生物技术通讯杂志 省级期刊

甲状腺转录因子-1融合表达载体的构建及体外活性鉴定

作者：程烽; 盛燕; 潘春明; 陈漪; 施静艺; 刘智; 白雪涛; 宋怀东 刊期：2007年第01期

目的：构建人甲状腺转录因子-1（TTF1）编码基因的真核表达载体pcDNA3.1/myc-His（-）C-TTF1，并观察其蛋白质体外转录翻译情况。方法：据已知的TTF1基因序列，应用巢式PCR技术，从人肺腺癌细胞株SPC-A1中扩增出TTF1基因，通过TA连接将其克隆入pGEM-T-easy载体，经测序鉴定后，双酶切插入真核表达质粒pcDNA3.1/myc-His（-）C中；重组质粒经XhoⅠ...

GLT-1基因siRNA真核表达载体的构建及其在大鼠神经胶质细胞中的抑制效应

作者：李哲; 王玮; 雷迎峰; 尹文; 王巍; 李惠民; 廖衡 刊期：2007年第01期

目的：研究特异性siRNA对大鼠神经胶质细胞中GLT-1基因的阻抑效果。方法：根据GLT-1基因的序列特点和RNAi设计原则，设计其shRNA的核苷酸片段。退火后将其克隆入pSupressorNeo，构建可表达大鼠GLT-1基因siRNA的重组真核表达质粒pSuppressorNeo-GLT-1；利用脂质体法将其转染神经胶质细胞后，用RT-PCR、Western印迹及免疫荧光法等方法检测转染的神...

人NDRG2启动子的克隆与活性鉴定

作者：张健; 陈苏宁; 于江天; 苏金; 药立波; 刘新平 刊期：2007年第01期

目的：克隆人NDRG2的启动子，并进行启动子的活性鉴定。方法：用Advantage-GC Taq酶，采用PCR方法，以BCA克隆R-998D1为模板，克隆人NDRG2（-1455/＋274）的启动子。分别构建NDRG2（-1131/＋274）、NDRG2（-273/＋274）、NDRG2（-135/＋274）、NDRG2（-79/＋274）和NDRG2（-79/＋57）等不同长度的截短体，并分别亚克隆入pGL3-basic报告基因载体...

癌基因MDM2对雌激素受体转录活性的调节作用

作者：宁康; 范洪学; 李熔; 叶棋浓 刊期：2007年第01期

目的：检测MDM2基因对雌激素受体α和β（ERα和ERβ）是否具有转录活性调节作用。方法：用PCR方法从乳腺文库中扩增MDM2序列，并将其以正确相位与pcDNA3-FLAG载体中的FLAG序列融合，构建成重组质粒pcDNA3-FLAG-MDM2；以含雌激素反应元件的荧光素酶（ERE-LUC）为报告基因，通过检测荧光素酶活性来确定MDM2是否对ER有转录调节因子的作用。结果：克隆...

人血清Q型对氧磷酶在大肠杆菌中的表达

作者：滕霞; 杨申; 李前; 孙曼霁 刊期：2007年第01期

目的：应用大肠杆菌原核表达系统高效表达人血清Q型对氧磷酶（PON1）。方法：从pBlueScript-PON1重组质粒中通过PCR扩增得到了人PON1基因，将其亚克隆至原核表达载体pBV220中，构建了重组表达质粒pBV220-PON1，转化大肠杆菌，获得表达菌株。结果：rhPON1重组蛋白以不溶形式存在于包涵体中。凝胶扫描分析表明，重组蛋白表达量约占菌体总蛋白的18%...

人泛素结合酶9的原核表达与纯化

作者：卓越; 樊峥; 叶棋浓; 严景华 刊期：2007年第01期

目的：表达和纯化高纯度的人泛素结合酶9（hUBC9）。方法：将hUBC9基因克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上并转化大肠杆菌BL21（DE3），于30℃、1mmol/LIPTG诱导4h，表达GST-hUBC9融合蛋白。用Glutathione-Sepharose4B柱分离GST-hUBC9融合蛋白，用鼻病毒3C蛋白水解酶切去GST-hUBC9融合蛋白的GST标签，再用FPLC分子筛层析法进一步纯化hUBC9。结果和结...

开发缺氧调控载体用于肾性贫血的基因治疗

作者：杨洁; 杜德伟; 李占亭; 贾林涛; 赵晶; 许彦鸣; 杨安钢; 孙脊峰 刊期：2007年第01期

目的：开发具有缺氧调控活性的基因治疗载体，其表达可由缺氧选择性诱导，用于肾性贫血的逆转和治疗。方法：合成源于各种缺氧应答基因的缺氧应答元件（HRE）寡核苷酸序列，与CMV启动子连接组合，测定荧光素酶的相对活性以确定缺氧转录活性。结果：在各种缺氧调控载体中，由鼠PGK（mPGK）基因的HRE序列和CMV启动子组合成的缺氧应答启动子显示出1...

