱、过滤、亲和色谱、磁性微球等方法筛选出与其特异性结合的核苷酸片段,再通过PCR进行扩增,经多个循环分离得到亲和力和特异性都最高的寡核苷酸结合序列[2]。筛选出的寡核苷酸片段被称为适配体,与适配体能进行特异性结合的目标分子称为配体(ligand)。
与传统抗体相比,适配体具有以下优点。①靶标广。适配体可以与小分子物质如氨基酸、金属离子、辅助因子FMN、核苷等结合,也可以是药物、类固醇、糖类等,甚至是完整的细胞、病毒和细菌等结合,拓宽了其应用范围。②有高亲和性和特异性。
核酸适配体只识别与其互补的分子空间结构,能够分辨出靶分子结构上的细微差别,比如相差一个甲基或一个羟基或D/L镜像体之间的区别等。同时核酸适配体与靶分子结合的解离常数(kd)可以达到纳摩尔甚至皮摩尔水平,具有比抗体或其他类型配基更高的亲和力和特异性,有的甚至高于天然配体[3],几乎可以完全避免非特异性结合。如茶碱与其他黄嘌呤类似物咖啡因、可可碱的结构非常相似,常规的茶碱单抗与后两者有交叉反应,而核酸适配体只特异结合茶碱,与其他两种物质无反应,且与茶碱的亲和力比与咖啡因高10000倍。③可以大量、快速地在体外合成,筛选制备简单快速,结构易改造与修饰。2001年Cox等[4]成功地建立了适配体自动化筛选平台,筛选到了溶菌酶的适配体。筛选流程包括:通过链霉亲和素(SA)与生物素的相互作用将生物素化的靶蛋白固定在磁珠上,随后特异结合序列的分离,RT-PCR扩增和转录都通过设定的程序自动化完成,最后将筛选得到的序列克隆到载体中进行测序鉴定。2002年又做了进一步改进[5],直接利用基因体外转录与翻译的方法产生靶蛋白。④稳定性优于抗体,利于储存。核酸适配体在亲和力和特异性方面可与抗体媲美,甚至优于抗体,并且具有抗体所不具备的其他一些优点[6]。⑤具有低免疫原性,能干扰靶蛋白质之间的相互作用。核酸适配体不具有免疫原性,预临床试验结果显示,即使应用剂量高于治疗剂量的1000倍[7],也不会引起免疫反应,没有明显的毒性和副作用。
2适配体的研究现状
2.1治疗药物的选择
理论上,适配体可以被用于治疗任何由有害基因的表达而引起的疾病,如病毒感染、癌增长和炎性疾病等。核酸适配体作为治疗药物的研究始于20世纪90年代,首先被证明具有治疗功能的适配体是抗血管内皮生长因子适配体,也是适配体治疗药物中最成功的一例,后来被EyetechPharmaceuticals公司和Pfizer公司共同开发为一种治疗湿性老年性黄斑变性药物,已经通过第三阶段临床试验[8]。
此后,适配体作为治疗药物在生物医学领域得到了广泛推进,并深入到各个领域,如心血管疾病治疗、肿瘤的显像和治疗、流感病毒的检测和治疗药物等各个方面。近年来,核酸适配体类抗病毒药物的筛选研究进行得尤其迅速,如通过筛选抑制A20蛋白适配体来抑制牛痘病毒的复制[9],丙型肝炎病毒RNA复制子的适配体的筛选[10]及抗HIV药物筛选等。其中,对抗HIV适配体类药物的研究最多,如Kissel等[11]通过抑制HIV-1逆转录酶制备的适配体、Hannoush等[12]通过抑制HIV-1核糖核酸酶H制备的适配体及Katahira等[13]通过抑制HIV-1Tat蛋白介导的反式激活制备的核酸适配体等。
2.2小分子物质检测
人们设计出各种新型的生物传感器来检测金属离子、药物、核酸、蛋白质和细胞等小分子物质,并通过荧光染料、荧光共轭高聚物、纳米粒子、电化学活性探针等材料以及核酸的级数扩增特性、核酶的催化活性及镜像适配体的手性识别特性等多种形式增加检测灵敏度。基于适配体的检测技术也令人振奋,如荧光染料TOTO常温下直接与适配体混合即完成“标记”而用于靶分子检测[14],基于适配体的生物传感器可达到“无试剂、可再生、超敏感”的靶分子检测新要求[15]。McCauley等[16]以核酸适配体制成生物芯片,能同时、定量、特异地检出3种混于血清和细胞提取物中的肿瘤相关蛋白(次黄嘌呤单磷酸脱氢酶Ⅱ、血管内皮生长因子和碱性成纤维生长因子),显示出良好的特异性和应用前景。
目前已开发了基于适配体的比色、荧光及电化学等方法,用于各种疾病相关蛋白质的检测。Wang等[17]利用硅纳米颗粒与金电极技术结合,将适配体应用到电化学生物传感器上,采用竞争模式对凝血酶蛋白进行了定量检测,检测限可达1.0×10-12mol/L。2006年我国徒永华等[18]利用凝血酶的2条核酸适配体与凝血酶的高亲和力构建了三明治结构,利用磁性纳米颗粒的磁性分离技术,设计并制作了一种新型的荧光纳米生物传感器,用其检测凝血酶,具有很高的特异性和灵敏度。由于目标分子在适配体上精确的结合位点与构象变化通常并不十分清楚,直接导致合适标记核酸适配体存在一定的难度。因此,适配体的无标记型检测技术已经成为近年来的研究热点,尤其在生物检测、环境监控等领域具有非常重要的意义。
2.3基因调控领域
适配体可通过与靶位点结合而影响生物体的遗传功能,适配体可以直接在转录和翻译两个水平上对基因表达产物进行调控。适配体通过对构成表达体系中的各类因子的作用,抑制或激活调控蛋白的活性来影响mRNA或蛋白质的表达量。或将适配体作为调控元件插入到表达体系中,通过适配体与靶分子结合时的变构效应,影响蛋白质最终表达,从而对蛋白质的功能进行调控。LXRs是肝中胆固醇逆向转运调节的一种重要因子,它通过干预机体内众多胆固醇调节蛋白的表达量来调节血液中胆固醇代谢。Surugiu-warnmark等[19]通过体外筛选技术筛选到一种LXRs受体抑制剂,该适配体能有效地降低LXR-α和LXR-β受体浓度,通过控制脂肪酸的合成和高密度脂蛋白的组装来调节胆固醇的合成。该适配体是一种潜在的治疗动脉粥样硬化心血管疾病药物。Charlton等[20]利用适配体结合中性粒细胞中弹性蛋白酶从而阻止其催化反应,其作用超过了此蛋白酶的天然抑制因子。而可识别凝血因子Ⅸa的RNA适配体在临床中已可替代肝素,并可通过适配体的互补序列来调控抗凝效果[21]。最近人们开发出一些与肿瘤、艾滋病、肝炎相关蛋白质的适配体,可直接用于干扰疾病的发展过程[22]。原核生物中发现的Riboswitch更是适配体参与基因表达调控的一大里程碑,该发现提示不需要蛋白质因子的参与,RNA与代谢产物结合即可调控自身的转录和/或翻译。根据这一原理,人工构建的Ribos-witch能够实现目的基因的可调控表达[23],利用Ri-boswitch特性有可能开发出新型抗生素。
3适配体在动物医学领域的应用前景
3.1动物疫病治疗中的应用
