生物工程学报杂志 北大期刊 CSCD期刊 统计源期刊

新世纪微生物学者的一项重要任务——未培养微生物的分离培养

作者：焦瑞身 刊期：2004年第05期

扼要介绍近年来有关分离培养未培养的微生物(Unculturable microorganisms)、扩大生态环境微生物多样性的认识等方面取得的重要进展.首先,是采用非常规的,甚至认为有毒性的电子传递物质,获得了多种新生理型(physiotypes)的纯种微生物.另外,在多种生态域中分离出非同寻常的微生物,扩大了这些生境微生物的多样性的视野,如普遍存在于大洋的浮游细菌...

《生物工程学报》加入“万方数据——数字化期刊群”的声明

刊期：2004年第05期

反馈抑制不敏感邻氨基苯甲酸合成酶基因作为筛选标记基因用于大豆遗传转化研究

作者：陈士云 刊期：2004年第05期

目前广泛采用的抗菌素或抗除草剂基因作为植物转化筛选标记基因可能带来转基因逃逸,因此寻找能够用于植物转化的来源于植物本身的筛选基因是解决这一问题的方法之一.通过从烟草中克隆的邻氨基苯甲酸合成酶基因(ASA2)作为筛选标记基因,并采用氨基酸的类似物5-甲基色氨酸为筛选剂,进行了农杆菌介导的大豆成熟胚尖转化研究.Southern杂交结果表明ASA...

重组炭疽保护性抗原的表达、纯化与生物活性分析

作者：徐俊杰; 董大勇; 宋小红; 葛猛; 李冠霖; 付玲; 庄汉澜; 陈薇 刊期：2004年第05期

构建分泌型表达质粒,在大肠杆菌中实现了重组炭疽保护性抗原(rPA)的分泌型表达.重组蛋白位于细菌外周质,表达量约占菌体总蛋白的10%.以离子交换、疏水层析和凝胶过滤为基础,建立了rPA的纯化工艺,每升培养物可获得约15 mg rPA,纯度可达95%以上.体外细胞毒性试验显示rPA具有较好的生物学活性.用rPA免疫家兔产生的抗血清在体外可抑制炭疽致死毒素的...

苏云金芽孢杆菌伴孢晶体20kb DNA中cry1Ac基因的克隆、高效表达和生物活性研究

作者：胡宏源; 夏立秋; 史红娟; 孙运军; 高必达; 丁学知 刊期：2004年第05期

已经证实苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)伴孢晶体结合20kb DNA,但其序列特异性及作用有待进一步研究阐明.研究了选择性溶解Bt 4.0718菌株Cry1类原毒素所形成的菱形伴孢晶体,从中抽提出与其结合的20kb DNA.经Nde Ⅰ酶切消化后亚克隆构建文库,通过PCR-RFLP及测序筛选出含cry1Ac基因的转化子.然后设计引物PCR扩增出cry1Ac基因的ORF并与...

大肠杆菌—链霉菌高效接合载体的构建及其应用

作者：莫宏波; 白林泉; 王胜兰; 杨克迁 刊期：2004年第05期

以链霉菌质粒SCP2*的衍生质粒pHJLA00为基础,构建了能够在大肠杆菌到链霉菌之间进行高效接合转移的质粒pGH112.pGH112含有在大肠杆菌和链霉菌中复制起始位点,以及分别在大肠杆菌和链霉菌中进行筛选的抗性标记.用pGH112转化Escherichia coli ET12567(pUZ8002)后,与天蓝链霉菌(Streptomyces coelicolor A3(2))、除虫链霉菌(Streptomyces avermitil...

噬菌体抗体库的构建及抗乳腺癌细胞单链抗体的筛选

作者：赵岩; 王清明; 付学奇; 陈吉中; 范国才; 陈惠鹏 刊期：2004年第05期

构建抗人乳腺癌细胞MCF-7的噬菌体单链抗体库,从中筛选MCF-7细胞特异性单链抗体.用MCF-7细胞免疫BALB/C小鼠,取脾脏,提取总RNA,用RT-PCR技术扩增小鼠抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,经重叠PCR(SOE-PCR),在体外将VH和VL连接成单链抗体(scFv)基因,并克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,电转化至大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体超感染,构建噬菌体单链抗体库....

