生物技术通讯杂志 省级期刊

pten敲除小鼠中转录上调基因pdd87编码蛋白定位于高尔基体

作者：段瑞峰; 李刚; Matthias; Groszer; 胡迎春; 项晓琼; 吴虹; 吴德昌 刊期：2004年第03期

为了明确pten敲除小鼠中转录上调基因pdd87编码蛋白在细胞中的定位,构建PDD87与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白表达载体pEGFP-C1-pdd87,利用Lipofectamine 2000转染该载体于体外培养的NIH3T3细胞中,采用高尔基体特异探针BODIPY TR C5-Ceramide染色显示高尔基体,激光共聚焦显微镜下观察到PDD87-GFP融合蛋白定位于高尔基体,提示pdd87基因编码的蛋白...

骨关节炎相关Smad3突变基因的克隆及其初步的功能分析

作者：万海峰; 毛春明; 王友亮; 孙岩松; 谭晓红; 姚俊岩; 杨晓 刊期：2004年第03期

以前的研究结果显示Smad3错义突变(P197N→I)可能与骨关节炎发生的病理过程有关.本研究构建了带有该点突变的Smad3 cDNA的表达载体,转染Smad3基因缺失的成纤维细胞,检测细胞培养液中MMP-2的表达水平和活性变化.结果显示,转染野生型Smad3表达载体可以使Smad3基因缺失的成纤维细胞MMP-2表达活性明显降低,而转染Smad3突变体表达载体丧失对MMP-2表达...

EB病毒特异性增强子CAT报告质粒构建策略

作者：廖志勇; 车小燕; 徐华; 张丽娅; 潘玉先; 郝卫 刊期：2004年第03期

构建携带EB病毒特异性增强子oriP不同结构域的CAT报告质粒,以探讨EB病毒特异性增强子与EB病毒核抗原-1结合后的转录增强作用.聚合酶链反应扩增得到增强子oriP全序列,借助于pUC19质粒将其不同结构域克隆到pCAT3 Promoter(pCAT3/P)载体.扩增获得orip全序列;构建得到携带EB病毒特异性增强子Orip不同结构域的CAT报告质粒pCAT3/P--oriP、pCAT3/P-FR、...

XBP-1转录激活系统的构建

作者：方言; 严景华; 丁丽华; 赵海泉; 黄翠芬; 杨晓; 叶棋浓 刊期：2004年第03期

人X盒结合蛋白1(XBP-1)是CREB/ATF(cAMP应答元件结合蛋白/激活转录因子)转录因子家族中的一员,在很多癌细胞中高水平表达.将XBP-1两种剪切形式的编码序列分别克隆在pRC-lac真核载体上,构建成pRC-lac-XBP-1S和pRC-lac-XBP-1U重组质粒.Western印迹分析表明,这两种XBP-1形式在哺乳动物细胞中都得到了表达.瞬时转染人胚胎肾细胞293T,用荧光素酶报告...

人端粒保护蛋白hPot1的一种新选择性剪接体的克隆及鉴定

作者：林坚; 陈浩; 黄君健; 白云秀; 金蕊; 张彬; 韩素文; 黄翠芬 刊期：2004年第03期

hPot1是端粒单链结合蛋白,在维持染色体末端的稳定性中发挥着重要作用.从前列腺癌细胞C4-2中提取总RNA,以反转录得到的cDNA为模板,扩增全长的hPot1 cDNA,发现hPot1基因的一种新的剪接形式.这种新的剪接形式缺失了野生型hPot1基因的第2个外显子,并且造成了读码框架的改变,使翻译提前终止,表达出一段有45个氨基酸残基的短肽.进一步检测表明,这一hP...

人细胞周期相关激酶启动子的克隆和初步分析

作者：贾向志; 林李家宓; 何明亮; 马文煜; 黄培堂; 孔祥复; 黄翠芬 刊期：2004年第03期

克隆人的细胞周期相关激酶(CCRK)基因启动子,分析与其表达有关的转录调控因子.通过巢式PCR方法,从人的基因组总DNA中分离出CCRK基因5′端非翻译区大小为1 072 bp的片段.这段片段的3′端起始点在第一个外显子里第一个翻译密码子ATG(+1)上游128 bp处.以1 072 bp为模板,对启动子进行5′端删除分析,分别扩增951 bp(-1072/-128)、564 bp(-692/-128)、...

重组人RGD-sTRAIL的表达、纯化及抗肿瘤活性研究

作者：赵丽红; 范清林; 邹文艺; 宋礼华 刊期：2004年第03期

利用PCR技术构建RGD短肽与人肿瘤坏死因子凋亡配体(胞外区114～281)的融合基因,将该DN段克隆到原核表达载体pET-11a中.重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后可表达相对分子质量约为20 000的目的蛋白,占菌体蛋白的20%左右,且大多数重组蛋白以不溶的包涵体形式存在.Westem印迹表明目的蛋白具有人sTRAIL的抗原性.表达产物经变性、复性、离子交...