适配体在治疗动物疫病方面的研究还处在起始阶段,近年来在病毒性疾病、细菌性疾病和寄生虫病治疗方面都有了初步探索结果。病毒性疾病方面,Cheng等[24]利用SELEX技术筛选出与H5N1亚型流感病毒HA1蛋白结合的DNA适配体,对H5N1亚型流感病毒具有抑制活性;Jang等[25]在体外筛选出抑制人严重急性呼吸综合征病毒(SARS)NT-Pase/解旋酶的RNA适配体,通过抑制该病毒双链DNA的解旋来抑制病毒复制。King等[26]以纯化的朊病毒蛋白质作为靶物质,筛选到了适配体97,试验证明该适配体在脑组织匀浆中能特异性地识别和结合朊病毒蛋白质。细菌性疾病方面,江丽等[27]筛选到了与葡萄球菌肠毒素B(ESB)特异、高亲和力结合的单链DNA(ssDNA)适配体,为金黄色葡萄球菌感染的诊治奠定了基础;潘勤等[28]筛选出了针对伤寒杆菌IBV型纤毛操纵子的适配体,该适配体能显著抑制伤寒杆菌侵入THP-1细胞。这些研究成果使得开发新型预防和控制动物传染病感染的药物成为可能。
此外,在寄生虫病的防治方面,也有人进行了初步研究。非洲布氏锥虫是人与家畜易感的致命的寄生虫病的病原,目前所使用的药物毒副作用大,且存在耐药现象。Homann等[29]构建了85个核苷酸的RNA序列文库,得到了3个家族的抗布氏锥虫适配体。其中,适配体2-16能折叠形成假结发夹结构并能够与血流阶段的布氏锥虫结合,亲和力达到6·0×10-5mol/L。这不仅对寄生虫病的治疗方法进行了探索,还为适配体用于活组织或其他复合物表面成分的鉴定及定位提供了依据。
3.2动物产品检验中的应用
2021年硕士研究生复试工作方案
根据教育部、陕西省教育考试院及学校相关文件精神，结合我院实际，为确保我院2021年硕士研究生复试工作顺利开展，特制定本工作方案。
一、基本原则
严格落实疫情防控要求，切实保障考生和涉考人员的生命安全和身体健康。坚持公平、公正、公开和科学选拔的原则，坚持能力与知识考核并重,着力加强对考生科研创新能力和实践能力的考查；注重考生一贯表现，既重视初试成绩，也重视既往学业表现和潜在能力素质。坚持立德树人，着力加强思想政治素质和品德考核，按需招生、择优录取、宁缺勿滥、确保质量。
二、组织管理
学院成立书记、院长双组长制的研究生招生工作领导小组，负责组织落实本单位研究生复试录取工作；学院成立监督工作组，由学院党委书记任组长，全面负责招生各环节的纪律监督工作，保证招生程序的公平正义，接受和处理考生及学院师生的诉求；学院成立复试专家组，组长由各方向（领域）负责人担任，成员由各方向（领域）导师组成（根据工作实际，复试前确定具体名单），每组复试专家组成员5-13人；学院成立应急防控工作小组，由学院党委书记、院长任组长，确保招生录取工作规范有序进行。
三、招生计划
按照研究生院确认的2021年硕士研究生招生计划数执行。
四、复试方式与内容
严格按照《关于做好2021年硕士研究生招生录取工作的通知》（办发〔2021〕7号）文件执行。
（一）复试方式
2021年全国硕士研究生复试采用网络远程方式进行,复试时考生不允许到校。我校已返校毕业班考生与其他考生一样,采用网络远程复试方式进行复试,复试时考生不允许到复试现场。
（二）复试内容
复试由笔试、面试、心理测试和体检四部分组成。
1.笔试
（1）复试笔试科目以2021年硕士研究生招生简章复试科目为依据，主要考核考生的专业基础理论和实验、实践技能知识，时间为40分钟，满分为100分。
（2）笔试采取网络远程方式进行，考生按“双机位模式”进行笔试。第一机位为可登陆我校“课程伴侣”，并带拍照、麦克风、音箱等功能的手机或计算机，用于考生登录我校“课程伴侣”，查看笔试试题和上传试题答卷。第二机位为可上网，并带摄像头、麦克风、音箱等功能的手机或计算机，用于采集考生笔试场所环境（考生侧后方）。要求摄像头从考生右侧后方成45°，拍摄考生侧面和第一机位，保证考生考试场景能清晰地被监考老师看到。
（3）考生须在规定时间内亲笔手写作答，考试结束后，将答卷以照片格式上传至招生学院（所）指定的笔试系统,上传的照片格式答卷分辨率以肉眼正常清晰可辨为准。未在规定时间内完成答卷提交，或未按规定的方式和格式提交答卷的，以及照片文字模糊不清的，视为无效答卷，由此造成的后果考生自负。
（4）同等学力考生复试前须加试两门与报考专业相关的本科主干课程。加试课成绩低于60分为不合格，不合格的不能参加复试。同等学力考生加试参照此方案笔试要求执行。
2.面试
（1）面试内容主要考核考生的思想品德、专业知识、实践（实验）能力、英语口语表达及应用能力、思维敏捷程度和心理素质等，满分为100分。每位考生面试时间为20分钟。
（2）面试形式采用网络远程方式。网络平台以“学信网远程面试系统”为主，首选备用平台为“钉钉”，其次为“腾讯会议”；“随机确定考生面试次序”。
（3）考生按“双机位模式”进行面试。 第一机位：用于采集考生与面试专家的音视频通讯及考生面试场所环境的正前方。要求摄像头对准考生本人，从正面拍摄。考生应保持坐姿端正，双手和头部完全呈现在面试专家可见画面中。第一机位须为带摄像头、麦克风的手机或计算机。第二机位:用于采集考生面试场所环境的侧后方。要求摄像头从考生右侧后方成45°，拍摄考生侧面和第一机位。第二机位须为带摄像头的手机或计算机。
3.心理测试在我校心理测评系统上进行，考生须在面试前在网上远程完成测试。
4.体检在考生所在地进行，体检项目至少包括常规体检、肝功、血常规、胸部拍片等项目。拟录取考生自拟录取名单公布之日起，15天内在当地二甲及以上医院体检，并于4月30日前（以当地邮戳时间为准）将体检表寄至动物医学院研究生办公室。
五、资格审查
所有参加复试考生必须复试前登录学信网远程复试系统确认考试信息并上传资格审查材料。通过远程复试平台，审核考生所提交的材料，审核通过者才可参加笔试、面试。
资格审查材料：
a、准考证；
b、有效身份证件；
c、毕业生须提供毕业证书复印件和电子注册备案表；应届生学籍认证在线报告；
d、思想政治考核表（原单位出据，加盖红章）；
e、考生自述（包括业务和科研能力、外语水平、研究计划）；
f、大学期间成绩单原件（加盖教务处红章）或档案中成绩单复印件（加盖档案单位红章）。
g、全国英语四六级证书或成绩单（国家成绩单未下发的考生,须持教务处加盖红章的成绩单）。
h、加盖第一志愿公章的调剂申请表原件（本校调剂）
调剂考生特别注意：
考生须在中国研究生招生信息网的“全国硕士生招生调剂服务系统”（网址：yz.chsi.com.cn/tjxx）填报调剂信息，复试合格的考生如被拟录取，必须在招生学院（系、所）办理待录取手续，否则将无法录取。
六、录取
参加复试的考生，学院依据初试和复试成绩按一定比例加权计算后的总成绩排序，由高到低依次确定拟录取名单。
（一）成绩计算
总成绩（满分500分）=初试成绩（满分500分）×60%+[复试笔试成绩（满分100分）×1.0+复试面试成绩（满分100分）×4.0]×40%。
（二）学院依据招生计划，由高到低依次确定拟录取名单（面试成绩低于60分或体检不合格者，不得录取），公示复试成绩和拟录取结果（不少于10个工作日），无异议后报研究生院。
