2006年日本研究人员山中伸弥等人利用逆转录病毒载体向成体细胞转入四个基因(Oct4,Sox2.Klf4和c-Myc),重编程小鼠胚胎成纤维细胞和成体尾巴成纤维细胞(它们都是普通的成体细胞),结果这些重编程的成体细胞呈现出类似小鼠胚胎干细胞的特征。因此,
作者:陈凤超; 陈民才; 颜彤彤; 曾燕; 杨俊革 期刊:《中国医药导报》 2016年第30期
目的 观察鼠胚胎成纤维细胞三维培养修复大鼠全层皮肤缺损的效果,并对其机制进行分析。方法 采用组织块法培养鼠胚胎成纤维细胞,将鼠尾胶原溶液和以血清重悬的鼠胚胎成纤维细胞溶液混合后形成凝胶构建组织工程皮肤,移植于大鼠背部全层皮肤缺损创面。实验组30只全层皮肤缺损大鼠采用组织工程皮肤进行修复。对照组30只全层皮肤缺损大鼠不做任何处理。两组创面分别进行HE染色和免疫组织化学染色,计算微血管密度,观察其愈合过程。结果 ...
作者:王亚丹; 虎啸; 丁雪粉; 朱邯豫; 赵玉玺; 吕海淼; 彭展; 王新庄 期刊:《中国细胞生物学学报》 2018年第08期
该研究以14-18天胎兔为试验对象,体外分离培养扩增原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs),观察其形态变化及集落形成过程。用AKP染色(alkaline phosphatase staining)及分子生物学等方法鉴定兔PGCs,结果均为阳性,将兔PGCs分别接种于鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast,MEF)、兔胚胎成纤维细胞(rabbit embryo fibroblast,REF)制成的不同密度饲养层来确定种属跟密度对体外培养兔PGCs的影响。结果显示,兔PGCs接种...
作者:刘永刚; 韩兵; 陈地龙; 李芳菲; 王亚平; 王莎莉 期刊:《解剖学报》 2005年第03期
目的探讨以人胚胎成纤维细胞为饲养层分离、培养人胚胎生殖细胞的方法和条件.方法分离、培养3~4月胚胎成纤维细胞,取3~15代细胞经丝裂酶素处理后铺板备用;分离6~11周胚胎原始生殖细胞,将其置于人胚胎成纤维细胞饲养层上,在含生长因子、分化抑制因子的培养体系中培养胚胎生殖细胞;用免疫细胞化学方法检测胚胎生殖细胞表面标志SSEA-1和SSEA-4;钙-钴法检测碱性磷酸酶活性;RT-PCR检测转录因子Oct-4的表达.结果人胚胎成纤维细胞可连...
作者:YonggangLiu; BingHan; ShaliWang; YapingWang 期刊:《中国组织化学与细胞化学》 2004年第03期
作者:魏亚茹; 刘娣; 关伟军; 李景芬 期刊:《黑龙江畜牧兽医》 2005年第06期
用组织块法对石歧杂鸡胚胎成纤维细胞进行原代和传代培养,探讨禽类胚胎成纤维细胞适宜的培养模式.成功获得较均一的稳定的细胞群体,并成功地对细胞进行了冷冻保存和复苏.对于进行大规模的动物细胞培养具有重要的指导意义.
作者:曹代男; 段好冉; 魏玉峰; 葛研; 龚世平 期刊:《动物学》 2018年第05期
红耳龟(Trachemysscriptaelegans)是世界上最危险的100种入侵物种之一,该种对环境适应能力极强。目前尚未见有关红耳龟细胞体外培养的研究报道,本研究旨在探索和建立快速稳定的红耳龟胚胎成纤维细胞分离培养体系,为进一步从细胞层面研究红耳龟对极端环境的耐受机制提供材料和方法支撑。本研究取发育至13或14期的红耳龟胚胎,采用酶消化法和差速贴壁法获得红耳龟胚胎成纤维细胞,在体外进行原代培养和传代培养;采用噻唑蓝(MTT)比...