结核杆菌抗原85A与小鼠白细胞介素21共表达DNA疫苗的构建及其免疫效应研究

作者：唐权; 窦骏; 赵枫姝; 曹明刚; 褚莉莉; 潘猛 刊期：2007年第01期

目的：利用真核表达质粒pRSC，构建结核杆菌抗原85A（Ag85A）与小鼠白细胞介素21（mIL21）共表达重组体pRSC-mIL21-Ag85A，为研究新型结核杆菌DNA疫苗提供新的策略。方法：从质粒pcDNA3.1-mIL21中经PCR扩增出mIL21基因，并插入质粒pRSC中构成pRSC-mIL21；再从pIRES-Ag85A质粒中经PCR扩增出Ag85A基因，构建于pRSC-mIL21重组质粒上，成为共表达DNA...

小鼠白细胞介素21瘤苗的构建及其抗肿瘤效应研究

作者：褚莉莉; 窦骏; 赵枫姝; 唐权; 王永仿; 顾宁 刊期：2007年第01期

目的：建立稳定表达小鼠白细胞介素21（mIL-21）的肿瘤细胞瘤苗，观察其在小鼠体内是否能够诱导有效的抗肿瘤免疫反应及免疫记忆效应。方法：将已鉴定的重组质粒pcDNA3.1/mIL-21用脂质体法转染Sp2/0细胞制备瘤苗，RT-PCR法鉴定瘤苗中mIL-21的表达。通过流式细胞仪检测细胞周期来反映瘤苗体外增殖活性，再将其接种BALB/c小鼠，监测肿瘤生长情况，...

Epstein-Barr病毒包膜糖蛋白gp85的原核表达

作者：涂向东; 邱龙翔; 吴玉水; 连云宗; 程烽; 朱忠勇 刊期：2007年第01期

目的：利用大肠杆菌BL21诱导表达GST-gp85融合蛋白，进行动物免疫制备多克隆抗体。方法：通过PCR反应从EB病毒转染的绒猴淋巴细胞系B95-8细胞中获得了gp85BXLF2基因，将此基因克隆到大肠杆菌表达载体pGEX-5T，得到阳性克隆pGEX5T-85。转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导表达重组蛋白，表达产物经SDS-PAGE分析、尿素变性、复性和亲和层析纯化，并用初步...

jn219的分离纯化及其抗人巨细胞病毒活性的初步研究

作者：马瑜; 司书仪; 李妍; 岳盈盈; 万言珍; 李鹏; 李志会; 薛开莲; 孟红 刊期：2007年第01期

目的：从真菌中分离纯化单峰物质，并对其抗人巨细胞病毒活性进行初步研究。方法：发酵获得菌丝体，通过丙酮/乙酸乙酯提取、硅胶柱层析、高效液相色谱制备，从菌丝体中获得单峰物质，经紫外光谱、质谱分析，采用细胞病变效应（CPE）抑制法，通过中性红染色计算病毒滴度，跟踪其抗病毒活性。结果：分离到的单峰物质（命名为jn219）紫外吸收峰为2...

小鼠层粘连蛋白α_5 LG3组件的表达及纯化

作者：展德文; 张玉静; 王艳春; 孙兆增; 刘纯杰; 张兆山 刊期：2007年第01期

目的：用原核表达的方法获得带有6×His标记的小鼠层粘连蛋白α_5 LG3组件的重组蛋白。方法与结果：从小鼠心肌组织中提取总RNA，利用RT-PCR扩增出小鼠层粘连蛋白α_5 LG3组件的cDN段，并与pET-28a载体连接，构建重组表达质粒pET-LG3，限制性酶切分析和DNA序列测定均证实该克隆插入片段为小鼠层粘连蛋白α_5 LG3组件基因的成熟肽编码序列。用IPTG诱...

结核分枝杆菌FurB蛋白的表达及其单克隆抗体的制备

作者：姜泓; 高雪; 张海; 李元; 徐志凯; 薛莹 刊期：2007年第01期

目的：制备针对结核分枝杆菌FurB蛋白的单克隆抗体（mAb）并分析其特性。方法：利用E.coli DH5α表达含有6×His的融合蛋白FurB；采用小鼠腹股沟皮下包埋硝酸纤维素膜的方法免疫小鼠，然后进行细胞融合、克隆化制备抗FurB mAb，用ELISA法初步鉴定其特异性位点和相对亲和力。结果：获得了高表达的融合蛋白，经SDS-PAGE分析，在相对分子质量15.0×10^...

化学工业出版社生物·医药出版分社成立读者俱乐部金卡会员抢注活动

刊期：2007年第01期

小鼠精胺氧化酶的原核表达与鉴定

作者：韩钰; 王艳林 刊期：2007年第01期

目的：原核表达和分离纯化小鼠精胺氧化酶（SMO）。方法：采用RT-PCR法从小鼠胚胎干细胞（ES细胞）RNA中克隆小鼠SMOcDNA，构建SMO原核表达质粒并转染大肠杆菌BL21（DE3）菌株，经IPTG诱导，将表达的小鼠SMO重组蛋白在变性条件下经Ni-NTA树脂亲和层析纯化和透析复性。结果：在大肠杆菌中高表达出小鼠SMO重组蛋白；纯化并透析复性后的重组SMO具备...