七、其他要求
1.未按时参加复试的考生，视为自动放弃资格。
2.考生须保证“双机位”设备网络良好且能满足复试要求，复试场所室内明亮、安静、不逆光。复试全程只允许考生一人在复试场所，禁止他人出入,确保复试场所安静，无人为干扰。考生头发不可遮挡耳朵，不戴耳机与耳饰。
3.考生应按学院（所）要求提前安装好指定的网络远程复试软件，并完成软件和设备测试。复试前应确保设备电量充足，网络连接正常。复试时应关闭移动设备录屏、外放音乐、闹钟等可能影响复试的应用程序。如在复试过程中因不可抗拒因素导致的断网，考生须立即电话联系招生学院（所），说明情况，服从招生学院（所）安排。
4.复试是国家研究生招生考试的一部分，复试内容属于国家机密级。复试过程中严禁录音、录像和录屏，严禁将相关信息泄露或公布。复试考生须签订《远程复试诚信承诺书》（附件），承诺所提交材料真实和复试过程诚信。
5.对在复试过程中有违规行为的考生，一经查实，即按照《国家教育考试违规处理办法》《普通高等学校招生违规行为处理暂行办法》等规定严肃处理，取消录取资格，并记入《考生考试诚信档案》。
1．1转化医学的发展历程及现状
转化医学提倡以患者个体为中心，强调多学科交叉合作。转化医学作为一个新的领域，从发展走向成熟，需要多专业的交流与协作。在国外转化医学起步较早。2003年，美国国立卫生研究院（NIH）宣布了发展生物医学的长期计划，主要是培养具有不同专业背景、能在基础研究和临床工作间互相协作研究的团队。在NIH的推动下，2011年美国已有包括哈佛大学、耶鲁大学、斯坦福大学等名校在内的38个大学和医学院建立了进行转化研究的医学中心；2005年苏格兰政府与惠氏制药公司合作，建立了世界上第一个转化医学合作研究中心；2007年，欧盟实施的第7个框架研究计划，将预算中的60亿欧元用于转化医学研究方面。同时世界著名医学类核心期刊都为转化医学开辟了专栏，相继组建了ScienceTranslationalMedicine、JournalofTranslationalMedicine和TranslationalResearch等国际性专业杂志。相比较而言，中国在转化医学的研究和实践方面尚处于初级阶段，但发展势头日趋高涨。2007年上海交通大学成立了专门从事转化医学研究的“Med－X研究院”；2008年上海复旦大学依托其附属医院，率先成立了“出生缺陷研究中心”；2009年中南大学湘雅医院组建了“湘雅转化医学研究中心”，研究恶性肿瘤；2011年总医院附属八一脑科医院建立了国内第一个“神经科学转化医学中心”等。
2010年陈竺等在《科学》杂志上发表了一项研究成果，揭示了砷剂治疗急性早幼粒细胞性白血病（APL）的直接药物作用靶点为PML－RARa。这一研究成果对于推动该类型白血病的分子靶向治疗具有重要意义。砷剂成功治疗APL的研究成果成为我国转化医学研究的典范之一。
1．2转化医学的研究内容
转化医学是蛋白质组学和基因组学及生物信息学等生物医学发展的时代产物，其中心思想是以解决临床和健康问题为目标的实验室基础研究。转化研究是转化医学中最重要的内容之一，主要包括：①分子靶向治疗；②寻找适当生物分子标志物，提高临床辅助技术对临床工作的辅助效力；③药物二期临床实验。此外，还有基因诊断治疗、干细胞与再生医学、基因组药理学与个体化医学。其中最重要的环节是生物分子标志物的研究。
1．2．1基于分子分型的个体化治疗恶性肿瘤、心脑血管病及糖尿病等大多数慢性病是多病因疾病，其发病机制复杂、疾病异质性很大，因此，对这些疾病不能采用单一方法来进行诊治。着眼于患者的遗传、分子生物学特征和疾病基本特征进行分子分型，以此为基础实施个体化治疗是现代医学的目标。实施个体化的治疗，可以对治疗方法、药物、剂量进行优化，达到最好的治疗效果。
1．2．2生物分子标志物的鉴定与运用基于各种组学方法筛选出早期诊断疾病、预测疾病、判断药物治疗效果和评估患者预后的生物分子标志物及药物靶标，如DNA、miRNA、蛋白质及多肽、炎性因子及其通路等，有利于针对性地探索新的药物和治疗方法，提高药物筛选的成功率，缩短药物研究从实验走向临床应用阶段的时间。这些分子标志物的开发应用，对疾病的预防、诊断、治疗和预后有重要指导作用。
1．2．3药物临床实验及研发美国曾有报告称，研制一种新药，从选题到临床应用，平均要用14年的时间。近40年来，美国在恶性肿瘤的研究方面投入2000多亿美元，收获了156万篇研究论文，但肿瘤患者的生存率却没有得到显著改变。转化医学通过收集和分析分子生物学和生物信息学的海量数据，筛选出分子标志物和药物靶标，有效地降低在临床二期实验中药物靶点验证性研究的失败率，提高了基础研究的转化率和速度，为新药的临床应用和个体化治疗研究开辟出一条革命性的道路。
2转化医学与中医药学的基本理念一致
中医学是我国医学重要的组成部分，进入新世纪，中医学先进的理念与落后的技术手段之间的矛盾愈发突出，限制了中医理论的广泛传播及其诊疗技术的普及与应用。然而转化医学的出现为中医药的现代化研究提供了一个良好的发展机遇。转化医学的基本理念与中医药学从临床到基础理论再到临床的发展历程和“辨证论治”的个体化治疗思想不谋而合。
2．1转化医学与中医学的运行模式相同临床实践一直是中医学产生、发展、繁荣的根本原因，从临床积累的经验中抽提理论，再用理论指导临床实践的过程是中医药发展的经典模式。基于基础科学与临床应用出现严重脱节而产生的转化医学，其主要目的就是加强基础医学与临床医学之间的联系，将实验室的研究成果快速转化为临床应用，同时临床上出现的新问题可以指导基础研究方向。虽然传统中医学不进行实验室研究，但其“临床－理论－临床”这个螺旋上升的模式与转化医学的运行模式是一致的。
2．2转化医学与中医学的理念统一基础医学与临床医学存在着方法论方面的差异，主要体现在：临床医学以系统论为导向，基础医学则以简化论为基础。转化医学研究的对象是人，人的健康除与人体结构与功能相关外，还涉及自然环境和社会环境因素的作用，这决定了转化医学必然是一种复杂性研究系统。以转化医学为基础的系统生物学应用系统工程的概念、定量分析生物系统若干组成部分的动态相互作用，通过反复计算和／或数学建模及试验来研究复杂的生物系统。中医学是借助古代哲学、自然科学和临床实践发展起来的一种系统科学，其蕴含的“整体观”、“天人合一”等思想，与系统生物学的理念相统一。
2．3转化医学与中医学所倡导的治疗方式相同现代疾病谱逐渐向慢性病方向转变，其发病原因有多种且机制复杂，以往的单一治疗方法难以奏效。转化医学针对这一问题提出了基于患者遗传、分子生物学特征和分子分型的个体化治疗方案。中医学治病的基本原则———辨证论治，其本质就是个体化医学，体现了现代个体化医学的特征。
3中医药转化医学的特点
