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鸡源产气荚膜梭菌重组酶聚合酶扩增检测方法的建立

作者：许笑; 王艳华; M; Umar; Zafar; Khan; 王恒; 蔡建平 刊期：2019年第12期

为建立鸡源产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的快速诊断方法,本研究以产气荚膜梭菌α-毒素的编码基因plc为基础设计、合成引物和探针,并以real-time PCR的方法进行验证,建立了鸡源产气荚膜梭菌的重组酶聚合酶扩增(RPA)检测方法。该方法可在38℃、25 min内对产气荚膜梭菌的α-毒素编码序列进行快速特异性扩增,最低检测限量可达1×10^1copies/μ...

基于不同重组小反刍兽疫病毒N蛋白建立的双抗原S-ELISA抗体检测方法的比较研究

作者：孙雨; 宋晓晖; 肖颖; 李秀梅; 吕园园; 王睿男; 蒋菲; 孙航; 杨林; 王传彬 刊期：2019年第12期

为探索建立小反刍兽疫病毒抗体双抗原夹心ELISA方法的原料,本研究成功使用pET-30a与p ET-32a两个不同原核载体分别表达与纯化了小反刍兽疫病毒核衣壳蛋白N抗原。使用不同原核载体表达的N抗原组合建立的双抗原夹心ELISA抗体检测方法、相同原核载体表达的N抗原组合建立的双抗原夹心ELISA抗体检测方法、N抗原包被建立的抗体间接ELISA检测方法以及血...

鹿流行性出血热病毒实时荧光RT-RPA检测方法的建立

作者：林彦星; 花群俊; 史卫军; 黄超华; 曹琢福; 张彩虹; 阮周曦; 曾少灵; 杨俊兴; 花群义 刊期：2019年第12期

为建立一种快速检测鹿流行性出血热病毒(EHDV)的实时荧光RT-RPA检测方法,本研究根据EHDV保守的非结构蛋白NS1基因(segment 5)设计特异性引物和探针,建立了敏感、快速的EHDV核酸实时荧光RT-RPA检测方法。结果显示,该方法特异性强,能准确检测EHDV核酸,与蓝舌病病毒(BTV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、口蹄疫病毒(FMDV)等病原核酸无交叉反应;敏感性高,...

牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒双重Nano-PCR检测方法的建立与应用

作者：刘占悝; 刘泽余; 李智杰; 孙飞雁; 郭利 刊期：2019年第12期

为了对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)同时进行检测,提高检测效率,根据IBRV gE基因序列(GenBank登录号:L27212.1)和BVDV 5′端非编码区序列(GenBank登录号:AY-278459.1)的保守区域,分别设计1对IBRV的特异性引物和1对BVDV的特异性引物,建立用于IBRV和BVDV的双重纳米PCR(Nano-PCR)检测方法。特异性试验结果显示,该方法对牛副...

猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立与应用

作者：张杰; 刘雪威; 白娟; 宋中宝; 姜平 刊期：2019年第12期

本研究根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因序列,设计出一对引物,建立了检测该病毒的SYBR GreenⅠ染料荧光定量PCR方法。此法特异性高,与猪流行性腹泻(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、塞内卡谷病毒(SVV)、脑心肌炎病毒(EMCV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)均无交叉反应;采用不同滴度的PRRSV测定,当Ct≤32且有明显的指数扩增曲线,判定...

抗牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白中和活性单克隆抗体的制备及鉴定

作者：洪家兵; 刘文晓; 王萍; 李永清 刊期：2019年第12期

为了制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gD蛋白的单克隆抗体,本研究用纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,然后以纯化的昆虫细胞表达的gD蛋白作为ELISA包被抗原筛选杂交瘤细胞株。结果获得3株能够稳定分泌抗gD蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1B4、3E8和4F12。采用夹心ELISA鉴定单克隆抗体的Ig亚类,结果显示,1B4、3E8为IgG2b,4F12为IgG1。免疫印迹试验与间接免...

犬圆环病毒Rep基因SYBR GreenⅠreal-time PCR方法的建立及应用

作者：韩知晓; 杜倩; 汪伟; 辛佳亮; 闫修魁; 梁莹莹; 朱远致; 何玄; 曹亮; 孙文超; 胡传活; 郑敏 刊期：2019年第12期

为建立一种检测犬圆环病毒的快速诊断方法,本试验拟采用普通PCR方法扩增犬圆环病毒Rep基因,将目的基因克隆到T-Vector pMD19 (Simple),以测序正确的重组质粒作为模板,建立针对犬圆环病毒Rep基因的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法,并对该方法进行敏感性、特异性和重复性试验。结果显示,Ct值与标准品在6.18×10^9~6.18×10^2copise/μL范围内呈良...

