作者:杨立昌; 乙引 期刊:《生物学通报》 2005年第02期
马铃薯Y病毒(PVY)属病毒大多以经济作物为寄主,是农作物、牧草、园艺和香料作物的主要病害,危害极大[1].通常,对该属病毒的鉴定和检测使用ELISA法.
作者:张蔚; 丁晶真 期刊:《生物资源》 2007年第01期
根据棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpa armigera single nucleocapsid mucleopolyhedrovirus,HaSNPV)gp41基因的序列,设计引物,引入适当的酶切位点,通过PCR的方法扩增目的片段。将扩增出的基因片段克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组质粒并转化至大肠杆菌中,经IPTG诱导表达。纯化蛋白产物并免疫家兔产生抗血清。该抗血清可与原核表达的His—GP41融合蛋白及在感染的昆虫细胞中表达的GP41蛋白发生特异性免疫反应。该...
作者:申文娟; 张凯; 肖宏; 李冉辉 期刊:《中国病原生物学》 2019年第10期
目的纯化铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)溶血素共调节蛋白(Hemolysin co-regulated protein,Hcp)并制备抗血清。方法从NCBI网站查到铜绿假单胞菌Hcp蛋白序列,采用Signal IP 4.1预测定位及信号肽情况;登录Swiss model网站预测三级结构情况;登录www.iedb.org网站预测其B细胞表位。根据Hcp基因序列设计特异性引物,以铜绿假单胞菌基因组DNA为模板,PCR扩增Hcp基因,经双酶切后连到pET28a。将重组质粒pET28a-Hcp转化大肠埃希菌BL21...
作者:张辉; 宋玲玲; 杨宏军; 王洪梅; 武建明; 候佩莉; 何洪彬; 王立群 期刊:《家畜生态学报》 2013年第01期
gD糖蛋白是IBRV感染细胞的主要分子,在病毒吸附和侵入宿主细胞中发挥着重要作用。利用IBRV基因组DNA为模板,经生物学软件DNAstar分析主要抗原区,PCR扩增gD基因786bp片段,定向连接到pET32a(+)表达载体中,筛选阳性克隆转化BL21(DE3)表达茵中,IPTG诱导表达部分可溶的重组蛋白。Ni—NTA非变性纯化系统纯化蛋白,纯化的蛋白免疫新西兰兔制备抗血清,利用间接ELISA法检测抗血清效价为1:6400;同时以该血清进行血清中和病毒实...
作者:吴悠; 马宇驰; 赵祎云; 隋国燕; 石辛月; 唐峰 期刊:《畜牧与兽医》 2019年第10期
为获得鸡类固醇激素合成急性调节蛋白结构域3(STARD3)胞外域融合蛋白的特异性抗血清,采用人工合成方法获得鸡STARD3胞外域基因,利用pGEX6P-1质粒及BL21(DE3)进行原核表达,将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,利用Western blot及间接ELISA方法测定抗体特异性和效价。结果显示:获得了STARD3胞外域融合蛋白的特异性抗血清,效价大于1∶6 400。本试验为研究鸡STARD3蛋白功能奠定了基础。
作者:孙春光; 郑玲玲 期刊:《现代牧业》 2010年第04期
本实验通过细菌分离和利用F18大肠杆菌抗血清进行凝集反应的实验确诊了一例疑似子猪水肿病,现将具体情况加以总结以期供其他兽医工作者参考.
