生物技术通讯杂志 省级期刊

登革2型病毒衣壳蛋白在哺乳动物细胞中的表达与鉴定

作者：秦成峰; 秦鄂德 刊期：2005年第06期

从构建的重组质粒pLEX-C中高保真PCR获得编码登革2型病毒43株C基因(D2C)的DN段,通过基因重组的方法将其克隆入真核表达载体pcDNA6/V5-His获得了重组真核表达载体pc/D2C.经电穿孔的方法转染BHK21细胞后,分别通过RT-PCR、免疫荧光和Western印迹鉴定表达的蛋白.结果重组蛋白在BHK21细胞中获得表达,表达的蛋白主要存在于胞浆中,并具有较好的抗原性,...

利用反式剪接核酶修复突变绿色荧光蛋白mRNA

作者：熊宇泉; 李冰 刊期：2005年第06期

为构建修复突变绿色荧光蛋白(GFP)基因的反式剪接核酶,分别构建包含突变的GFP基因的XYQ5/10-pGEM重组质粒、XYQ5/10-pEGFP-C2重组质粒及用于修复该突变基因的反式剪接核酶载体trans-rib-CMV2.通过对体外共转录XYQ5/10-pGEM和trans-rib-CMV2重组质粒的RNA产物进行RT-PCR检测核酶细胞外剪接效果;通过XYQ5/10-pEGFP-C2和trans-rib-CMV2重组质粒共转...

重组人核因子κB亚基p65在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化

作者：闫海涛; 马晓芸; 董泗建; 郑建全; 丁日高 刊期：2005年第06期

将扩增得到的核因子(NF)κB亚基p65基因片段克隆至测序载体pGEM-T,测序验证该序列为预期目的片段后,再将该基因片段克隆至表达载体pGEX-4T2中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,用GST蛋白亲和柱纯化融合蛋白p65/GST,Western印迹验证该蛋白具有NF-κB抗原活性.结果表明,构建了NF-κB p65/GST融合表达载体,并表达和纯化了NF-κB p65/GST融合蛋白,为进一...

定点整合人Bcl-2基因的CHO／dhfr^-细胞株的建立

作者：许凌峰; 刘志刚; 孙志伟; 林建波; 杜韫; 刘姗; 俞炜源 刊期：2005年第06期

构建重组载体质粒pMCEfrt-Bcl-2,利用FIp-InTM定点重组系统,在CHO-dhfr-细胞内定点整合人Bcl-2基因,通过Western印迹检测重组细胞Bcl-2蛋白的表达.通过流式细胞仪和DNA Ladder检测在高NH4Cl条件下细胞的凋亡情况;用台盼蓝染色检测在无血清IMDM培养基中细胞的活细胞数目和活细胞比例.结果获得了稳定表达Bcl-2基因的细胞株CHO-Bcl-2,该细胞株能高...

肠道病毒71型SHZH03株VP1基因的进化分析

作者：周世力; 李琳琳; 田波 刊期：2005年第06期

构建了肠道病毒71型(EV71)中国(深圳)分离株SHZH03全基因组的8个相互重叠的克隆,对其全基因组7406 bp的核苷酸进行序列测定,利用DNA-Star软件分析外壳蛋白基因VP1的遗传进化.结果表明,SHZH03和SHZH98与亚洲流行株中的台湾1998年流行株、日本1999年流行株的遗传距离较近,而与新加坡2000年和2001年流行株的遗传距离较远;SHZH03株与一些欧洲流行株...

酵母双杂交技术研究与人孕酮受体B相互作用的蛋白质

作者：张佩景; 李慧艳; 潘欣; 靳宝锋; 满江红; 李卫华; 张学敏; 张涌 刊期：2005年第06期

应用酵母双杂交技术研究与人孕酮受体B(hPRB)发生相互作用的蛋白质,有助于进一步阐明其在乳腺癌的发生发展中发挥重要作用的调控机制.应用酵母双杂交系统3,以hPRB不同结构域为诱饵,筛选人乳腺cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白质,并运用X-α-Gal等实验提供的信息,筛除假阳性克隆.最终以AF1-DBD结构域作为诱饵最终筛出了1个阳性克隆,经测序及生物...

胞红蛋白酵母双杂交载体的构建与表达

作者：李谋; 刘小林; 张成岗 刊期：2005年第06期

胞红蛋白(CGB)是一种新发现的分布于胞浆与胞核的携氧珠蛋白.为探讨CGB在体内的相互作用蛋白,从而促进对其分子调控网络的认识,根据CGB基因的开放阅读框架设计并合成PCR引物,从入胎肝cDNA文库中扩增得到该基因编码区.测序分析正确后将其定向克隆到酵母表达载体pGBKT7中,构建获得CGB的酵母表达载体pGBKT7-CGB,并在酵母菌AH109中表达.提取酵母总蛋...