3．1以中医基础理论为指导原则中医基础理论是中医学的精髓，如果中医药的研究忽视中医学的特色，一味地追求细胞乃至分子层面的机制，或盲目地模仿化学药物研发模式，必然导致临床与科研的脱节，最后中医临床只能依据古代经典，缺乏令人信服的科学证据。因此，中医药转化医学研究必须以中医基础理论为指导，才能更好地服务于临床。
3．2以患者个体为中心中医学的整体观既强调人是一个有机整体，又强调人与自然、社会环境的密切相关，并建立“观其脉证，知犯何逆，随证治之”的辨证论治体系，也是一种人本主义的医学研究模式。
3．3基础研究与临床应用之间相互促进的连续过程中医药转化医学的实质是理论与实践的结合，是基础与临床的整合，具有“实验室－临床－实验室－临床”不断循环的运作特色。中医学也是在不断的临床实践中逐渐发展壮大。只有通过基础与临床之间不断地循环转化，才能促进中医医疗技术水平的整体提高。
4中医药转化医学的实施
中医药转化医学研究如何开展，如何顺应世界医学发展潮流，是当前中医药界必须思考的一个重要问题，其中中医药语言现代化和中医临床、中药创新药物研究的现代化是中医药转化医学实施的关键。
4．1建立中医学转化研究机构有条件的研究型或教研型中医药大学、研究型医院或国家中医临床研究基地可采用加盟或联合方式进行资源整合，建立以临床和基础及药物研发为主体，结合中医古籍研究的跨学科中医药转化研究中心，并吸引相关企业共同参与，以平台管理方式进行统一部署和联合攻关，构建起一条高效率的转化链。此外，也可以通过内部选拔或对外招聘的方式组建一个交叉学科研究室。此外，生物医学信息学为解决转化医学相关问题提供了一系列方法学，其研究者应该成为中医药转化医学研究团队的核心成员。
4．2加强转化医学推广教育和转化型人才培养长久以来，基础研究领域人才的提拔和奖励主要依据研究者的论文，而不是其带来了多大的临床效果。而临床医生则缺少时间去阅读相关文献，这在相当程度上限制了基础研究与临床之间的交流。要解决这个问题，就必须加强基础研究者和临床医生之间的交流、合作。当前中医药基础研究的人才队伍建设比较薄弱，整体科研水平较低，知识结构也较单一，学科渗透和交叉能力相对欠缺，对世界医学最新进展和前沿动态信息了解滞后，创新能力不足。因此，需要加强对既懂中医又具有现代西医科学实验技能，并有转化医学理念的复合型人才的培养。国内中医药大学与开设的中医学国家理科基地专业是一个很好的探索。
4．3加大扶持力度与政策引导长期以来，高昂的经费支出是造成转化医学研究发展十分缓慢的核心问题，原因在于科研成果从实验室走向临床的转化过程成本高，前期的巨大投入使许多企业和医疗机构失去投资的动力。其次，中医药转化研究的过程涉及多学科、多部门的利益协调，很容易在关键环节产生脱节现象。因此，政府除了要在政策上加以倾斜和扶持，引导大型企业赞助中医药转化研究外，还应制定有效的体制、规定，将各学科、各部门紧密地联系在一起，形成一个团结高效的研究团队。
4．4紧密结合中医特色和优势，展开中医药转化研究中医药转化研究是中医药现代化研究的需求，有助于更好地促进和加快中医药向更深层次水平迈进。中医药转化研究的开展应紧密结合中医特色和优势。主要包括：①重视中医经典的指导作用：2006年颁布的《中医药创新发展规划纲要》，明确了中医药发展的“继承、创新、现代化、国际化”四项基本任务，强调在“继承”基础上加以丰富发展、充实完善，才会有中医的创新。②推动经典复方的方剂组学研究：方剂组学以中医方剂作为研究内容，以提取物的质量控制为前提，以临床疗效为基础，然后应用基因组学和蛋白质组学明确其作用靶点、研究其调控机制。③协作进行病证结合的转化医学研究：陈可冀院士认为，西医诊断与中医辨证的病证结合充分体现了中西医两种医学的优势互补，是中西医结合的最佳模式。④注重结合中医临床：进行中医药转化研究时，必须充分体现中医整体观及辨证论治的特色，针对证候的分类、治则治法、方药选用、证候转变、疗效评价等关键环节，应用各种组学技术，筛选出不同层面的与证候发生发展、辨证分类、治法方药和疗效评价相关联的敏感性生物标志物群，并给予其在脏腑及四诊信息中的定位。
5结语
【文献标识码】A
【文章编号】1814-8824(2008)-11-0074-03
1 中西医药学结合研究历史的简单回顾，足以发人深思
自1840年中国田门被西方列强打开，西方的医药学传入中国后我国才有中医药学和西医药之称谓。其在防治疾病中，很快显示了优势作用方面，尤其弥补了中医药学的一些不足之处。故很快传播开采，并成为中国的一种重要的医药学理论体系。面对此况，中国的中医药学工作者，陆续对西药学进行研究，力求吸收之，以丰富和发展中医药学，提高防治疾病的能力和水平，逐渐形成和出现清朝末年和民国初年的中西汇通派医药学，此即为中西医药学结合的开始，并涌现出一批代表性人物。此段时间，有一批中西汇通类医药学著作问世；张锡纯的名著《医学衷中参西录》，尤涉及药物学内容较多，至今被人们瞩目。此阶段吸收西医药的研究工作特点为中医药学工作者的自主行动。
新中国的建立，标志着中西医药学结合研究工作进入一个新阶段，突出特点为政府大力提倡，明确提出“中西医结合”。这样，就使中西医药学结合研究工作，由中医药学工作者的自主行动，进而成为有组织的联合行动。如此优越的环境和形式，对中西医药学结合研究是极为有利的。然而进展如何呢?“中西医结合”的明确提出，若从1958年算起，至今已40年，尽管中西医结合早已被视作中国卫生界三支力量之一，但从学术角度讲，小西医结合后的医学，其学科范畴和内函，却尚处争议中。科学史表明，一门学科的形成或建立，需如此长时者，实属少见。此况，内中必有原因，发人深思。
2 中西医学结合研究与中西药学结合研究应相辅相成，终达中西医药学结合
作为一个医药学理论体系，由其医学与药学两大部分组成。二者关系，即有区别，又有关联。区别在于各有侧重，关联在于互为依存，相互促进。决不是彼此能够包含或替代的关系。同时，医学以人体为主要研究对象，药学以药物为主要研究对象。作为中西医药学结合，其中西医学结合和中西药学结合的关系，亦然。多年来，仅提中西医学结合，并着力从事研究；不提中西药学结合，漠视中西药学结合研究。似乎中西医学结合研究就包含了中西药学结合研究。如此，则从认识上和行动中，呈现着根本性的大偏差，故中西医药学结合研究，难于有较快和较大的进展。
再从中西医学本身来看，结合后的医学，为达防治疾病的目的，将使用何样的药物呢?使用现有状况的中药或西药，恐怕均难适用，只能使用中西药学结合的药物。鉴于以往漠视中西药学结合研究，自然难有相应药物可供选用。无可供选用药物的中西医学结合后的医学，难于谈到其真正的存在或称达到。可见，若仅有中西医学结合，而无中西药学结合，客观讲，中西医学结合的研究工作，难于深入和真正结合。只有视中西医学结合与中西药学结合为相辅相成关系，并作大体同步化的研究，在中西医药学结合的实现过程，才能体现和达到中西医药学结合的实现过程，才能体现和达到中西医学结合。