过表达TPL2蛋白BHK21细胞系的建立及其初步应用

作者：郝军红; 闫鸣昊; 张大俊; 张学刚; 申超超; 徐国伟; 李国丽; 张克山; 郑海学; 刘湘涛 刊期：2019年第12期

利用慢病毒表达系统将TPL2(COT和MAP3K8)质粒稳定整合在乳仓鼠肾细胞(baby Hamster Syrian kidney)BHK21细胞基因组染色体上,建立稳定表达TPL2的BHK21/TPL2细胞系。构建TPL2质粒,通过基因合成将TPL2基因和慢病毒载体Lv-PCDH连接,得到重组慢病毒载体Lv-TPL2。通过嘌呤霉素筛选得到的阳性细胞株BHK21/TPL2即为稳定表达TPL2蛋白的BHK21细胞株。运用...

鸡堆型艾美耳球虫gam56基因的克隆及其表达产物的免疫原性分析

作者：华恩玉; 朱玉; 汪飞燕; 孔令明; 刘丹丹; 候照峰; 许金俊; 陶建平 刊期：2019年第12期

为了研究堆型艾美耳球虫gam56基因的功能,提取堆型艾美耳球虫(扬州株)卵囊DNA,应用PCR扩增gam56基因,克隆至pGEM-T-Easy载体;测序、密码子优化后连接至pET-28a质粒,构建pET-28aEagam56表达载体,转化至大肠杆菌BL21;重组菌经酶切和测序鉴定后诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定。结果显示:gam56基因全长1 323 bp,编码440个氨...

猪链球菌病与副猪嗜血杆菌病二联四价灭活疫苗的研制

作者：于宁卫; 张力引; 周红; 范红结; 蔺辉星 刊期：2019年第12期

为研制安全有效的猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病二联四价灭活疫苗,将分离的猪链球菌(Streptococcus suis,SS)血清2型SS2-NT株、9型SS9-CZ株与副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)血清4型HPS4-YC株、5型HPS5-SQ株菌液灭活后稀释至所需浓度,再与Montanide GEL 02 PR佐剂混合,制备猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病二联四价灭活疫苗。将制备的疫苗接种2...

河北省鸡肉中四种主要致病菌的多重定量PCR检测方法的建立与应用

作者：刘娜; 李慧芳; 姬晶晶; 杨子龙; 宋阔阔; 张欣; 王瑾; 张玉华; 刘彦威; 刘利强 刊期：2019年第12期

为了建立鸡肉中沙门菌、金黄色葡萄球菌、奇异变形杆菌和肠球菌等病原菌的快速检测方法。设计4种病原菌特异引物,建立多重SYBR Green Ⅰ定量PCR方法,对河北地区销售的鸡肉进行检测。结果,建立了多重定量PCR方法,与大肠杆菌、单增李斯特菌、副溶血性弧菌、志贺菌、绿脓杆菌、链球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌、阴沟肠杆菌等菌无交叉,最低检出...

实时荧光定量PCR所用仔猪组织内参基因的筛选

作者：宋如月; 王京煜; 陈万里; 冀池海; 曾宇晨; 潘昊鸣; 王衡 刊期：2019年第12期

为了保证在应用实时荧光定量PCR方法检测仔猪目的基因时,检测结果可以科学地用于多组织间的纵向比较,减少因内参基因在多组织间变化而带来的误差,筛选出能够在多组织间稳定表达的内参基因,对于目标基因的准确校正具有重要意义。本试验以4周龄仔猪不同组织(心、肝、脾、肺、肾、胰、气管、骨骼肌、肺门淋巴结、大肠、小肠、大脑、小脑)为试验样本...

Ghrelin在幼犬消化器官的表达及定位研究

作者：朱雪敏; 祝一鑫; 李梦云; 周刘涛; 王宇栋; 赵星; 刘情儿; 韩园园; 杨旭; 李祎博 刊期：2019年第12期

为探索Ghrelin在幼犬体内的表达及分布情况,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫组化染色对Ghrelin在消化器官的表达情况进行了定量及定位检测。RT-qPCR结果显示,在检测的12个消化器官中,Ghrelin相对表达量差异显著。胃的表达量最高,显著高于其他组织,其次是舌、十二指肠、肝、回肠、空肠、食管,而下颌腺、胰腺、盲肠、直肠的表达量较低,结肠的...

玉屏风多糖脂质体对雏鸡外周血集落刺激因子以及T淋巴细胞亚群和B淋巴细胞亚群的影响

作者：巫辅达; 徐志高; 马曼欣; 龚美玲; 邓桦; 杨少林; 杨鸿 刊期：2019年第12期

胆汁酸TGR5受体在疾病中的研究进展

作者：祁有朝; 李培锋 刊期：2019年第12期

TGR5受体是G蛋白偶联受体家族(G protein-coupled receptors,GPCRs)中的成员。TGR5受体在人类和动物中的许多组织如肾、肝、胃、小肠、肺等中都处于高表达,其中在胎盘和脾中的表达最高。TGR5不仅是胆汁酸的受体,也可以被其他的一些合成激动剂所激活介导一系列的信号通路,参与机体的生理和病理过程,如4-苯氧基-烟酰胺或4-苯氧基-嘧啶-5-甲酰胺化...