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工业蛋白水解酶快速检测方法的建立与初步应用

作者:宋鹏; 程磊; 田康明; 王正祥 天津科技大学生物工程学院; 工业发酵微生物教育部重点实验室; 天津300457; 天津科技大学化工与材料学院; 天津300457
蛋白水解酶   酶活检测   大豆分离蛋白   氟硼荧染料   荧光标记  

摘要:蛋白水解酶是一类重要的工业酶制剂,快速检测蛋白水解酶活力对新蛋白酶的发现、生产与应用极为重要。基于荧光共振能量转移原理,用氟硼荧荧光素标记大豆分离蛋白,以此为底物建立了一种快速检测蛋白水解酶活力的新方法。运用此方法检测5种工业蛋白酶,酶活在0.025~0.4U/mL与荧光值呈现良好的线性关系,检测限范围为1.1×10^-4~1.4×10^-4U/mL,定量限范围为3.7×10^-4~4.5×10^-4U/mL,相比国标福林法灵敏度提高20000倍以上。该方法灵敏度高、操作简便,在蛋白水解酶快速、微量检测及新型蛋白水解酶开发中具有应用潜力。

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