生物技术通讯杂志 省级期刊

核孔蛋白p62促进非受体酪氨酸激酶c-Abl进入细胞核

作者：黄维; 刘萱; 李平; 靳彦文; 李晓荣; 刘传暄; 马清钧; 曹诚 刊期：2005年第05期

非受体酪氨酸激酶c-Abl广泛表达于各组织细胞中,其序列高度保守,它的亚细胞定位与其功能密切相关.c-Abl借助其C端的3个核定位信号(NLS)和1个核输出信号(NES)完成细胞核-细胞质间的穿梭过程.关于c-Abl核-质穿梭的详细机制还不清楚.通过酵母双杂交系统,以人类Ib型c-Abl作为诱饵蛋白进行HeLa细胞cDNA文库的筛选,获得了可能在c-Abl核-质穿梭过程中具...

利用小干涉RNA抑制肿瘤细胞MCF-7中NF-IL6的表达

作者：李晓荣; 李平; 杨尧; 李晓明; 彭丽; 曹诚; 马清钧 刊期：2005年第05期

RNA干扰被证明是一项能有效而特异地抑制基因表达的新技术.转录因子NF-IL6特异地在肿瘤组织中过量表达,许多报道表明抑制它的功能对肿瘤治疗有利.构建能够沉默转录因子NF-IL6表达的小干涉RNA(siRNA)质粒,转染肿瘤MCF-7细胞后,用Western印迹法和荧光素酶活性实验检测NF-IL6表达水平和转录活性的改变.结果发现NF-IL6的表达水平被下调80%,转录激活...

表面活性蛋白A启动子指导Cre重组酶在转基因小鼠Ⅱ型肺上皮细胞中表达

作者：时令; 王友亮; 程萱; 候宁; 杨晓 刊期：2005年第05期

Ⅱ型肺上皮细胞合成和分泌肺表面活性物质(PS),与肺损伤后的修复有关,很多肺相关疾病的发生伴随有Ⅱ型肺上皮细胞功能不全及PS系统缺陷.Ⅱ型肺上皮细胞在肺的发育、机体免疫及疾病的发生发展过程中的具体功能尚不明确,对调控Ⅱ型肺上皮细胞功能的遗传机制也知之甚少.为了利用Cre-loxP系统研究调节Ⅱ型肺上皮细胞功能的遗传机制,研制了表面活性蛋...

SARS冠状病毒囊膜E蛋白的重组表达与单克隆抗体制备

作者：王平; 黄庆生; 丁天兵; 任君萍; 宋建华; 徐志凯 刊期：2005年第05期

从基因库中调取SARS冠状病毒囊膜E蛋白基因序列,用连接PCR方法合成完整片段.测序确认后与人免疫球蛋白(IgG)序列Fc段连接并克隆至原核表达载体pPRO EX Hta中.从SDS-PAGE凝胶中回收表达产物后免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体(mAb).连接PCR扩增出231 bp的DNA,测序结果与GenBank公布的序列一致,与人IgG序列Fc段基因连接后克隆至原...

痢疾杆菌酸抗性系统相关基因缺失突变体的构建

作者：葛堂栋; 冯尔玲; 晏本菊; 王恒樑; 黄留玉 刊期：2005年第05期

依赖于谷氨酸脱羧酶的酸抗性系统对痢疾杆菌在宿主细胞内的生存和繁殖至关重要,hdA、hdeB、yhiE和yhiF是其中几个重要的酸抗性基因.借助Red系统的重组功能,PCR扩增两翼与目的基因上下游同源的抗性基因片段,电击转化痢疾杆菌2457T,对筛选到的阳性转化子再导入编码FLP位点特异性重组酶的质粒pCP20以去除抗性基因.结果成功的敲除了hdeA、hdeB、yhiE...

小鼠脂联素与绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建及在COS-7细胞中的表达

作者：王会中; 付秋霞; 高明; 贾帅争; 詹林盛; 王全立 刊期：2005年第05期

以绿色荧光蛋白(GFP)基因(gfp)为报告基因,构建小鼠脂联素(mADPN)基因(mAd)与gfp的融合基因mAd/gfp表达载体pCI-neo-apoEHCR-hAATp-mAd-gfp,脂质体法转染体外培养的COS-7细胞,荧光显微镜观察GFP在细胞中的表达可间接反映mADPN的表达,并通过RT-PCR在核酸水平进一步确证mAd的表达.荧光显微镜观察及RT-PCR结果均证明mADPN在COS-7细胞中获得了高效表...