3 中西医药学结合及其研究工作，应以中医药学理论为基础
中西医药学结合的目的，就实质讲，乃为使中医药学和西医药学二者的优势得以保留和结合，劣势得以消除或避免，进而形成新型的医药学。客观现状是：中西药学的优势在宏观，劣势在微观；西医药学的优势在微观，劣势在宏观。认识论表明宏观与微观的关系是：宏观包括微观并统帅微观，以此认识客观事物，呈现整体的准确性和局部的不精确性；微观用来阐述宏观，决不能完全包括宏观，更不能统帅宏观，以此认识客观事物，呈现局部的精确性和易致整体的不准确性。现状的中西医学的实践，正是如此。就药物使用来看，中药准确性强―安全有效而不伤或少伤机体，但精确性差―质量控制不严和对局部病性针对性差；西药精确性强―质量控制严格和对局部病灶针对性强，但准确性差―有时易致不良反应而伤害机体，此为其弊端。正是中医药学的客观优势而能容纳西医药学内容，中西医药学结合，应以中医药学理论为基础。
纵观以往的中西医药学结合的研究工作，不仅如前述仅强调中西医学结合并付诸研究而漠视中西药学结合，更在结合研究工作中，亦是以西医药学理论为基础的。突出表现在以下几方面：(1)西医药学概念的疾病：作中医药学的证型分类研究，如高血压病，可有阴虚阳亢型、痰浊内阻型等；(2)中医药学的某类药物，可用来治疗西医药学的何种疾病，如活血化瘀作用中药，可用来治疗肿瘤.微循环障碍等;(3)中药使用的目的，多在于如何增强西药作用或减弱西药的不良反应；(4)研究中药的目的，在于吸收中药为西药或称由中药获得新西药。如上可概括为一句话：如何让中医药学内容为西医药学服务，或称如何将中医药学纳入西医药学。正是这种理论基础方面的大偏差；西医药学结合是难于取得较大进展，亦是难于实现的。
中西医药学结合，如何才能体现以中医药学理论为基础呢?为此，突出应作如下几方而研究：(1)中医药学概念的疾病，到底包括西医药学概念的哪些疾病；(2)西医药学的某类药物，可用来治疗中医药学的何种疾病，例如抑菌消炎药，可用来治疗实热证还是虚寒证等；(3)如何用西药增强中药的作用或减弱中药的毒性：(4)研究西药，将其吸收为中药等。如上亦可概括为一句话：如何让西医药学内容为中医药学服务，或称如何将西医药学纳人中医药学。如此才能使中西医药学结合研究取得较大进展，终将实现中西医药学的结合。尽管如上研究工作尚少，但理论上思考，确应如此。同时，亦有部分实践表明，确能如此。仅以将西药吸收为中药而言，将西药研究成中药后，不仅仍保留其微观优势。又能获中医药学的宏观优势。从而达到宏观与微观的辨证结合地使用，即准确而精确地使用，更好地发挥治疗作用。
西药中药化――中西医药学结合研究的突破点中医药学的现代科学化，是中西医药学结合的前提。中医药学理论为中西医药学结合的基础，但处于微现劣势的现状，尚不能与微观优势的西医药学相结合。只有获得微观表述之后，才能与西医药学具有共同的内容表述，实现结合。而微观表述，实质即为其现代科学表述，故中医药学的现代科学化，乃为中西医药学结合的前提。换言之，中医药学的现代和科学化，则意味着中西医药学结合的到来。
中医药学的现代科学化，包括中药学和中医学的现代科学化。那么，二者谁先实现现代科学化更方便呢?这要从研究对象、研究现状及研究方法来进行分析。首先，医学以人体为主要研究对象，药学以药物为主要对象，而人体组成及功能状况，诚比药物的组成和功能状况复杂。这就从根本上决定着中西药学结合更容易。再从人体和药物的现代科学化程度来看，仅就药物的组成而言，现已达现代科学的分子乃至量子水平，而人体组成的了解，却远远没有达到如此程度，起码从程度上即普遍性方面讲，确实如此。最后，从研究方法看，药物为物，其现代科学化的研究方法，由于人选择的随意性大，即可用多种方法进行研究，如物质基础的研究，可进行提取，分离的处理，甚至可烧成灰进行研究；生物活性的研究，在很多情况下，可由动物实验来进行，而动物实验，则可对动物进行解剖乃至处死的处理。然而，对人体进行现代科学研究，达到现代科学的微观阐述，在很多情况下，却不如对药物研究方便。总之，中药学现代科学化较中医学现代科学化，易于达到。故中药学现代科学化研究先行，带动和促进中医学的现代科学化，以达中医药学的现代科学化。中药学现代科学化，中心内容是获得现代科学化中药，这就需要先明确现代科学化中药的标准。笔者认为，现代科学化中药应具备两大方面内容：(1)宏观内容，即仍具中药基本内容可按中医药学理论使用;(2)微观内容，即中药基本内容得以现代科学表述，包括物质基础和生物活性两方面。一种药物，具备如上两大方面内容，则可视为现代科学化中药。以上两大方面，缺一不可，如缺宏观内容，则不为中药了，难称现代科学化中药；如缺微观内容，则仍为现有中药而非现代科学化中药。
4 中药现代科学化的捷径――西药中药化
关键词:血清蛋白质组学;中医证本质;证候标志物
中图分类号:R2-03 文献标识码:A 文章编号:1673-7717(2010)01-0088-03
Discussion on the Serum Proteomics Applied to Research Essence of TCM Syndromes
ZHAO Haiyan 1,GUO Yong2
(1.Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053,Zhejiang,China;
2.The First Clinical Medicin School of Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou 310053,Zhejiang,China)
Abstract:Differential markers of TCM syndromes presented as specific proteins in TCM syndromes. Serum proteomics was one important part of systems biology. In this paper,by analyzing the study of TCM syndromes with the technology of serum proteomics, we proposed our own viewpoints as follows: the markers and the essence of TCM syndromes could be found out by studying in animal model of TCM, TCM clinical syndromes, and, application of prescription-syndrome.