《生物工程学报》第二届编委会名单

刊期：2004年第05期

抗CD20嵌合抗体片段F（ab′）2突变体在大肠杆菌中的高效分泌表达

作者：熊冬生; 郑梦杰; 刘银星; 许元富; 王金红; 杨纯正 刊期：2004年第05期

构建抗CD20嵌合抗体片段F(ab′)2突变体,研究其在大肠杆菌中的高效表达及其表达产物的生物学活性.采用PCR法构建抗CD20嵌合抗体片段F(ab′)2突变体,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用19L发酵罐高密度发酵抗CD20嵌合抗体片段F(ab′)2突变体,采用亲和色谱和分子筛色谱法纯化表达产物,并用SDS-PAGE和薄层激光扫描鉴定纯化产物;采用活细胞间接免疫荧...

应用核酸适配子检测细胞因子的新方法—ELONA法

作者：严馨蕊; 高绪文; 姚立红; 张智清 刊期：2004年第05期

以人肿瘤坏死因子(Humantumor necrosisfactor,hTNF-α)特异性的核酸适配子为检测分子建立了酶联寡聚核苷酸吸附试验(Enzyme-linked Oligonucleotide assay,ELONA)方法,用于hTNF-α的检测.通过SELEX(SystematicEvolution of Ligands bv Exponential Enrichment)方法从随机RNA库中筛选到与hTNF-α特异结合的RNA适配子.根据其序列,用体外转录方法合成...

含庚型肝炎病毒E2基因片段质粒DNA能诱发相当强烈的体液免疫应答

作者：Fethia; Ben; Yebdri; Abderrahmane; AAZAZ; 叶凯; 马辉文; 童立恒 刊期：2004年第05期

研究了庚型肝炎病毒E2(HGV E2)基因片段作为DNA疫苗的可行性.将来自于质粒pThioHis-E2编码HGV E2的基因片段(559bp)亚克隆到质粒pCMV-S中,使之和HBsAg基因位于同一阅读框,形成重组质粒pCMV-S-E2.用纯化的质pCMV-S-E2 DNA注射到昆明小鼠后腿四头肌中来免疫小鼠,同进用pCMV-S作为对照.间隔14天再加强一次免疫.在加强免疫后8天眼眶取血.用E2-GST融...

白喉毒素段的表达纯化与单克隆抗体制备

作者：欧阳晶; 王健伟; 王春晓; 郭丽; 脱厚珍; 崔婷; 洪涛 刊期：2004年第05期

白喉毒素(Diphtheria toxin,DT)段(DTA)是白喉毒素的酶活性区,也是DT类免疫毒素的DTA蛋白及其单克隆抗体在免疫毒素的毒性机理、检测与纯化研究等方面具有重要价值.通过在E.coli中表达了DTA,经Q-SepharoseFF和Ni2+-Sepharose两步层析纯化,得到纯度约为90%的融合蛋白.以DTA为抗原免疫BalB/c小鼠,获得了分泌抗DTA特异单抗的杂交瘤细胞株3B6和3B9....

前列腺干细胞抗原（PSCA）的表达及其特异结合肽的筛选

作者：侯利华; 杜勇; 张晓鹏; 安小平; 陈薇 刊期：2004年第05期

通过反转录-PCR从人前列腺癌细胞中克隆了前列腺干细胞抗原(PSCA)基因,在大肠杆菌中利用pQE30载体对截断型PSCA基因进行了可溶性表达.蛋白纯化后,利用噬菌体随机展示12肽库筛选了PSCA蛋白的特异结合肽,通过与EGFP蛋白的耦联表达验证了结合肽的特异性.此特异结合肽的获得,为进一步研究针对PSCA的前列腺癌靶向免疫治疗奠定了基础.

一种新抗癌药物Epothilone及其定名

作者：柯为 刊期：2004年第05期

Epothilone是由某些细菌如黏细菌(Myxobacterium)、黏球菌(Myxococcus)、纤维堆囊菌(Sarangium cellulosum)产生的酮类化合物，它能强烈抑制乳腺癌、直肠癌等细胞株，其抗癌机制与著名的紫杉醇(taxol)相类似。从230L纤维堆囊菌发酵液中可提取46g epothilone，把该产物归为抗肿瘤抗生素之行列也是可行的。

PD-1胞外段cDNA在真核细胞的表达与其功能鉴定

作者：贺宇飞; 张桂梅; 王小红; 张慧; 袁野; 李东; 冯作化 刊期：2004年第05期

PD-L/PD-1是参与肿瘤免疫逃避的一条抑制性信号途径.为了用可溶性的PD-1受体阻断PD-L-PD-1的相互作用,将小鼠PD-1胞外段(aal-aa167)作为独立可溶性分子进行了真核表达,并对其功能进行鉴定.构建了编码小鼠PD-1胞外段cDNA(sPD-1)的真核质粒表达载体pPD-1A和编码sPD-1-GFP重组蛋白的真核质粒表达载体pPD-1B;细胞转染实验表明其表达产物主要是分泌到...