结构生物学研究中的eIF-5A的表达与纯化

作者：姜楠; 颜贤忠; 张学敏 刊期：2005年第05期

真核细胞翻译启始因子eIF-5A(eukaryotic initiation factor 5A)是迄今发现的惟一含有特殊氨基酸hypusine残基的蛋白质,其具体生物学功能仍不明确.为了推进对其功能的研究,拟从结构生物学入手,对其结构进行核磁共振(NMR)结构解析.利用GST融合蛋白原核表达系统,将eIF-5A进行原核表达,经过优化表达与纯化条件,得到了高产率与高纯度的可溶性eIF-5A...

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刊期：2005年第05期

R6基因在小鼠胚胎发育中期肾组织的表达

作者：舒坤贤; 谢永芳; 廖系晗; 梁亦龙 刊期：2005年第05期

用原位杂交法检测小鼠肾组织中细胞周期调控基因Rb的表达；用免疫组织化学及缺口末端标记法观察小鼠肾组织发育过程中的细胞增殖与凋亡：结果表明，Rb基因主要在肾上皮细胞表达，随胎龄增长而表达颜色加深。肾组织在第13天有一个较大的增殖增长，到第14天生长趋于稳定。以上结果说明Rb基因在小鼠胚胎肾发育中期有表达，该基因在胚胎肾发育中期起...

炭疽芽孢杆菌保护性抗原在大肠杆菌中的表达及纯化

作者：展德文; 刘向昕; 陶好霞; 王令春; 张兆山 刊期：2005年第05期

按照炭疽芽孢杆菌保护性抗原(PA)基因成熟肽编码序列设计引物,从炭疽杆菌pOX1质粒中扩增出PA基因片段,将该片段定向插入到原核表达载体pET-28a中;获得了pET-PA原核表达重组质粒,限制性酶切分析和DNA序列测定均证实该克隆插入片段为PA基因的成熟肽编码序列.将该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,重组蛋白在大肠杆菌表达系统中获得了高效...

结核分枝杆菌furA基因真核表达质粒的构建及表达

作者：高雪; 薛莹; 姜泓; 柏银兰; 张海; 李元; 徐志凯 刊期：2005年第05期

以BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切pRSET-furA,获得结核分枝杆菌铁调控基因furA,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),构建了重组质粒pcDNA-furA.经酶切鉴定正确后,将重组质粒以阳离子聚合物转染CHO细胞.经RT-PCR分析表明,furA可在CHO细胞中转录;用间接免疫荧光检测,表达有FurA蛋白的细胞着染.以上结果表明,通过构建结核分枝杆菌furA基因的真核表达载体pcD...

绿色荧光蛋白基因在转基因小鼠体内的表达

作者：徐艺玫; 谢夏阳; 刘丽均; 谢恩; 徐平; 顾为望 刊期：2005年第05期

建立绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠,继而传代建系.采用显微注射法,将GFP基因注入FVB/NJ小鼠受精卵原核内,获得子代鼠.分娩后3周剪取仔鼠尾,提取基因组DNA,应用PCR、Southern印迹技术进行整合检测.结共用雌性小鼠200只,注射受精卵1 586枚,移植卵数386枚,受体鼠32只,怀孕鼠4只,子代鼠18只,有4只为阳性.取2只首建鼠的胚胎,在荧光显微镜下观察GFP表达...

野生大豆种子cDNA文库的构建与分析

作者：王敏; 刘萍; 石明旺; 王清连 刊期：2005年第05期

为了分离与鉴定野生大豆优良基因,以双高型优质野生大豆的近成熟种子为材料,采用裂解法提取了总RNA;以Oligo(dT)为引物,经SA-PMPS法分离出mRNA,反转录酶催化合成cDNA,并以cDNA第一链为模板在DNA聚合酶I的作用下合成cDNA第二链,双链cDNA经加接头等步骤,成功构建了野生大豆cDNA文库.文库的重组率约为93.7%,PCR检测重组克隆的插入片段平均大于1 000...

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刊期：2005年第05期

降钙素基因对胡萝卜的遗传转化

作者：张丽华; 程智慧; 陈杭; 赵吉强; 李霞 刊期：2005年第05期

以新透心红胡萝卜为植物材料,用微弹轰击法对胡萝卜愈伤组织进行了降钙素基因的遗传转化.对所得再生植株进行了PCR检测及Southern印迹检测.在16棵Kan抗性株中有13棵PCR阳性株;4棵存活的PCR阳性株经Southern印迹检测,有3株为阳性.对收获的2个肉质根做PCR检测,均为阳性;对其中较大的肉质根作Southern印迹检测,结果也为阳性.这些检测结果说明降钙素...