杂志简介：《生物技术通报》杂志经新闻出版总署批准，自1985年创刊，国内刊号为11-2396/Q，是一本综合性较强的生物期刊。该刊是一份月刊，致力于发表生物领域的高质量原创研究成果、综述及快报。主要栏目：青贮微生物专题、研究报告、综述与专论、技术与方法
杂志简介：《生物技术通报》杂志经新闻出版总署批准，自1985年创刊，国内刊号为11-2396/Q，是一本综合性较强的生物期刊。该刊是一份月刊，致力于发表生物领域的高质量原创研究成果、综述及快报。主要栏目：青贮微生物专题、研究报告、综述与专论、技术与方法
作者：吴言; 郝雅荞; 韦璇; 沈琦; 柳叶飞; 王升厚; 赵洪新 刊期：2018年第05期
CRISPR/Cas9（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9）是继锌指核酸酶（ZFNs）和类转录激活因子效应物核酸酶（TALENs）基因编辑技术之后的第三代基因编辑技术。CRISPR/Cas9在细菌和古生菌中广泛存在,是细菌在长期进化过程中形成的一种＂适应性免疫防御＂,能够针对噬菌体感染、质粒接合和转化所造成的外源导入基因特...
作者：梁丽琴; 阎婧; 张鑫; 郝泽婷; 段江燕 刊期：2018年第05期
CRISPR作为一种基于RNA的后天免疫防御系统,其间隔序列与噬菌体或质粒序列存在同源性,能利用靶位点特异性的RNA指导Cas蛋白靶向几乎所有生物和细胞中遗传错误的基因。与锌指核酶ZFN和转录激活因子样效应物核酶TALEN的基因编辑技术相比,更廉价高效,所以自2013年首次应用以来,迅速被广大中外研究人员接受并应用于研究,成为当今生命科学领域研究的...
作者：贺帅; 王淑辉; 孙秀柱 刊期：2018年第05期
成簇规律间隔短回文重复序列/成簇规律间隔短回文重复序列关联蛋白9（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated proteins,CRISPR/Cas9）技术是近5年来在生物基因改造中应用最广泛的新型编辑工具,具有成本低、效率高、多位点打靶以及脱靶效应可预测等优点,正在成为不同生物体中设计基因组的有力工具。表观...
作者：郭明璋; 刘海燕; 杜若曦; 许文涛 刊期：2018年第05期
多元基因编辑技术是指通过一次实验操作在同一个细胞内完成多个靶位点基因编辑的技术。高通量化是基因编辑技术发展的重要方向,而多元基因编辑的出现与发展是实现高通量基因编辑的重要中间过程。目前,细菌中多元基因编辑技术主要有三种形式并行发展,分别是基于迭代编辑、基于CRISPR/Cas9等新基因编辑工具、基于大片段基因合成组装的多元基因编辑...
作者：乔龙亮; 庞建虎; 党晨阳; 黄海龙; 朱鹏 刊期：2018年第05期
链霉菌（Streptomyces）以产生多种抗生素而著称,长期以来都是生命科学与医学、药学及工业领域的研究热点。然而,链霉菌的遗传操作十分困难,传统的基因编辑手段因效率低、实验周期长及操作步骤繁琐等原因正逐渐被素有＂魔剪＂之称的CRISPR（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）/Cas9（CRISPR-associated protein 9）系...
作者：汤波; 孙照霖; 戴蕴平 刊期：2018年第05期
基因编辑技术是对基因组进行定点修饰的一种新兴生物技术,主要包括锌指核酸酶（ZFNs）技术、转录激活因子样效应物核酸酶（TALENs）技术以及最新的CRISPR/Cas9技术,正在动植物育种、生物制药、基因治疗等方面发挥前所未有的影响力。本文总结了基因打靶技术及各种基因编辑技术的发展简史,重点介绍了基因编辑技术在抗病、改善奶品质、提高瘦肉率和...
作者：毕延震; 肖红卫; 张立苹; 任红艳; 华再东; 华文君; 王正; 牛敏杰; 林郑云; 任习东; 孙理华; 郑新民 刊期：2018年第05期
建立有效的动物模型是研究人类疾病演进、开发新型治疗手段的重要方法。非人灵长类动物在进化发育、生理生化及病理方面和人类最接近,是研究人类疾病的理想动物模型。随着基因编辑技术的发展,研究者已经成功建立了多种模仿人类疾病的非人灵长类动物模型。但是CRISPR/Cas9的脱靶效应、嵌合突变以及基因敲入效率较低等突出问题也逐渐引起重视。本...