Key words:serum proteomics, essence of TCM syndrome, markers of TCM syndromes
中医临床的精髓是辨证论治与整体观,以辨证论治为治疗的指导核心,是论治的前提与基础;治疗讲究“同病异治”和“异病同治”,处方用药随证而定,随证而变。中医的不同证候间表象差异的本质是蛋白质。蛋白质组学是系统生物学的重要组成部分,它从整体的角度分析细胞内动态变化的蛋白质组成成分、表达水平与修饰状态,了解蛋白质之间相互作用与联系,揭示蛋白质功能与细胞生命活动规律[1]。蛋白质组是一个在空间和时间上动态变化着的整体[2],这和中医的整体观之间存在着相似性,从蛋白质组学角度研究中医证本质已成为中医走向现代化的一个重要途径。
1 背景
证候是对疾病处于一定阶段的病因、病位、病变性质,以及邪正双方力量对比各方面情况病理概括。中医证本质的含义是指证发生发展的物质基础,这些物质决定着证的发生发展之动态变化过程,是在证的发生发展过程中产生的特殊物质群[3]。
证本质的研究始于上世纪50年代,随着研究的广泛深入开展,发现某些检测指标可重复性差,与临床证候相关性并不明显,对中医临床辨证的价值十分有限[4]。因此有许多学者认识到从探讨整体功能关系失调方面入手可能是中医证本质研究的最佳途径[5]。蛋白质组学的兴起,为这种整体性研究提供了有力的检测手段。
蛋白质组的概念最早是由澳大利亚Macquarie大学的Wilkins等[6]于1994年提出,指“一个细胞或一个组织基因组所表达的全部蛋白质”。蛋白质组学则是在蛋白质组整体水平进行研究的一门新兴学科,主要研究策略有表达蛋白质组学和功能蛋白质组学。由于功能蛋白质组学是将疾病的整个过程视为一个黑箱而只着眼于与疾病相关的差异表达蛋白质[7-8],在临床上得到广泛应用。
血清蛋白质组学是指研究选定的目标血清中表达的全部蛋白质,在建立正常蛋白质表达图谱(protein expression map,PEM)的基础上,寻找其差异蛋白质点,鉴定疾病相关蛋白质,进而研究其结构和功能,为研究重大疾病病理生理学机制、早期诊断的特异性标志物、药物作用靶点等开辟新的途径[9]。
血清蛋白质具有独特的性质(蛋白质组成、结构形式极端复杂而且蛋白丰度差异巨大)、重要的生理生化功能及研究意义[10],被国际人类蛋白质组织(Human Proteome Organization, HUPO)列为首批实施的重大国际合作研究项目[11]。目前,Chan等[12]一共识别了1444种蛋白质,并构建了共用的人类血清蛋白质数据库。
血清蛋白质组学的研究流程大体可分为分离、鉴定、分析三步。质谱技术是蛋白质鉴定的核心技术。二维凝胶电泳结合质谱技术(22DE2MS) 是目前疾病相关血清蛋白质组研究中运用最为广泛的技术[13]。经过质谱分离后,对获得的差异蛋白质组可以利用数据库检索对蛋白质进行鉴定及功能分析,利用生物信息学的方法进行比较研究。
中医证本质研究最终目的是寻找证候标志物,它的升高或减少能显著地提示相应证候的出现或消失。疾病标志物常常是在疾病过程中由机体分泌到血浆/血清中的低丰度蛋白质[14]。因此在中医临床辨证的前提下,可以借鉴血清蛋白质组学对疾病标志物的研究来找到证候标志物。
2 血清蛋白质组学在中医证候研究中的应用
中医证候动物模型的应用方面,中医证候模型是利用动物的某些生物体表特征来模拟人体证候特征的一类生物表征模型,以此来诠释中医理论和评价中药疗效[15]。许多专家在此方面做了很多探索。钟小兰等[16]以束缚制动法制备肝郁证大鼠模型,发现具有明显表达差异的蛋白质6个。颜永平等[17]分析高血压肝阳上亢证大鼠与正常大鼠下丘脑的差异蛋白质,有18个蛋白点的表达随着造模后时间的延长有向正常水平恢复的趋势。苗兰等[18]发现气滞血瘀证大鼠血清与正常大鼠相比有1个蛋白质下调,5个蛋白质上调,1个蛋白表达缺失,推测气滞血瘀证的形成可能与这些差异蛋白点相关。
中医临床证候方面,在以病统证的角度研究中,熊新贵等[19]研究发现其中的5个蛋白质可能与高血压脑出血肝阳化风证发病过程相关;在异病同证的方面,谭秦湘等[20]选取抑郁症、经前期综合征、更年期综合征,按照辨证标准诊断为肝郁证患者各100例进行研究,发现12个差异蛋白质点,其中spot73仅在正常组中表达,spot71仅在3个肝郁证疾病组中表达,另外的10个点均在3个肝郁组表达上调;单证方面,刘希成[21]等应用蛋白质组学技术比较了老年肾阳虚患者与健康对照组的血清样本,发现有10种在肾阳虚血清异表达,有6种在健康对照组异表达;在方证结合的应用方面,可将某一证候动物模型在相应方剂治疗下机体所发生的物质变化视为该证候的物质基础,因为正是该方剂在机体内发挥其药理作用过程中纠正这些物质后,才使该证候的临床症状得以缓解甚至完全消失[22]。苗兰等[23]用复合因素制作大鼠气滞血瘀证模型,发现模型组大鼠血清与正常组相比有1个蛋白质下调,5个蛋白质上调,1个蛋白表达缺失,而给予血府逐瘀汤后可改善这些改变及缺失的蛋白质的表达水平。
3 展望
在血清蛋白质组学研究中医证本质的过程中,笔者认为要注意以下几方面。
3.1 中医证候元素方面
证候元素是构成是中医证候的最基本单位,体现了不同证候的最基本证候组成,亦称单证或基本证候。复合证候是由证候元素组成的复合体。规范和统一证候的诊断标准首先要从中医证候元素入手研究血清蛋白质组学,能较容易产生证型血清蛋白质组学的标准化、定量化,再扩展到复合证候的标志物研究。
3.2 病证结合方面
要提倡病证结合,才能提高证候研究的客观化、标准化和规范化。“同病异治”、“异病同治”是中医的重要观念,因此要研究不同疾病、相同证候的血清蛋白质组的共性和差异,也要研究相同疾病,不同证候的血清蛋白质组的共性和差异。
3.3 方证相应方面
应着力开展得到公认的一方一证尤其是名方一证的研究。方证相应是中医辨证论治的核心环节,是指一个方剂的功效与方剂内的药味及配伍关系与其所对应的“证”之间存在高度的统一性和针对性。因此,可对方剂干预下的证候前后差异的蛋白质进行研究,以提取证候标志物。
3.4 建立数据库方面
广泛建立健康人群与中医证候动物模型血清蛋白质组学数据库。但同时动物模型存在难以避免的缺点[24],而血清蛋白质组学的研究对象取材于人的血液,易于搜集,可建立健康人群中医证候血清蛋白质组学数据库,创立有效的资源共享机制。
3.5 系统生物学的整合
