摘要：背景：鼠胚成纤维细胞经丝裂霉素C处理或γ射线照射阻断其有丝分裂后，铺层的细胞可保持活力但不增殖，并能够在生长过程中产生促进胚胎干细胞生长的因子和抑制胚胎干细胞分化的因子，但其生命期有限。目的：探讨分离小鼠胚胎成纤维细胞的最适胚龄与培养条件，以及用其制备细胞饲养层的效果。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2005-11／2006--07在广东省计划生育专科医院实验室完成。材料：清洁级昆明系孕7．5，10．5，13．5，16．5，19．5d雌鼠各5只。方法：无菌取上述各孕龄小鼠胚胎分离鼠胚成纤维细胞，调整细胞浓度为1×10^7L^-1、1×1097L^-1、1×10^11L^-1，胰酶消化传代。当胚胎成纤维细胞生长并相互接触时，加入丝裂霉素C作用2-4h，用无钙无镁PBS配制的胰蛋白酶液消化2-5min，终止后用吸管吹打皿底，使细胞充分分离，以含10％胎牛血清的DMEM液调整细胞浓度为1×10^8L^-1，将该悬液移入明胶处理的培养皿内常规培养，制备鼠胚成纤维细胞饲养层。主要观察指标：胎龄、细胞浓度、传代次数对鼠胚成纤维细胞生长增殖的影响。不同胎龄鼠胚成纤维细胞饲养层制备效果。结果：7．5-19．5d鼠胚均可分离出成纤维细胞，但7．5d，10．5d鼠胚分离所得成纤维细胞数量少，寿命短，且混有大量杂细胞；13．5d鼠胚分离所得成纤维细胞数量多，增殖快，所含杂细胞少：16．5～19．5d鼠胚分离所得成纤维细胞生长状态不良，增殖缓慢，杂细胞较多。同等条件下与1×10^7L^-1、1×10^11L^-1浓度比较，1×10^9L^-1浓度的鼠胚成纤维细胞生长状况良好，铺层时间适中，细胞寿命最长（P〈0.05）。以13．5d鼠胚成纤维细胞经初代培养后传4代，成功建立了成纤维细胞株，相同条件下14代细胞形态、体积、生长状况无明显差别。7．5～19．5d鼠胚成纤维细胞制备的饲

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