作者：董维鹏; 王君实; 张少华; 燕炯 刊期：2018年第05期
CRISPR系统作为一种基因编辑工具,自2013年首次应用于哺乳动物以来,凭借其设计简单,耗时短,效率高的优点,在短短四年间飞速发展,其应用已经远远超过了锌指核酸酶和转录激活因子样效应物核酸酶技术,并在分子生物学领域得到广泛应用。基于该系统发展而来的各项技术不断的被发掘,小鼠作为一种基本的实验动物,在CRISPR系统应用中扮演重要角色。目前...
作者：王跃强; Avinash; Bhandoola 刊期：2018年第05期
小鼠（Mus musculus）免疫系统包含种类众多、功能各异的细胞群体。为了研究小鼠免疫系统的发育机制,需要建立高效的遗传操作技术方法。首先选择Cas9敲入小鼠的DN细胞（CD4-CD8-double negative thymocytes）为研究对象,针对GFP和CD4表面抗原基因设计构建了sgRNA（single guide RNA）,使用小鼠逆转录病毒（Murine stem cell virus,MSCV）为载体...
作者：张雪; 陈亮亮; 戴红霞; 张文胜; 任文燕 刊期：2018年第05期
旨在构造neomycin筛选标记的sgRNA表达载体,并利用CRISPR/Cas9技术构建miR-22缺失的小鼠胚胎干细胞,探究miR-22在小鼠胚胎干细胞中的调控作用。首先通过点突变、搭桥PCR等手段,构造neomycin筛选标记的sgRNA表达载体,并获得靶向敲除miR-22的sgRNA表达载体,电转至稳转Cas9的小鼠胚胎干细胞中;其次经药物筛选、基因型鉴定等步骤筛选miR-22纯合缺失...
作者：程浩杰; 张振旺; 谭桂湘; 刘昱翔; 卜会铜; 谭拥军 刊期：2018年第05期
利用CRISPR/Cas9系统在基因FOXA2蛋白质编码区后插入绿色荧光蛋白核酸序列,实现对FOXA2基因开启和关闭的示踪。通过靶向序列选择、Cas9靶向质粒及Donor片段的克隆、细胞转染并进行流式细胞荧光分选、阳性细胞有限稀释、富集培养及单克隆细胞的鉴定和转录翻译水平验证等5个方面,进行实验研究。在编辑的乳腺肿瘤细胞MCF-7中,绿色荧光蛋白有效表达;...
作者：程娜; 蔡针华; 吕加平; 贾震虎; 逄晓阳 刊期：2018年第05期
乳酸菌基因组的CRISPR序列是乳酸菌识别并抵御噬菌体侵染的重要元件,其与cas蛋白共同构成了乳酸菌的获得性免疫系统。而目前对乳酸菌CRISPR序列信息研究较少。因此本文对8株不同来源的保加利亚乳杆菌的CRISPR序列进行了克隆测序,对其重复序列进行了遗传进化分析并预测了二级结构,同时进行了间隔序列的同源性分析。结果显示：8株保加利亚乳杆菌均...
作者：万青青; 李洁; 曾钰; 张明明; 赵心清; 白凤武 刊期：2018年第05期
增强酿酒酵母纤维素酶分泌能力,为提高利用联合生物加工生产纤维素乙醇的效率提供基础。采用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,在分泌表达外切纤维素酶CBH1的酿酒酵母Y294中过表达线粒体核糖体蛋白基因MRP8。与对照菌株相比,过表达MRP8重组酵母的胞外CBH1酶活提高了约80%。实时定量PCR结果分析表明,在MRP8过表达突变体中,CBH1转录水平高于对照菌株,但...
作者：王艺桥; 赵新杰; 牛芳芳; 郭小华; 杨博; 江元清 刊期：2018年第05期
为深化对AtWRKY基因家族中功能尚未被报道成员的认识,探究拟南芥中WRKY转录因子基因在非生物逆境响应中的作用与可能的机制,通过对AtWRKY31进行亚细胞定位以及转录活性分析,并利用qRT-PCR检测AtWRKY31在不同逆境处理1、3和12 h后的表达变化,通过酵母双杂交（Y2H）和双分子荧光互补（BiFC）对其互作蛋白进行了筛选与验证。发现AtWRKY31定位于细胞...
作者：李文宗; 李卫华; 徐妙云; 王磊 刊期：2018年第05期
Fe、Zn、Se等矿物元素在动植物以及人体的生长和发育过程中具有重要作用,为了提高玉米籽粒中Fe、Zn、Se的含量,对叶面喷施Fe、Zn、Se肥及其不同组合,探讨其对玉米成熟籽粒中的Fe、Zn、Se以及其它矿物元素含量的影响。使用不同浓度的硫酸亚铁（Fe肥）、硫酸锌（Zn肥）和亚硒酸钠（Se肥）及其不同组合对京科糯2010（JK2010）进行了叶面喷施处理。...
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