系统生物学的技术平台为组学,即基因组学、转录组学、蛋白质组学、代谢组学、相互作用组学、表型组学和计算机生物学等[25]。这与中医学整体观念极其统一,正如陈竺院士指出[26]:“系统生物学是21世纪医学和生物学发展的核心驱动力……中国传统医学的深厚积淀,为发展系统生物学,并将其与现代医学紧密结合提供了十分有利的客观条件。”
在中医证候的研究上,整合系统生物学的方法,应用更有效的分析方法和统计软件,密切结合中医学的特点,建立广泛的血清蛋白质组学中医证候数据库,有可能给中医证本质的研究带来新的突破。
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【摘要】实验研究是现代医学的常用方法和手段，动物模型中医药研究中发挥着巨大作用。复制中医动物模型的难度大，造模方法多样，有待进一步研究。我们从中医药研究应用动物模型意义、应用价值、复制模型的要求及存在的问题等方面谈几点看法。
【关键词】中医药；实验研究；动物模型；应用价值；
1 中医药实验研究中开展动物实验的意义和动物模型的应用价值
1.1 提供发病率低、潜伏期长和病程长的疾病材料 临床上不易见到的疾病可用动物模型随时复制出来，如遗传性疾病、免疫性疾病等在临床上发病率较低，研究人员可以有意识地提高在动物种群中的发病率，随时进行研究；肿瘤、呼吸道疾病、心血管疾病等，发生发展缓慢、潜伏期和病程较长，在人体上很难进行长期观察，而许多动物生命周期较短，在实验室可以进行长期实验和研究。
1.2 严格控制实验条件，比较可靠地证实治疗效果 人类疾病的转归除药物治疗外还受着多种因素的影响，如：气候环境、精神情绪、饮食劳逸等，这些因素在一定条件下会导致疾病好转或恶化。临床上还可见到由于患者产生强烈的治愈欲求，对接受治疗产生良好的疗效愿望，心理上产生一种有效偏见，从而出现治疗有效的反应，即所谓“假阳性”现象；反之，临床上也常见到患者在治疗中因饮食起居不慎或受到精神刺激等因素的影响，导致疾病恶化。这些都会造成医生在治疗疾病中产生错误的疗效判断。所以要比较可靠地评论药物治疗效果就需要严格控制，而对于动物来说则较容易严格控制。
1.3 有利于样品收集和简化实验操作，缩短研究周期，加快中医发展 动物模型作为人类疾病的“缩影”或“复制品”，便于研究者按实验目的与需要随时采集各种样品，或处死动物收集样品，以了解疾病的全过程，这在临床上是根本办不到的。实验动物的小型化发展趋势也有利于动物饲养管理和简化实验操作。有些问题单凭临床经验积累需要花费很长时间才能得到解决，或者虽花费很长时间，问题仍有得不到解决，而通过动物实验有些问题就可以得到迅速解决。
2 复制中医动物模型的基本要求
2.1 符合中医的理论特点 中医学具有完整独特的理论体系，在实验动物模型制作方面，必须以中医学的基本理论为指导，采用气温变化、饮食失宜、过服药物及手术结扎等造型法，所做出的动物模型表现的“ 证” 基本符合中医临床实际，能较好地反映中医病因病机理论的重点。
2.2 重复性好，较好再现所研究人类疾病 理想的动物模型应是规范化的，能够准确地重复再现。建立疾病动物模型的最终目的是为了研究探求防治人类疾病的规律，无论复制何种病理动物模型，其表现和体证与中医证的临床表现特征大体一致。因此，对疾病动物模型的评估主要取决于模型与人类疾病的相似或可比程度。一个理想的疾病动物模型应能再现所要研究的人类疾病，即动物疾病表现与人类疾病相似。
2.3 简单易行，造模时间较短 复制的动物模型应力求可靠地反映人类疾病，即可特异性地反映某种疾病或某种功能、代谢与结构变化。动物模型应具备某种疾病的主要症状和体征，还应考虑到今后的临床应用和便于控制其疾病发展，以利于进行研究。故要求模型复制方法简单易行，实验设计力求以急性实验为主，缩短造模时间，一般应选小动物复制人类疾病模型。
2.4 观察指标具有直观性与客观性 动物模型的观测指标力求客观性、直观性及重复性，既能如实反映实验所提问题的特征变化，又便于操作。如把小鼠的体温、心率、活动度、精神表现、眼球的凹凸、耳廓色泽、游泳时间作为“阳证”、“阴证”的观测指标，两者呈鲜明的对比，形象地显示了“阳”与“阴”的特征。
3 中医动物模型应用中存在的问题
3.1 动物模型很难用“四诊”方法加以判别 在病人身上通过望、闻、问、切可以得到完整的四诊资料，做出较为准确的诊断辨证，但是对复制动物模型要想得到详尽的四诊资料困难较大，动物既无主诉，又无法通过脉诊、舌诊来给动物辨证。例如阳虚、气虚和寒证的造模动物都可出现进食减少、大便溏、耐寒力低等现象，因此单凭这些症状、体征较难判断此模型属何证。应加强对中医“证”动物模型本质的研究，制定出动物模型的各项定量、半定量客观指标。
3.2 造模因素选择缺少标准 目前有关造模的因素很多，究竟哪种造模因素比较符合临床实际，能造出较为典型的中医证型，目前还有待于进一步研究。
3.3 照搬西医动物模型 未能以中医理论为依据，单纯把西医疾病模型当成中医证的模型，中医的证候不完全等同于西医疾病的症状，临床上常可以看到同一种西医疾病，中医可能诊断为多种证候，而对不同的西医疾病，中医也可能诊治方法完全相同，所以要研究中医、发展中医，不能完全照搬西医动物模型，应根据中医特点，复制体现中医药特色的动物模型，但这并不排除运用西医现代科学技术对中医药进行深人细致的研究。
随着现代医学的发展，实验研究越来越受到人们的重视。经过近几十年的不懈努力，我国目前已建立中医动物模型150余种，这仅仅是初步的探索，还有待于进一步研究。中医药只有通过大量实验研究，借用现代先进技术和方法，才能使中医药逐渐发扬光大，逐步走向世界，为人类健康事业做出更大贡献。
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一个学科的形成和发展，首先是这个学科研究方法的形成和发展。中药的药理研究自20年代初，陈克恢研究麻黄［1］以来，研究方法逐步完善，研究领域日益扩大，研究水平不断提高，形成了自己的学科体系，这就是中药药理学。其中一个重要标志，就是中药药理动物模型的研究和应用。中药药理动物模型是中药药理学独具一格的研究方法，它使中药药理学从中药和药理学脱胎而出，形成了独特的学科体系。基于此，有必要对中药药理动物模型进行整理、探索，为进一步指导中药药理学发展、丰富实验动物学的内容起作用。故本文试图较系统地论述中药药理动物模型的概念、作用，分析中药药理动物模型的现状，探索中药药理动物模型的发展方向。
1 中药药理动物模型的概念