作者:张婷; 程均福; 李国明 期刊:《公共卫生与预防医学》 2014年第06期
目的对造成婴儿腹泻的粪便标本中所分离出的一株菌株进行鉴定。方法使用VITEK 2和志贺菌血清以及大肠埃希菌血清对此株菌进行生化和血清学鉴定。毒力基因和药敏试验以及对菌株进行多位点序列分析找出它与大肠杆菌和志贺菌之间的基因相关性。结果生化鉴定为大肠埃希菌,此菌对侵袭性大肠埃希菌O29以及痢疾志贺菌1型血清都凝集。检测出ipa H基因。多位点序列分析显示属于ST38这一簇。结论此菌株是侵袭性大肠埃希菌。
作者:李俊平; 杨承槐; 李启红; 夏业才; 黄建华; 陈永忠 期刊:《中国兽药》 2011年第09期
用网状内皮组织增生症病毒(REV)HA9901株免疫SPF鸡,无菌采血制备鸡抗REV血清。通过ELISA、IFA、AGP、HI等方法对制备的血清进行检测,未检出禽类常见的其他17种(或亚型)病毒的抗体,该血清具有良好的特异性。通过测定,该血清用于间接免疫荧光试验(IFA)的效价为1:2000,用于IFA检测REV的染色效果与REV单抗(11818和11854的混合物)相当。试验结果表明,该批血清1000倍稀释可作为一抗,用于REV的间接免疫荧光检测。
作者:李公美; 胡静涛; 李玉梅; 李茂辉; 闫金明; 刘可越; 钱爱东 期刊:《中国兽药》 2012年第12期
采用PCR方法扩增了吉林白鹅α干扰素(JL-GolFN—α)成熟肽编码序列,将IFN—α片段定向插入原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组质粒pGEX—IFN—α,将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)的感受态细胞里,在IPTG诱导下表达可溶性的融合蛋白(GST—IFN—α)。SDS—PAGE、Western—blot检测结果表明,重组吉林白鹅IFN—α融合蛋白(rJL—GoIFN-α)的分子量大小约为43ku,表达量占菌体总蛋白的25%。重组吉林自鹅仅干扰素,经谷胱甘肽Sepbar...
小鹅瘟为小鹅的急性病毒性传染病。俗称为“剥肠瘟”它破坏鹅的免疫系统,使之抵抗力降低。死亡率高达50-80%。其主要特征是腹泻,小肠粘膜大片坏死、脱落,积集于小肠后部形成特征性的栓子堵塞肠腔。
作者:申会刚; 周继勇; 陈庆新; 郭军庆; 陈婷飞; 商绍彬; 李增魁 期刊:《中国兽医学报》 2005年第03期
为研究猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)Rep基因在PK15细胞中的表达特性,通过PCR方法克隆了PCV2杭州株(HZ0201)Rep基因全长945 bp片段,与真核表达载体pCI-neo构建为重组质粒pCI-PCV2-Rep.pCI-PCV2-Rep质粒转染PK15细胞后48 h,通过RT-PCR可检测到PCV2 Rep mRNA的转录;用猪PCV2多抗血清作间接免疫荧光试验,可检测到Rep基因表达产物.在表达量低的细胞中,PCV2 Rep蛋白主要位于PK15的细胞浆,在表达量高的细胞中,细胞浆和细胞核中均含有大量的Rep蛋...
作者:张秀华; 刘思国; 王春来; 郭设平; 郭洋; 邵美丽; 宫强; 彭永刚; 沈国顺 期刊:《中国生物工程》 2005年第11期
利用PCR技术,以牛型分枝杆菌(M.bovis)Vallee菌株的全基因组DNA为模板,扩增出了一条600bp的MPB83基因片段,将其克隆至pMD18-T载体中,经核苷酸序列测定确证后,KpnI/EcoRI双酶切,然后亚克隆到原核表达载体pET30a的相同酶切位点,构建表达质粒pET-MPB83,将鉴定的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后SDS-PAGE检测表达情况,重组质粒pET-MPB83在30kDa处有一特异表达带,与预计大小相符.经M柱纯化后,Western blot检测纯化蛋白具有免疫...
作者:赵丹慧; 张艳; 袁越; 李成文 期刊:《中国生物工程》 2005年第07期
骨形态发生蛋白-2是骨科研究领域的重要生物蛋白.用重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP2)与BSA连接成复合物作为免疫原,免疫家兔制备出多克隆抗血清.分别用免疫沉淀法和Sepharose 4B-BSA反向免疫亲和吸附法去除抗血清中载体BSA抗体.用盐析法和蛋白层析法纯化出抗rhBMP2抗体.研究发现,家兔产生高效价抗体的最佳时间为14~16周,从rhBMP2抗体的特异性、相对纯度及回收率综合分析,免疫沉淀法去除BSA抗体优于反相亲和吸附法.
作者:高亚萍; 杨光; 丁红梅; 柳川; 沈倍奋; 邵宁生 期刊:《生物技术通讯》 2004年第05期
金黄色葡萄球菌分泌的RAP蛋白通过其靶分子TRAP蛋白的磷酸化来激活RNAⅢ的转录.用TRAP蛋白免疫家免得到效价为l:128 000的多抗血清.纯化后的抗体可以特异识别不同菌株的TRAP蛋白,并抑制TRAP蛋白磷酸化,降低金黄色葡萄球菌外毒素的分泌.
