生物技术通讯杂志 省级期刊

人MEPE/OF45基因的克隆及序列分析

作者：张鸿声; 高宁; 绳纪坡; 于芳; 张宏达; 张勇; 胡宝成 刊期：2008年第06期

目的：克隆人MEPE/OF45全长基因,为进一步研究MEPE/OF45在DNA损伤应答中的作用及特异的信号通路奠定基础。方法：选取人宫颈癌细胞HeLa为靶细胞,从中提取总RNA,设计扩增人MEPE/OF45基因片段的特异引物,进行RT-PCR分析;用蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮（CHX）对细胞进行处理,观察处理前后MEPE/OF45基因的表达情况。结果：在经CHX处理的HeLa细胞中扩...

第21版全球生物产业研究报告中文版出版发行

刊期：2008年第06期

FHL2通过相互作用抑制分化抑制蛋白家族成员的转录抑制活性

作者：韩为东; 赵亚力; 伍志强; 司艺玲; 杨洁; 田丽媛; 孟元光 刊期：2008年第06期

目的：探讨FHL2与Id（分化抑制蛋白）家族蛋白之间的相互作用及FHL2对Id蛋白功能的调控效应。方法：用GST-pulldown与免疫共沉淀（CoIP）方法检测FHL2与Id家族蛋白成员之间在体内外的相互作用;用共转染与报告基因驱动的萤光素酶方法检测FHL2对Id蛋白介导转录抑制效应的调控作用。结果：FHL2与Id家族的4个蛋白均存在直接的相互作用关系,表位分析...

分化抑制蛋白N端保守域结构预测及其基因突变体的构建

作者：姜凡; 伍志强; 赵亚力; 杨洁; 尹肖云; 韩为东 刊期：2008年第06期

目的：对分化抑制蛋白（Id）家族的N端序列进行保守性结构分析,并构建其基因突变体。方法：用ClustalX（1.81）软件对Id蛋白家族中的3个成员（Id1～Id3）的N端序列进行同源性分析,用Swiss-PdbViewer3.7（SP5）软件模拟高同源区域中关键性氨基酸突变前后的三维结构模型;用PCR方法将突变点引入Id序列,再通过重叠PCR方法扩增出全长编码序列,酶切与...

脆性组氨酸三联体与复制蛋白A相互作用关键氨基酸残基的鉴定

作者：张勇; 于芳; 张宏达; 绳纪坡; 高宁; 张鸿声; 胡宝成 刊期：2008年第06期

目的：研究脆性组氨酸三联体（Fhit）对ATR/CHK1通路的影响,在确定Fhit与复制蛋白A（RPA）存在相互作用的基础上鉴定Fhit与RPA相互作用的关键氨基酸残基,为进一步研究Fhit特异的信号通路奠定基础。方法：构建一系列Fhit缺失突变体基因Fhit1～Fhit11及6种Fhit点突变体基因,将这些基因插入含GST基因的原核表达载体中,在大肠杆菌中表达并纯化GST-Fh...

白细胞介素-1通过JNK信号通路调控Schlafen2基因的表达

作者：胡迎春; 方玲; 周乔丹; 陈忠民; 李刚; 吴德昌; 霍艳英 刊期：2008年第06期

目的：在多效生长因子（Ptn）基因稳定沉默的小鼠胚胎成纤维细胞Ptn-siRNA B/MEF241中,研究白细胞介素-1（IL-1）调控Schlafen2（Slfn2）基因表达的机制。方法：应用Northernblot检测Ptn沉默细胞Ptn-siRNAB/MEF241处于不同生长密度时Slfn2基因的表达变化,以确定Ptn沉默细胞中Slfn2基因的表达是否受到某种分泌性细胞因子的调控;用不同浓度的IL-1α...

利用RNA干扰抑制p21WAF1/CIP1基因的表达及周期阻滞效应

作者：王朝云; 丁丽华; 叶棋浓 刊期：2008年第06期

目的：构建p21WAF1/CIP1基因小干扰RNA（siRNA）的真核表达载体,观察其对p21WAF1/CIP1表达的影响和细胞周期的变化。方法：合成了针对p21WAF1/CIP1基因的siRNA,将其克隆到siRNA表达载体pSliencer2.1-U6neo上,将重组质粒和带FLAG标签的p21WAF1/CIP1共转染293T人胚肾细胞,通过Westernblot检验RNA干扰（RNAi）敲低外源p21WAF1/CIP1的效果;将重组质...

人、鼠原肠形成蛋白基因的克隆和初步分析

作者：高娟玉; 刘庆淮; 陈洁; 王云; 李建民 刊期：2008年第06期

目的：分析原肠形成蛋白（TSG）在几个发育阶段的人和小鼠睾丸中的差异表达。方法：应用cDNA微阵列技术对成人和胚胎睾丸进行基因表达图谱分析,获得在成人高表达、胚胎低表达的人TSG的全长基因;利用RT-PCR,从4周龄小鼠睾丸中克隆出小鼠TSG基因,用地高辛标记的探针进行原位杂交,检测小鼠TSG在睾丸中的表达。结果：人TSG在成人睾丸中高表达,在胚胎...

