生物技术通讯杂志 省级期刊

大鼠睾丸镉毒性相关蛋白质组学研究

作者：张建鹏; 任绪义; 郭婷婷; 冯伟华; 焦炳华 刊期：2005年第04期

镉是对动物与人的生殖系统均具有毒性的环境污染物.为深入系统地探讨镉毒性机制,应用二维电泳与质谱联用技术对镉暴露大鼠睾丸组织蛋白表达谱进行了差异分析.实验结果表明,碳酸酐酶Ⅰ和Ⅱ、肉碱棕榈酰转移酶Ⅱ、电压依赖阴离子通道2、二氢硫辛酰胺脱氢酶、3-磷酸甘油酸脱氢酶、丝氨酸蛋白酶抑制剂3、类似CREM转录调控元件激活因子等蛋白质与镉毒...

西农萨能奶山羊β-酪蛋白基因启动子区的克隆、生物信息学分析及活性研究

作者：梁克明; 朱婧; 童德文; 陈南春; 陈苏民 刊期：2005年第04期

根据已发表的β-酪蛋白基因全序列设计合成引物,以西农萨能奶山羊乳腺组织基因组DNA为模板,通过长链PCR扩增β-酪蛋白基因组基因5'侧序列.将该序列克隆入pMD18-T载体,并对其进行序列测定.结果克隆得到西农萨能奶山羊β-酪蛋白基因-4 359至+2 106共6 465 bp序列.该序列保留β-酪蛋白第一内含子、第一外显子和第二外显子及其信号肽部分.将该序列与已公...

中国家蚕抗菌肽CBM1、CBM2的克隆和表达研究

作者：李建民; 马志飞; 曹勤洪; 周开亚; 张双全; 戴祝英 刊期：2005年第04期

根据所测定的中国产家蚕CBM1和CBM2 cDNA序列,设计成熟肽的特异性引物,将此基因与凝血因子Xa(FXa)的切割序列以PCR方法连接起来,克隆至pGEX-KG表达质粒中.该载体为改进的GST融合表达质粒,所携带的6个Gly有助于提高FXa的切割效率.克隆得到的融合载体在大肠杆菌JM109中扩增和筛选.经DNA测序,证实为含有正确序列的乙酰化的pGEX-KG-FXa-NCBM1(pKG-FX...

带红色荧光蛋白靶向线粒体载体的构建与表达

作者：郝好杰; 凌贤龙; 徐元基; 杜芝燕; 王妍; 陈惠华; 陆应麟 刊期：2005年第04期

选取由核表达的线粒体蛋白细胞色素C氧化亚单位Ⅷ(COX8)的前导序列为靶序列,从人胚胎肺成纤维细胞中扩增出COX8的前导序列,插入到pcDNA3.1/myc-HisA中,并将pDsRED1-n1中的红色荧光蛋白序列RFP克隆至COX8的下游,形成融合蛋白.在脂质体的介导下,将重组载体转染至肿瘤细胞中,在荧光显微镜下观察其在细胞内的表达及分布情况.构建的靶向线粒体的载体...

幽门螺杆菌肽脱甲酰基酶基因在大肠杆菌中的可溶性表达与活性检测

作者：幺山山; 曾明; 章金刚 刊期：2005年第04期

幽门螺杆菌肽脱甲酰基酶(PDF)的可溶性表达是基于PDF靶位新药筛选的前提.本研究在克隆肽脱甲酰基酶基因(def)后,构建了其融合表达载体pTrcHisB-def,并在不同宿主菌(大肠杆菌BL21、DH5α和JM109)中进行了诱导表达.结果显示,只有在BL21(DE3)中获可溶性表达,产物经纯化后具有肽脱甲酰基酶活性.以上研究为PDF特性分析及PDF抑制剂筛选奠定了基础.

HIV-1融合蛋白MA4-CA在大肠杆菌中的高效表达

作者：孙晓光; 宋长征; 张更林 刊期：2005年第04期

将HIV-1 MA4-CA融合基因克隆到高效表达载体pBV220中,将该重组表达载体转化大肠杆菌BL21,进行诱导表达.收集细菌,菌体裂解后进行SDS-PAGE检测.结果表明,成功地构建了含MA4-CA融合基因的表达载体pBV220-MA4-CA,该载体能在大肠杆菌中表达相对分子质量为16 000并以包涵体形式存在的融合蛋白,此蛋白经洗涤后能够溶于8mol/L的尿素中.利用硫酸铵沉淀法...