α-乙酰乳酸脱羧酶在大肠杆菌中的克隆表达

作者：李联正; 张惟材; 汪建华; 何维明 刊期：2005年第06期

根据已知的α-乙酰乳酸脱羧酶(ALDC)的基因序列,通过PCR获得了枯草芽孢杆菌168的ALDC基因,将该基因克隆到克隆载体pUC18和表达载体pQE60中,构建了pUC18-ALDC和pQE60-ALDC,经DNA测序证明序列正确.重组大肠杆菌DH5α/pQE60-ALDC经IPTG诱导能够高表达ALDC.对该酶进行了活力测定,结果显示工程菌产酶活力为0.11U/mL.

α-乙酰乳酸脱羧酶在毕赤酵母中的分泌表达

作者：李联正; 张惟材; 汪建华; 何维明 刊期：2005年第06期

根据已知的α-乙酰乳酸脱羧酶(ALDC)基因序列,通过PCR从枯草杆菌168基因组上扩增得到编码ALDC的结构基因.将该基因克隆到大肠杆菌-毕赤酵母穿梭载体pPIC9中,构建了重组质粒pPIC9-ALDC,电击转化毕赤酵母GS115.在甲醇诱导下,毕赤酵母分泌表达了ALDC.SDS-PAGE分析可见到Mr约62 000的表达条带,经测定,表达产物活力为0.03U/mL.

胰岛素样生长因子结合蛋白-1启动子的克隆与序列分析

作者：吴志香; 邵敬伟; 袁凤山 刊期：2005年第06期

用酚氯仿抽提法提取SD大鼠的肝脏基因组DNA,PCR扩增胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)启动子并克隆至pUC118载体.从含IGFBP-1启动子的质粒中酶切分离出IGFBP-1启动子并测序.PCR扩增出420 bp的目的DN段,与文献报道的IGFBP-1启动子DNA大小一致.经正、反两方向序列分析显示,克隆的基因序列和GenBank数据库中的IGFBP-1启动子基因序列一致.以上结...

含三倍体葡萄糖反应元件的质粒的构建及序列分析

作者：吴志香; 邵敬伟; 袁凤山 刊期：2005年第06期

用酚氯仿抽提法提取SD大鼠肝脏的基因组DNA,PCR扩增单倍体葡萄糖反应元件(glre).分别用Sac Ⅰ酶单酶切glre、pUC118载体后,连接、转化,PCR筛选出含三倍体glre的质粒并测序.结果PCR扩增出51 bp的目的DN段,与文献报道的葡萄糖反应元件glre的大小一致;连接转化后,经PCR筛选出三倍体glre,序列分析显示其基因序列和Genbank数据库中的glre基因一致.以...

小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白-7真核表达载体的构建及序列分析

作者：陈勇; 赵雪花; 王海燕; 朱汉荣; 夏瑞明; 成彩莲 刊期：2005年第06期

利用PCR技术,从质粒pRSET/mIGFBP-7中获得目的基因小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白-7(mIGFBP-7),将其插入质粒pcDNA3.1/HisB中,构建了含mIGFBP-7的真核表达重组质粒pcDNA3.1/mIGFBP-7.经测序鉴定,重组质粒构建正确,为下一步对其功能研究奠定了基础.

抗HBV与HCV免疫乳的实验免疫研究

作者：尹文; 雷迎峰; 杨敬; 张为; 吕欣; 薛小平; 徐志凯; 韦三华; 李毅; 刘兵 刊期：2005年第06期

确定重组HBV表面抗原和HCV核心抗原对奶牛的最适免疫剂量、免疫次数及间隔时间,观察牛奶中抗HBV与抗HCV的效价与消长规律.表达HBV表面抗原和HCV核心抗原的重组菌经IPTG诱导后,目的蛋白以包涵体形式存在.放大发酵工艺,菌体发酵密度达40g/L,目的蛋白表达量为26%～30%.将包涵体变性、复性后,测定蛋白含量,并用SDS-PAGE鉴定.采用不同的剂量和不同的...

肽合成、纯化及肽修饰服务

刊期：2005年第06期

人传染性软疣病毒快速PCR检测方法的建立

作者：周为民; 张陵林; 郑楠; 董小平; 晋红中; 谭文杰; 阮力 刊期：2005年第06期

为了能够对传染性软疣病毒(MCV)感染做出准确快速的实验室诊断,从14例临床MCV患者皮疹处提取获得病毒DNA,设计引物并进行PCR扩增获得预期的167 bp的片段,经测序并与已报道的序列比对,完全一致.而使用痘病毒科其他病毒的特异引物(正痘病毒和副痘病毒属)则没有特异扩增条带.将病毒DNA进行系列稀释后行PCR扩增,结果表明PCR检测方法的敏感性为5×10-4...