可表达随机12肽库的逆转录病毒表达系统的建立及评价

作者：赵亚; 李英辉; 黄豫晓; 刘忠湘; 雷俊川; 李淑梅; 刘军; 薛采芳 刊期：2008年第06期

目的：建立可表达随机12肽库的逆转录病毒表达系统。方法：体外合成编码随机12肽的DN段;在最优化的实验参数和反应条件下将DN段克隆入带有EGFP标记的逆转录病毒载体后分批次电击转化大肠杆菌,合并转化所得菌液即为可表达随机12肽库的逆转录病毒原始载体库;半固体扩增法扩增该原始载体库,提取质粒并转染GP2-293包装细胞,在EGFP表达最强的时间点收...

SOX4能与p53蛋白发生相互作用

作者：潘欣; 何昆; 张维娜; 李慧艳; 赵洁; 周涛; 张学敏; 李爱玲 刊期：2008年第06期

目的：研究SOX4和p53蛋白之间的相互作用。方法：应用GSTpull-down、免疫共沉淀实验验证相互作用。结果：GSTpulldown实验证实SOX4能结合GST-p53融合蛋白,但不能结合GST蛋白;免疫共沉淀实验也证明,SOX4与p53能在细胞内发生相互作用。结论：SOX4能与p53发生相互作用,为p53信号通路的研究提供了新的线索。

同源盒基因A10编码蛋白的靶调节基因的筛选与鉴定

作者：余州; 张立斌; 靳亚平; 桂耀庭 刊期：2008年第06期

目的：筛选和鉴定同源盒基因A10编码蛋白（HOXA10）的靶调节基因。方法：以人子宫内膜细胞系AN3CA为实验对象,采用染色质免疫沉淀方法筛选HOXA10靶基因;采用平端克隆方法构建HOXA10靶基因库;采用DNA序列分析结合生物信息学方法鉴定HOXA10靶基因。结果：共获得含有HOXA10结合片段的克隆197个,选取插入片段大于100bp的质粒67个进行DNA序列分析,其...

乳腺癌患者循环肿瘤细胞与癌干细胞相关性的初步研究

作者：曹明刚; 尤承忠; 王净; 王彩莲; 王永仿; 李雅婷; 赵枫姝; 刘胜利; 窦骏 刊期：2008年第06期

目的：检测乳腺癌患者外周血单核细胞（PBMC）中循环肿瘤细胞（CTC）和具有癌干细胞（CSC）标志的CTC（CSC-CTC）,探讨患者外周血微转移与CSC的相关性。方法：患者和健康者PBMC与磁珠偶联上皮细胞黏附分子单抗孵育后,用磁性分离法富集PBMC中的上皮细胞。以CK＋为患者PBMC中CTC标志,用流式细胞术（FCM）检测健康者和患者的PBMC中CK＋细胞及CK＋/C...

雷公藤红素对非小细胞肺癌细胞株H1299增殖与凋亡的影响

作者：陈国柱; 徐元基; 杜芝燕; 于晓妉 刊期：2008年第06期

目的：研究雷公藤红素对非小细胞肺癌细胞株H1299的杀伤作用及相关调控机制。方法：用细胞计数法测定不同浓度雷公藤红素对H1299细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测H1299细胞的细胞周期;用Western blotting检测剪切的（cleaved）聚ADP核糖聚合酶（PARP）、cleaved caspase-3和低氧诱导因子-1（HIF-1）的表达水平;用DCF-DA染色和荧光显微镜检测细胞...

过表达Gankyrin基因细胞模型的建立及其成瘤性分析

作者：满江红; 李慧艳; 李涛; 梁冰; 顾跃西; 周涛; 张学敏; 李爱玲 刊期：2008年第06期

目的：Gankyrin作为一个新的癌基因,在细胞周期调控和肿瘤发生过程中有重要功能。建立Gankyrin过表达的细胞和动物模型,以便进一步研究其在肿瘤形成过程中的作用机制。方法：采用逆转录病毒感染细胞的方法构建Gankyrin稳定表达的细胞株,采用Western-blot检测Gankyrin的表达,采用软琼脂和裸鼠成瘤实验验证该细胞株的恶性转化效应。结果：构建了Ga...

慢病毒载体介导的转人ahsp基因的β654地中海贫血小鼠的制备

作者：王宝斌; 方彧聃; 郭歆冰; 任兆瑞; 张敬之 刊期：2008年第06期

目的：经慢病毒载体介导,制备转人α血红蛋白稳定蛋白基因（ahsp）的β654地中海贫血小鼠。方法：用巢式PCR从人血DNA中获得人ahsp基因,构建含有人ahsp基因的慢病毒载体,制备假病毒,通过卵周隙显微注射手段将其导入β654地贫小鼠的受精卵,经移植至假孕母鼠输卵管,最终孕育出转人ahsp基因的β654地贫小鼠;分析小鼠体内外源ahsp基因的表达情况及其遗传...