长效山羊促卵泡素类似物真核表达载体的构建及其在CHO细胞内的稳定表达

作者：严正杰; 孙雪萍; 丁家桐 刊期：2005年第04期

通过PCR重叠延伸法将人绒毛膜促性腺激素(hCG)的羧基末端延长肽(CTP)基因连接至山羊促卵泡素(FSH)β亚基的羧基末端,克隆入双表达载体pVITRO,测序证实后将表达载体转染CHO细胞,用潮霉素B筛选稳定表达的CHO细胞株.结果表明获得了长效山羊FSH基因,并得到稳定表达的CHO细胞株,表达量为0.105 mU/mL,为进一步研究CTP结构与功能的关系,以及长效激素的理...

proUK—KGDW融合基因在CHO细胞中的高表达

作者：杜韫; 刘志刚; 林建波; 徐桂清; 俞炜源 刊期：2005年第04期

利用常规分子生物学技术,构建了新型高效的proUK-KGDW融合基因的分泌型哺乳动物细胞表达载体.将该载体线性化后转染CHO/dhfr-细胞,经G418筛选获得阳性克隆,然后挑取表达水平较高的克隆进行MTX加压扩增,以提高proUK-KGDW杂合体的表达水平,经2～3轮MTX加压扩增,获得多株表达水平超过10μg/(106细胞·24 h)的稳定的高表达细胞株,为proUK-KGDW杂合体的...

平滑肌细胞特异表达Cre重组酶转基因小鼠Cre重组酶的表达分布

作者：杨蕾蕾; 吴壮; 程萱; 徐军; 杨晓 刊期：2005年第04期

利用转基因技术构建了平滑肌细胞特异表达Cre重组酶的转基因小鼠(SMA-Cre),将该小鼠与基因组上携带LoxP位点的ROSA26小鼠杂交,通过LacZ染色检测Cre重组酶介导重组的功能以及表达的组织特异性.结果显示,在气管C形软骨连接处平滑肌、细支气管壁平滑肌、食道壁平滑肌、胃壁平滑肌、小肠壁平滑肌、子宫壁平滑肌、膀胱壁平滑肌、血管壁平滑肌、心肌及...

炭疽毒素保护性抗原第四结构域在大肠杆菌中的可溶性表达

作者：余燕; 孙志伟; 沈应柏; 俞炜源; 陈学英 刊期：2005年第04期

人工优化设计并合成炭疽毒素保护性抗原第四结构域基因,并与噬菌体gⅢ蛋白N端结构域基因融合,在大肠杆菌中可溶性表达融合蛋白.结果表明合成了炭疽毒素保护性抗原第四结构域基因,并在大肠杆菌中获得了高效可溶性融合表达,可溶性表达产物占细菌总蛋白量的36%左右;经亲和层析纯化获得了重组蛋白;Western印迹分析表明,表达产物能与His单抗(重组蛋白...

作者更正启事

刊期：2005年第04期

质粒超螺旋比例对其细胞转染效率及表达的影响

作者：哈小琴; 吴祖泽; 张庆林; 吴彬; 吕同德 刊期：2005年第04期

检测质粒开环、闭环比例不同时对其细胞转染效率及表达的影响.构建携带人肝细胞生长因子基因的质粒(pcDNA3-HGF)及携带LacZ报告基因的质粒(pcDNA3-LacZ),用核酸纯化试剂盒提取开环、闭环比例不同的质粒,然后用LipofectAMINE介导它们分别转染NIH3T3细胞,采用X-Gal染色和ELISA法分别观察转染效率和表达活性.结果表明,用超螺旋比例分别为85.45%和48...

应用水动力转染技术使人低密度脂蛋白受体、CD81和浸入诱导蛋白L同时在小鼠体内表达

作者：贾帅争; 胡锦辉; 郑晓玲; 吕丽萍; 刘敏霞; 詹林盛; 王全立 刊期：2005年第04期

为建立人低密度脂蛋白受体(LDLR)、CD81和浸入诱导蛋白L(Sip-L)等多个HCV感染相关分子共表达的转基因小鼠,首先分别构建了白蛋白启动子调控的人LDLR、CD81和Sip-L基因的小鼠肝脏组织特异性表达载体,将3种质粒同时采用水动力转染技术导入小鼠体内,RT-pCR和免疫组化技术检测转入体内基因的表达及持续时间.结果表明,转染8 h后即可检测到3种基因在体...

基因枪轰击成熟花粉粒转化玉米的研究

作者：刘丹梅; 杨君 刊期：2005年第04期

利用基因枪轰击花粉粒再授粉的基因转化途径,将豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(CpTI)成功导入玉米受体中.经卡那霉素筛选结果表明,非转化植株经1 000 ppm卡那霉素溶液处理后白化、死亡,余下大量健壮、可育的抗性植株,转化率约1.59%.通过对抗性植株进行PCR和PCR-Southem检测,初步确定CpTI基因已导入玉米基因组.饲虫实验结果表明转化植株具有较强的抗虫性...

《细胞与分子免疫学杂志》2006年征订启事

刊期：2005年第04期