作者:谢飞; 涂向东; 兰风华; 朱忠勇 期刊:《中华检验医学》 2004年第12期
目的克隆表达重组人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶(ALT1)蛋白及制备抗血清,探讨建立ALT1特异性检测方法思路。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增人ALT1 cDNA,插入pGEX-2T,构建原核表达载体pGEX-2T—ALT1,并转人大肠杆菌进行表达。SDS-PAGE,活力测定和活性染色鉴定表达产物。表达产物免疫小鼠所得抗血清对天然ALT1,重组ALT1及重组ALT2进行Western blot分析。结果重组质粒测序和酶切结果显示ALT1基因已经成功克隆到pGEX-2T载体。SDS-...
作者:何广武; 舒畅; 沈浩; 张敏跃 期刊:《医学研究生学报》 2004年第06期
目的:制备FF456抗体,并研究FF456在正常肝组织和肝癌组织中的表达情况和分布. 方法:将FF456全长基因克隆于pCDNA3.1(-)真核表达质粒,直接免疫6~8周龄雌性BALB/c小鼠,并对DNA的免疫条件进行优化.同时通过原核表达体系表达一段含FF456特异序列的肽段.利用该肽段作为抗原,检测DNA免疫得到的FF456抗血清的滴度及特异性,最后利用FF456抗血清对正常肝组织和肝癌组织进行免疫荧光染色. 结果:western blotting及ELISA结果表明,DNA免疫得到...
作者:白钢; 王玉嬿; 马洪周; 李海燕; 杨文博 期刊:《林业科学》 2005年第02期
以松材线虫的粉碎虫体免疫家兔制备抗血清,通过免疫印迹考察抗血清的特异性.利用固相松材线虫抗原和游离线虫抗原同线虫抗体相竞争,建立竞争型ELISA法用于疫木中松材线虫的分析.该方法可以直接检测出10 mg的木屑中0.1μg微量的线虫蛋白,约7条线虫的存在.利用该方法对20个不同地区、树种及类型的松材样品进行检测,疫木中松材线虫的检出率为100%,但拟松材线虫也呈现了一定的交叉反应.研究结果表明,以松材线虫抗原蛋白为指标的免疫学检...
作者:冷小茜; 叶欢; 杜浩; 李创举; 危起伟 期刊:《水生生物学报》 2018年第04期
卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vtg)被认为是一种理想的雌激素和类雌激素标志物,通过建立一种中华鲟Acipenser sinensis血浆Vtg水平的检测方法,进而开发一项中华鲟性腺成熟度的诊断技术。首先通过RACEPCR方法扩增得到中华鲟vtg基因cDNA序列,氨基酸序列分析预测其蛋白分子量大小为196 kD。构建Vtg功能区段融合原核表达载体pET32a(+)-vtg并表达纯化重组蛋白,并以重组蛋白免疫兔子获得多克隆抗血清,Western blotting检测显示抗血清的特异性...
作者:宋华丽; 孙效迎; 郭正伟; 裴超 期刊:《河南水产》 2018年第06期
草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)隶属于呼肠孤病毒科,水生呼肠孤病毒属,该病毒主要引起草鱼在鱼种阶段发生出血病。GCRV基因组由11个分节段的双链RN段组成,VP56是由草鱼呼肠孤病毒GCRV-HN14株S7节段编码的蛋白。本实验对草鱼呼肠孤病毒梯度稀释后,注射草鱼,按照Reed-Muench法测定该病毒的LD50,并检测了抗VP56抗血清对草鱼呼肠孤病毒的中和能力。实验结果显示,该病毒悬液作10^-3.3稀释后,每尾草鱼注射0.1mL,可以使50%的草...
作者:訾静; 王军; 高磊; 张琨; 张绪; 万一 期刊:《微生物学免疫学进展》 2017年第05期
目的将铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)中的调控蛋白LasR在原核系统中进行表达,制备LasR抗血清,为PA中las调控系统的研究奠定基础。方法以PA模式菌株PAO1全基因组为模板,PCR扩增lasR基因,PCR产物用Bam HI/EcoRI双酶切连接至p GEX-4T-1载体,获得重组表达载体p GEX-4T-1-lasR;PCR产物经Nco I/Xho I双酶切连接至p ET28a载体,获得重组表达载体p ET28a-lasR。将重组表达载体分别转化至大肠杆菌感受态细胞BL21中,分别以异丙基...