中药药理动物模型是指在中药药理研究中建立的具有人类病证表现的动物实验对象和相关材料，它包括人类疾病动物模型、人类证候动物模型、人类病证动物模型三部分的内容，它既是实验动物学的范畴，又是中药药理实验方法学的核心。
2 中药药理动物模型的作用
2.1 中药药理动物模型是中药药理学的基石 中药药理学是以中医药理论为指导，用现代科学方法，研究中药对机体的作用和作用机理、以及体内过程，从而阐明其防治疾病原理的科学。它包括中药药性药理、中药实验药理、中药临床药理三部分的内容。而中药药理动物模型在中药药性药理、中药实验药理、中药临床药理的研究中均发挥着重要作用。
2.1.1 中药药理动物模型是中药药性药理的研究手段 中药药性药理包括四气、五味、归经、升降浮沉、补泻、毒性等方面的药理研究，而中药药理动物模型是中药药性药理的研究手段。如梁氏用温热药建立热证动物模型，再用寒性中药龙胆草、黄连、黄柏、银花、连翘、石膏治疗，观察中药寒凉药性的药理学基础；用寒凉药建立寒证动物模型，再用热性中药附子、干姜、肉桂、党参、黄芪、白术治疗，观察中药温热药性的药理学基础［2］。又贲氏应用血虚肝脾损伤动物模型，研究中药当归、熟地、川芎、白芍的归经药理［3］。
2.1.2 中药药理动物模型是中药实验药理的研究基础 中药实验药理是中药药理的研究核心，中药实验药理主要是应用实验动物、器官、组织、细胞研究中药功效的药理作用，揭示中药功效的现代内涵。中药功效是中医辨证论治体系在药学中的体现，对中药功效的揭示，必须以中医证的研究为基础；而中药药理证候动物模型是中医证在实验研究中的载体，故中药药理动物模型是中药实验药理的研究基础。如研究补气药人参、白术、茯苓、甘草组成的四君子汤对小肠推进运动的影响，结果四君子汤能抑制正常动物离体器官小肠的运动［4］，对正常在体动物小肠推进运动无明显影响［5］；但能增加脾虚动物小肠推进运动［5，6］后者与临床实际相符，与补气药健脾益气功效相符，是健脾益气功效在肠功能中的体现。这个例子说明，建立和使用中药药理动物模型，才能真正揭示中药的功效，丰富中药实验药理的内容。
2.1.3 中药药理动物模型是中药临床药理的桥梁 中药临床药理学研究方兴未艾，但学科有待建立。由于正常动物的结构形态、功能代谢与人类的病理状态相差甚远，故必须应用中药药理动物模型来连接中药实验药理与临床药理的研究，为中药临床药理的有效性和安全性评价奠定基础。
2.2 中药药理动物模型是中医药现代化的突破口 中医药的学术发展相当缓慢，其原因就是缺乏实验研究体系，缺乏与现代自然科学的沟通与融合，忽视基础理论的研究，未建立起自己的科研规范、指标体系和方法论，致使其理论研究对实践缺乏推动作用，与世界医学缺乏共同语言。而中药药理动物模型就是在中医药理论指导下，应用现代科学方法，以实验动物、器官、组织、细胞为研究对象，建立的具有人类病证表现的实验模型。弥补了中医药研究的不足，成为中医药理论与现代科学的中介部分。故中药药理动物模型的研究与发展，必将促进中医药的现代化。
2.3 中药药理动物模型是实验动物学发展的新领域 中医以系统-综合医学模式为特征，坚持功能主义的原则和 视角来研究人体。在中医药理论指导下对中药药理动物模型生物学特征的认识，将弥补现代以形态结构为原则进行研究的不足，建立新的指标体系，丰富实验动物生理学、实验动物医学和比较医学的内容。而中药药理动物模型的研制与增加，又将丰富实验动物病理学和动物实验技术的内容，对实验动物疾病的病理过程和实验操作技术进行重新认识。故中药药理动物模型的建立与深入研究，将成为实验动物学发展的新领域。
2.4 中药药理动物模型是中药新药有效性评价的工具 中药新药有效性评价，可用正常动物观察药物对生理状态下各种生理、生化、形态等方面的影响，以判断新药的疗效。但生理状态与病理状态有本质的区别，对药物的反应常有质的不同。有些药物对正常动物无药效作用，而对中药药理动物模型则有治疗作用，如清热药对发热动物有降温作用，而对正常动物体温则无影响。因此，仅用正常动物不能全面准确地评价新药有效性，必须选用中药药理动物模型，观察新药对病理状态的影响，才能更准确地评价其有效性。故中药药理动物模型是中药新药有效性评价的工具。
3 中药药理动物模型的现状
中药药理动物模型自唐·陈藏器《本草拾遗》首次记载用精米喂猫、犬造成脚气病模型以来，中药药理动物模型已初具规模，分为中药药理疾病动物模型、中药药理证候动物模型、中药药理病证动物模型三类。
3.1 中药药理疾病动物模型 中药药理疾病动物模型分为诱发性疾病动物模型和自发性疾病动物模型。诱发性疾病动物模型是研究者通过使用物理、化学、生物等因素作用于动物，造成动物组织、器官或全身一定的损害，出现某些人类疾病的功能、代谢或形态结构方面的改变。如发热动物模型、四氧嘧啶糖尿病(消渴)动物模型、肥胖症动物模型等。自发性疾病动物模型是指实验动物未经任何有意识的人工处理，在自然情况下，发生染色体畸变、基因突变，并通过定向培育而保留下来的疾病模型，如无胸腺裸鼠、重症肌无力小鼠、青光眼兔、高血压大鼠、肥胖症小鼠等。
3.2 中药药理证候动物模型 中药药理证候动物模型，自60年代邝安建立第一个类“阳虚”动物模型［7］以来，已用200多种方法，复制建立了肾虚证、脾虚证、肺虚证、心虚证、血瘀证、血虚证、肝郁证、寒证、热证、痹证、里实证、厥脱证、温阻证、温病等证候动物模型。中药药理证候动物模型是指在中医药理论指导下，在动物身上复制的中医药证候，是中药药理动物模型独具一格的有别于人类疾病动物模型的方法。而中药药理证候动物模型的研究还远远不能满足中药药理学发展的需要，急待增加研究投入，提高研究水平。
3.3 中药药理病证动物模型 中药药理病证动物模型包括两方面的内容。一是用现代医学的人类疾病动物模型与中医证候动物模型嫁接，建立病证结合动物模型。如高脂性疾病血瘀证动物模型、失血性贫血血虚证动物模型、感染性休克厥脱证动物模型等。把现代医学的辨病论治与中医学的辨证论治结合起来，中西汇通。另一种是在中医药病证理论指导下，建立中医病证结合动物模型［8］。这方面的工作急待开展，以深化中药药理模型的研究，纠正证候动物模型难于深化、不好应用的不足。
4 中药药理动物模型的发展方向
中药药理动物模型在今后一个时期内，主要是应总结分析中药药理动物模型的理论，加大中药药理证候动物模型和中药药理病证动物模型的研制，建立中药药理动物模型的科研规范、研究体系，为中药新药研制和开发、中药药理研究、中医药学术发展、中西医合流提供坚实的实验基础，也将为我国实验动物学的发展增添新的内容。
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