作者:袁国林; 邹萍; 程范军; 刘凌波; 伍晓菲; 王红祥 期刊:《中国实验血液学》 2004年第06期
为了探讨胚胎成纤维细胞与含白血病抑制因子(LIF)的培养体系对鼠骨髓造血祖细胞体外扩增效应,并观察其对造血表面归巢相关黏附分子VLA-4(CD49d)、VLA-5(CD49e)、LFA-1(CD11a)、HCAM(CD44)、L-selectin(CD62L)的表达影响,将丝裂霉素C灭活的鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和含LIF的培养体系与鼠骨髓单个核细胞(BMMNC)体外共同培养7天,检测BMMNC细胞总数、CFC、Sca-1+细胞百分率、细胞凋亡率和Sca-1+细胞表面黏附分子CD49d、CD49e、CD11a、CD4...
作者:张鹏飞; 张硌; 陆琤; 周晨辰 期刊:《中国医学装备》 2017年第08期
目的:建立PLEKHQ1基因敲除小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)永生化细胞系,为全面研究PLEKHQ1基因功能提供细胞实验材料。方法:采用慢病毒感染的方法将猿猴病毒40(SV40)大T抗原基因导入已鉴定出基因型的MEF中,建立永生化细胞系;利用聚合酶链反应(PCR)检测SV40大T抗原基因在MEF中的整合情况,利用反转录PCR及凝胶成像的方法观察SV40大T抗原基因在MEF中的表达。结果:SV40大T抗原基因已整合至MEF中,且此类MEF已扩大培养及稳定传代半年之...
作者:梁晶冰; 雷永红; 付小兵; 李存保; 董晓红 期刊:《中华实验外科》 2006年第09期
目的 建立小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)滋养层,用于胚胎干细胞的培养。方法 取12.5~14.5胎龄的胎鼠分离原代成纤维细胞,在37℃时,用0.25%胰蛋白酶(含0.02%EDTA)消化组织块5min,培养3d后传代。采用20mg/L丝裂霉素C处理胚胎成纤维细胞2~4h,或γ-射线21Gy照射胚胎成纤维细胞1h后制备出的滋养层细胞,均能有效地抑制胚胎干细胞的分裂,且不影响其活力。结果 胎鼠分离原代成纤维细胞经20mg/L丝裂霉素C处理或γ-射线21Gy照...
作者:刘梅冬; 张华莉; 龚环宇; 陈广文; 王慷慨; 鄂顺梅; 肖献忠 期刊:《湖南医科大学学报》 2006年第02期
目的:建立HSF1^-/-,HSF1^+/+两种基因型小鼠胚胎成纤维永生化细胞系,为HSF1的功能研究提供实验模型。方法:用脂质体介导的基因转染法将pSV3neo质粒导入HSF1^-/-,HSF1^+/+两种基因型小鼠胚胎成纤维细胞,经G418筛选,抗性克隆扩大培养,建立永生化细胞系;用PCR检测两种细胞株中目的基因的整合,用RT—PCR法鉴定SV40T基因在转染细胞中的表达;用Western blot检测所建细胞株的诱导型热休克蛋白70的表达情况。结果:有3个细...
作者:陈颖; 逄大欣; 车东升; 赵增明; 赖良学; 欧阳红生 期刊:《吉林农业大学学报》 2007年第03期
选取枫径猪胚胎,采用胶原酶消化培养法制备猪胚胎成纤维细胞,经数次传代培养及冷冻复苏试验表明胚胎成纤维细胞仍具有正常的传代能力。在体外培养至15代后成纤维细胞核型正常,符合体细胞克隆转基因的要求。用PCR方法建立了枫径猪胚胎成纤维细胞性别鉴定的反应体系,对其中6株细胞进行了性别鉴定。
作者:丁国杰; 王丹娜; 柴华; 任德强 期刊:《畜牧兽医科技信息》 2007年第04期
随着畜禽资源保存,核移植、转基因动物胚胎学、遗传工程等研究工作的发展,猪成纤维细胞培养工作越来越受到重视。本试验采用胰酶消化法和组织块法培养了大量优质的猪胚胎成纤维细胞,并成功进行了冻存和复苏,建立了一套较完备,快速的猪胚胎成纤维细胞的培养模式。
作者:许冲; 黄汉光; 崔红艳; 常羽; 苏瑛 期刊:《黑龙江畜牧兽医》 2016年第05期
为了探讨雷州黑鸭成纤维细胞的分离与培养,为雷州黑鸭的育种在细胞学方面提供依据,也为以后禽类细胞建库进行大规模细胞培养以保存种质资源提供技术指导,试验以11~16胚龄雷州黑鸭为试验材料,采用组织块及胰酶消化法对鸭胚成纤维细胞进行原代和传代培养。结果表明:在培养瓶的底部得到大量贴壁细胞,细胞呈梭形或扁平星形且排列规则,得到体外培养的雷州黑鸭成纤维细胞。说明通过不同胚龄、不同方法的分离培养,发现雷州黑鸭在12~13胚...