新型载体蛋白P64K在大肠杆菌中的可溶性表达与纯化

作者：熊向华; 赵洪亮; 薛冲; 张伟; 杨秉芬; 刘志敏 刊期：2004年第03期

用常规PCR方法从脑膜炎球菌中克隆出P64K基因,构建重组质粒pET28a-P64K转化BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导表达筛选P64K蛋白的高表达菌株.结果证实P64K蛋白为胞内可溶性表达,表达量约占胞内总蛋白的30%.重组P64K蛋白经Butyl疏水柱、G200分子筛柱和Q阴离子柱三步层析后纯度达到95%以上,为今后进一步的功能和应用研究打下了良好的基础.

全国医药生物工程2004年学术研讨会及征文第二轮通知

刊期：2004年第03期

O1或O139霍乱疫苗对异群霍乱缺乏交叉保护

作者：刘传喧; 张艳红; 马清钧 刊期：2004年第03期

O1和O139霍乱弧菌是引起急性腹泻的病原微生物,用这两群菌的灭活全菌体与重组霍乱毒素B亚单位构建的亚单位/菌体型疫苗免疫LACA小鼠,对本群菌的攻击可提供良好免疫保护,而对异群霍乱菌则缺乏交叉保护作用.

应用酵母双杂交技术寻找与GGNBP相互作用的蛋白质

作者：王艳; 卢柏松; 向文洲; 周煜; 赵庆国; 曹志国; 张进; 黄培堂 刊期：2004年第03期

生殖细胞缺陷症(gcd)小鼠突变体是20个世纪90年代初发现的一种不育突变小鼠,其不育原因是由于其胚胎期原始生殖细胞的数目低于正常.FancL(也叫Pog)的缺失是引起gcd突变小鼠的原因,FancL基因缺失后可能影响了小鼠胚胎期原始生殖细胞的增殖/存活和成年期小鼠精母细胞的减数分裂.FANCL是一种含有PHD结构域的泛素E3连接酶,是Fanconi贫血复合物的组分...

非受体酪氨酸激酶ARG与过氧化氢酶相互作用机制的初步研究

作者：李伟; 李平; 钟辉; 杨淑静; 马清钧; 曹诚 刊期：2004年第03期

通过体外结合实验,发现Arg蛋白与过氧化氢酶之间有相互作用,且这种作用是通过Arg蛋白的SH3结构域和过氧化氢酶的P290FNP介导的.利用体外激酶分析和Westem印迹证明Arg蛋白可以使过氧化氢酶磷酸化.本研究为过氧化氢酶的活性调控研究奠定了基础.

CHK1相互作用蛋白的筛选

作者：薛恒钢; 胡宝成; 刘爽; 田媛; 黄翠芬 刊期：2004年第03期

将CHK1基因克隆入酵母双杂交载体中,转化入酵母菌AH109,将转化有CHK1基因的酵母菌AH109培养并再转化人前列腺cDNA文库质粒,检测报告基因的表达情况,筛选与CHK1相互作用的蛋白.共转化子中有4个β-半乳糖苷酶活性分析和α--半乳糖苷酶活性分析结果为阳性的克隆,但测序结果其中有2个克隆为相同序列.本实验筛选到3个与CHK1相互作用的蛋白,此结果为进一...

丙型肝炎病毒分片段抗体检测蛋白质芯片质控参比品的建立及质量验证

作者：张文; 周枚芬; 陈立炎; 丁亚平; 黄坚; 耿永尧; 王升启 刊期：2004年第03期

建立能同时检测丙型肝炎病毒(HCV)嵌合抗体、核心抗体和NS3、NS4、NS5抗体的蛋白质芯片质控参比品,对质控合格的芯片进行质量验证.用3种HCV EIA试剂分别检测从3家医院收集的丙型肝炎病毒感染患者血清及其他非HCV感染患者血清,从3种EIA试剂同时阴性或阳性的血样中挑取阳性和阴性血清,然后用RNA hyb PCR试剂进行检测,从中再选取部分样本用RIBA3.0...

检测恒河猴血清中trastuzumab浓度的一种直接酶联免疫竞争法

作者：周崧; 单成启; 陈知航; 侯盛; 侯禹男; 范志勤; 程远国 刊期：2004年第03期

采用ELISA法建立检测恒河猴血清中trastuzumab的酶联免疫竞争法,为研究人体内trastuzumab的药物动力学学和药效学提供依据.方法的测量范围是1～100μg/mL,最低检测限为L0μg/mL.板内精密度范围91%～107%,相对标准偏差为1.5%～4.9%.板间精密度范围102%～110%,相对标准偏差为2.7%～15.4%.方法中未显示与重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白、重...