作者:张立春; 张国梁; 于永生; 朴海仙; 曹阳; 金海国 期刊:《黑龙江畜牧兽医》 2012年第03期
为了获得高质量的草原红牛胎儿成纤维细胞,试验以发育40 d的草原红牛胎儿为材料,采用组织块贴壁法及胶原酶消化法分离纯化草原红牛胎儿成纤维细胞,并绘制生长曲线,再以SRY基因为模板设计性别鉴定引物,通过对已知性别草原红牛血液基因组PCR扩增检验所设计引物的性别特异性,最后采用基因组PCR方法鉴定分离得到的成纤维细胞的性别。结果表明:成功分离纯化出草原红牛胚胎成纤维细胞,经基因组PCR检验该细胞株性别为雄性。
作者:成钢; 罗赛群; 盖楠; 熊德慧; 李荣; 胡维新 期刊:《中国实验动物学报》 2010年第04期
目的建立东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞系,为全面研究东方田鼠抗日本血吸虫机制以及开展不同动物成纤维细胞间比较研究奠定基础和提供细胞实验材料。方法运用脂质体介导的基因转染法将pSV3neo质粒导入第3代东方田鼠胚胎成纤维细胞,经G418筛选抗性克隆并扩大培养,建立永生化细胞系;用PCR检测细胞株中SV40T基因的整合,RT-PCR鉴定SV40T基因在转染细胞中的表达;绘制东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞生长曲线。结果阳性细胞克隆已扩大培养...
作者:徐兰; 刘敏英 期刊:《中国细胞生物学学报》 2009年第04期
在本专题的第2期,我们己向读者介绍了如何制备饲养层细胞来培养小鼠胚胎干细胞。实际工作中,陆续有来自全国各地的科研工作者来电询问饲养层的制备和培养等问题,这些问题主要分为两类:一,饲养层细胞的培养出现污染、细胞死亡、增殖停滞等;二,用白行制备的小鼠胚胎成纤维细胞作饲养层培养胚胎干细胞效果不理想,特别当培养人胚胎干细胞时,干细胞状态不好却不知症结在哪里。
作者:周结学; 刘东; 郑克立; 邓春华; 文任乾; 唐立新; 马春杰 期刊:《中国组织工程研究》 2008年第34期
背景:鼠胚成纤维细胞经丝裂霉素C处理或γ射线照射阻断其有丝分裂后,铺层的细胞可保持活力但不增殖,并能够在生长过程中产生促进胚胎干细胞生长的因子和抑制胚胎干细胞分化的因子,但其生命期有限。目的:探讨分离小鼠胚胎成纤维细胞的最适胚龄与培养条件,以及用其制备细胞饲养层的效果。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-11/2006--07在广东省计划生育专科医院实验室完成。材料:清洁级昆明系孕7.5,10.5,13.5,1...
作者:岑妍慧 期刊:《中国组织工程研究》 2009年第40期
背景:胰腺干细胞具有分裂与高度分化潜能的特性,可以在体外进行成功分离和培养,但体外如何对其进行有效扩增是亟待解决的问题。目的:在胎鼠成纤维细胞饲养层条件下体外传代培养小鼠胰腺干细胞。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-07/2008-01在广西中医学院基础医学院细胞无菌培养室完成。材料:SPF级新生昆明小鼠20只,孕14d昆明小鼠多只,均购自广西中医学院实验动物中心。方法:取SPF级新生昆明小鼠的胰腺组织,Ⅴ型胶原酶...
作者:刘峰; 雷闽湘; 陈慧玲 期刊:《中国组织工程研究》 2010年第23期
背景:小鼠胚胎干细胞系SF1-G是由雌性C57BL/6小鼠与雄性M.spretus小鼠交配后,取桑葚胚期胚胎在STO饲养层细胞上分离培养获得,STO细胞较昂贵,而由小鼠胚胎成纤维细胞制备的饲养层细胞不仅取材容易,而且形成胚胎干胞的克隆率、维持胚胎干细胞正常核型的能力均比STO细胞要好一些,因此,建立一种适宜SF1-G细胞扩增的培养体系,保持其未分化状态生长是充分利用胚胎干细胞资源的前提。目的:建立有效的小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及胚胎...